常見(jian)用於懸浮培養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)培養(yang)基(ji)配(pei)比方(fang)案(an)

更新(xin)時間(jian)：2022-07-19

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常(chang)見(jian)用於懸浮培養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)培養(yang)基(ji)配(pei)比方(fang)案(an)

培養(yang)基(ji)是(shi)生(sheng)物細胞(bao)進(jin)行(xing)體(ti)外(wai)培養(yang)的(de)重(zhong)要營養(yang)基(ji)質(zhi)。動物細胞(bao)在(zai)生(sheng)物反應(ying)器(qi)中(zhong)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)培養(yang)時主(zhu)要采(cai)用懸浮培養(yang)方(fang)式(shi)，用於懸浮培養(yang)的(de)培養(yang)基(ji)主(zhu)要有(you)以(yi)下幾(ji)種(zhong)：

壹(yi)、平(ping)衡鹽(yan)溶液：
平(ping)衡鹽(yan)溶液簡稱(cheng)BSS,它在(zai)細(xi)胞(bao)培養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong)主(zhu)要為(wei)細(xi)胞(bao)提(ti)供微量(liang)的無機鹽(yan)，起調(tiao)節(jie)培養(yang)基(ji)的(de)PH、維(wei)持(chi)滲透壓(ya)平(ping)衡等(deng)作(zuo)用。常用來作(zuo)為(wei)洗(xi)滌(di)液(ye)或配(pei)置稀釋(shi)培養(yang)基(ji)使(shi)用。實驗中常(chang)用的平(ping)衡鹽(yan)溶液有(you)NaCl溶液，Hanks，Earle’s平(ping)衡鹽(yan)，PBS緩(huan)沖(chong)液(ye)等(deng)。

壹(yi)般情(qing)況下(xia)，配(pei)制細(xi)胞消(xiao)化液(ye)或(huo)者(zhe)洗滌細(xi)胞時會采(cai)用Hanks或PBS，因(yin)為(wei)這(zhe)兩(liang)種(zhong)溶液中(zhong)幾(ji)乎(hu)不(bu)含(han)鈣、鎂離子，可(ke)以(yi)減(jian)少(shao)細(xi)胞(bao)的(de)粘附性(xing)。在(zai)密(mi)閉(bi)的培養(yang)器(qi)內(nei)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)培養(yang)時，多數則(ze)采(cai)用Hanks’溶液。

幾(ji)種(zhong)常(chang)用的平(ping)衡鹽(yan)溶液配(pei)置方(fang)案(an)（g/L）

名稱(cheng)	無Ca2+Mg2+PBS	含(han)Ca2+Mg2+PBS	Earle’s	Hanks’	D-Hanks’
ＮaCl	8.00	8.00	6.80	8.00	8.00
KCl	0.20	0.20	0.40	0.40	0.40
CaCl2	-	-	0.20	0.14	-
MgCl26H2O	-	0.1	-	-	-
MgSO47H2O	-	-	0.20	0.20	-
Na2HPO4	1.15	1.15	-	0.048	0.048
NaH2PO42H2O	-	-	0.14	-	-
KH2PO4	0.20	0.20	-	0.06	0.06
NaHCO3	-	-	2.20	0.35	0.35
葡萄糖	-	-	1.00	1.00	-
酚(fen)紅	-		0.01	0.01	0.01

二、動物體液(ye)、動物組織(zhi)提(ti)取液
這(zhe)類(lei)培養(yang)基(ji)主(zhu)要包含(han)血(xue)清、淋巴(ba)液、水解蛋(dan)白(bai)等(deng)。其(qi)中血(xue)清和水解乳蛋(dan)白(bai)是(shi)實(shi)驗中(zhong)使(shi)用較(jiao)多的培養(yang)基(ji)添(tian)加(jia)劑，同(tong)時也是(shi)細(xi)胞培養(yang)基(ji)中(zhong)的(de)主(zhu)要營養(yang)成(cheng)分(fen)，常使(shi)用的血(xue)清主要有(you)胎牛血(xue)清和新(xin)生(sheng)牛血(xue)清。雖然血(xue)清的營(ying)養(yang)成(cheng)分(fen)較(jiao)高(gao)，但(dan)是(shi)由於(yu)其(qi)內部(bu)成(cheng)分(fen)較(jiao)為(wei)復雜，容易導致下(xia)遊產(chan)物的分(fen)離、純化工(gong)序(xu)繁(fan)瑣(suo)。所(suo)以(yi)市場上(shang)逐(zhu)漸出(chu)現(xian)合成(cheng)型培養(yang)基(ji)，比(bi)如(ru)MEM、DMEM、PRMI1640等(deng).

