LightNing® EcoRV內(nei)切酶(mei)是壹(yi)系(xi)列(lie)經(jing)過基(ji)因(yin)工(gong)程(cheng)重組(zu)的(de)快(kuai)速限制性內(nei)切酶(mei)，適(shi)用(yong)於質粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或基(ji)因(yin)組(zu) DNA 等的(de)快(kuai)速酶(mei)切(qie)。所(suo)有(you) LightNing® 快(kuai)速(su)內(nei)切酶(mei)在(zai)通(tong)用的(de) CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具(ju)有(you)優(you)良的(de)活(huo)性，能夠在 5~15 分鐘(zhong)內(nei)完成酶(mei)切(qie)。

LightNing® EcoRV內(nei)切酶(mei)組(zu)成(cheng)

特(te)性和用法

LightNing® EcoRV內(nei)切酶(mei)，可(ke)在5~15 min內(nei)完成反(fan)應

u建議(yi)反應(ying)條(tiao)件

1× CutOne®緩沖(chong)液(ye)；

37℃溫(wen)育(yu)；

參照“DNA 快(kuai)速酶(mei)切(qie)流(liu)程(cheng)"配(pei)制(zhi)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)。

u失(shi)活條(tiao)件

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u甲(jia)基(ji)化(hua)敏感性

對(dui)於被 CpG 對(dui)甲基(ji)化(hua)的(de) DNA，剪切(qie)可(ke)能受(shou)阻，

對(dui)於被 EcoBI 甲(jia)基(ji)化(hua)的(de) DNA，剪切(qie)可(ke)能受(shou)阻。

u儲(chu)運(yun)條(tiao)件

-20℃

相關(guan)問(wen)答

Q:為(wei)什麽(me)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入(ru)HSA？

A:壹(yi)些酶(mei)在(zai)反(fan)應過程(cheng)中(zhong)需(xu)要HSA的(de)參與(yu)，我(wo)們(men)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)添(tian)加(jia)了(le)HSA，避免反應中(zhong)額(e)外添(tian)加(jia)組(zu)分，使得酶(mei)切(qie)反(fan)應更加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的(de)添(tian)加(jia)對(dui)於雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制性內(nei)切酶(mei)的(de)功(gong)能會(hui)產(chan)生什麽(me)樣(yang)的(de)影(ying)響？

A:在(zai)我(wo)們(men)的(de)測(ce)試中(zhong)未(wei)曾發現HSA對(dui)於雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制性內(nei)切酶(mei)的(de)功(gong)能有任(ren)何影響。在(zai)有些情(qing)況(kuang)下(xia)，對(dui)於部(bu)分的(de)酶(mei)切(qie)反(fan)應有促(cu)進作用(yong)。

Q:我(wo)需(xu)要嚴格(ge)遵守5~15 min的(de)酶(mei)切(qie)時(shi)間嗎？能夠延長反(fan)應(ying)時(shi)間嗎？

A:雷(lei)霆系(xi)列(lie)限(xian)制性內(nei)切酶(mei)經(jing)過(guo)改造可(ke)以將(jiang)酶(mei)切(qie)時(shi)間縮短(duan)至(zhi)5~15 min。同樣也(ye)消(xiao)除(chu)了(le)限(xian)制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的(de)星(xing)活(huo)性（長時間反應造成的(de)非(fei)特(te)異(yi)性消化(hua)），在(zai)說(shuo)明(ming)書(shu)中(zhong)告(gao)知的(de)星(xing)活(huo)性出現的(de)時(shi)間範圍內(nei)可(ke)以適當(dang)延長反應時(shi)間。

Q:我(wo)什麽(me)時(shi)候(hou)應(ying)當(dang)考(kao)慮(lv)星(xing)活(huo)性對(dui)於酶(mei)切(qie)反(fan)應的(de)影(ying)響？

A:如(ru)果(guo)額(e)外的(de)酶(mei)切(qie)條(tiao)帶對(dui)於實驗結果(guo)會(hui)產(chan)生影(ying)響時(shi)我(wo)們(men)應(ying)當考(kao)慮星(xing)活(huo)性對(dui)於酶(mei)切(qie)反(fan)應的(de)影(ying)響。例如(ru)：進行基(ji)因(yin)型(xing)、突變型(xing)分析或克隆(long)時我(wo)們(men)應(ying)當避免星(xing)活(huo)性的(de)產(chan)生。避免星(xing)活(huo)性的(de)有(you)效方(fang)法：適(shi)當擴大(da)反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)（較小(xiao)的(de)反(fan)應體(ti)積(ji)容易造成甘油體(ti)積(ji)達到或超(chao)過總反(fan)應體(ti)積(ji)的(de)5%）；不(bu)進行超(chao)長時(shi)間孵(fu)育(yu)（過(guo)夜(ye)消化(hua)極(ji)易產(chan)生星(xing)活(huo)性）。

Q:