三(san)、合(he)成(cheng)細胞(bao)培養(yang)基(ji)
合(he)成(cheng)細胞(bao)培養(yang)基(ji)是(shi)根(gen)據血(xue)液及(ji)細(xi)胞組成(cheng)成(cheng)分(fen)的研究(jiu)，確(que)定營養(yang)配(pei)比，將細胞(bao)生(sheng)長(chang)所(suo)需要的微(wei)生(sheng)物、氨(an)基(ji)酸、微(wei)量(liang)元(yuan)素(su)及(ji)平(ping)衡鹽(yan)溶液等(deng)安壹(yi)定比(bi)例(li)配(pei)比所(suo)研(yan)發出(chu)的(de)營養(yang)組(zu)合(he)型(xing)培養(yang)基(ji)。此類培養(yang)基(ji)廣(guang)泛(fan)適用於培養(yang)瓶(ping)、搖瓶(ping)細胞(bao)培養(yang)器(qi)和(he)生(sheng)物反應(ying)器(qi)等(deng)實驗設備(bei)中(zhong)。常用合成(cheng)型細(xi)胞(bao)培養(yang)基(ji)配(pei)方(fang)可(ke)參(can)考(kao)下表(biao)：

合(he)成(cheng)細胞(bao)培養(yang)基(ji)的(de)配(pei)比表(biao)（mg/L）

成(cheng)份（mg/L）	BEM	DMEM	DMEM/F12	199	MEM	RPMI1640
四水硝酸鈣(gai)	-	-	-	-	-	100
氯(lv)化鈣	200	200	116.6	200	200	-
硫酸銅(tong)	-	-	0.0013	-	-	-
九(jiu)水合硝酸鐵(tie)	-	0.1	0.05	0.70	-	-
七(qi)水合硫酸亞鐵(tie)	-	-	0.417	-	-	-
KCL	400	400	311.8	400	400	400
六水合氯化(hua)鎂	-	-	28.64	-	-	-
無水硫酸鎂	97.67	97.67	48.84	97.67	97.67	48.84
氯化(hua)鈉	6800	6400	6999.5	6800	6800	6000
H2NaO4P	121.7	108.7	54.35	121.74	121.74	-
Na2HPO4	-	-	71.02	-	-	800
七(qi)水合硫酸鋅(xin)	-	—	0.432	-	-	-
L-鹽(yan)酸精氨(an)酸	21	84	147.5	70	126	200
L-胱(guang)氨(an)酸鹽(yan)酸鹽(yan)	15.65	63	31.29	26	31.29	65.15
L-谷氨(an)酰(xian)胺(an)	292	584	365	100	292	300
甘(gan)氨(an)酸	-	30	18.75	50	-	10
L-鹽(yan)酸組(zu)氨(an)酸	15	42	31.48	21.88	42	15
L-異(yi)亮(liang)氨(an)酸	26	105	54.47	40	52	50
L-亮(liang)氨(an)酸	26	105	59.05	60	52	50
L-鹽(yan)酸賴(lai)氨(an)酸	36.47	146	91.25	70	72.5	40
L-甲硫氨(an)酸	7.5	30	17.24	15	15	15
L-苯丙氨(an)酸	16.5	66	35.48	25	32	15
L-絲氨(an)酸	-	42	26.25	25	-	30
L-蘇(su)氨(an)酸	24	95	53.45	30	48	20
L-丙(bing)氨(an)酸	-	-	4.45	25	-	-
L-谷(gu)氨(an)酸	-	-		75	-	20
L-門(men)冬酰(xian)胺(an)	-	-	7.5		-	50
L-門(men)冬氨(an)酸	-		6.65	30	-	20
L-鹽(yan)酸半胱氨(an)酸	-	-	17.56	0.11	-	-
L-谷(gu)氨(an)酸	-	-	7.35	-	-	-
L-脯(pu)氨(an)酸	-	-	17.25	-	-	20
L-羥(qiang)脯(pu)氨(an)酸	-	-		10	-	20
L-色(se)氨(an)酸	4	16	9.02	10	10	5
L-酪(lao)氨(an)酸	18	72	38.4	40	36	20
L-纈(xie)氨(an)酸	23.5	94	52.85	25	46	20
腺(xian)嘌(piao)呤(ling)硫(liu)酸鹽(yan)	-	-	-	10	-	-
腺苷酸	-	-	-	0.20	-	-
ADT	-	-	-	1	-	-
膽固醇(chun)	-	-	-	0.20	-	-
2-脫氧-D-核糖(tang)	-	-	-	0.50	-	-
無水葡萄糖	1000	1000	3151	1000	1000	2000
谷胱(guang)甘(gan)肽（還(hai)原型(xing)）	-	-	-	0.05	-	1
鳥嘌(piao)呤(ling)鹽(yan)酸鹽(yan)	-	-	-	0.30	-	-
HEPES	-	-	3574.5	-	-	-
次yellow嘌(piao)-呤(ling)	-	-	2	0.30	-	-
亞油酸	-	-	0.042	-	-	-
硫(liu)辛(xin)酸	-	-	0.105	-	-	-
苯酚(fen)紅	10	15	8.10	20	10	5
D-核糖	-	-	-	0.50	-	-
乙(yi)酸鈉(na)	-	-	-	50	-	-
胸腺嘧啶(ding)	-	-	-	0.30	-	-
聚(ju)山梨酯80	-	-	-	20	-	-
尿(niao)嘧啶(ding)	-	-	-	0.30	-	-
yellow 嘌(piao)-呤(ling)	-	-	-	0.30	-	-
V-C	-	-	-	0.05	-	-
V-E	-	-	-	0.01	-	-
1,4-丁(ding)二(er)胺(an)酸鹽(yan)	-	-	0.081	-	-	-
丙酮(tong)酸鈉(na)	-	110	55	-	-	-
D-生(sheng)物素	1	-	0.0035	0.01	-	0.2
V-D2	-	-	-	0.10	-	-
泛(fan)酸鈣(gai)	1	4	2.24	0.01	1	0.25
氯(lv)化膽堿	1	4	8.98	0.50	1	3
葉(ye)酸	1	4	2.65	0.01	1	1
肌(ji)醇(chun)	2	7.2	12.6	0.05	2	35
V-K3	-	-	-	0.01	-	-
煙(yan)酸	-	-	-	0.025	-	-
煙(yan)酰(xian)胺(an)	1	4	2.02	0.025	1	1
對(dui)氨(an)基(ji)苯甲酸	-	-	-	0.05	-	1
鹽(yan)酸吡(bi)哆醛(quan)	1	4	2	0.025	1	-
V-B6	-	-	0.031	0.025	-	1
V-B2	0.1	0.4	0.219	0.01	0.1	0.2
V-B1	1	4	2.17	0.01	1	1
胸苷	-	-	0.365	-	-	-
V-B12	-	-	0.68	-	-	0.005
V-A	-	-	-	0.14	-	-
pH（無碳(tan)酸氫(qing)鈉(na)）	5.60～6.20	3.20～3.80	5.50～6.10	3.90～4.50	5.60～6.20	7.20～7.80
pH（加(jia)碳(tan)酸氫(qing)鈉(na)）	7.40～8.00	7.20～7.80	6.50～7.10	7.00～7.60	7.30～7.90	7.50～8.10
滲透壓(ya)（無碳(tan)酸氫(qing)鈉(na)）	238～263	238～263	265～293	238～263	238～263	225～249
滲透壓(ya)（加(jia)碳(tan)酸氫(qing)鈉(na)）	285～315	300～332	284～314	274～302	280～310	265～293

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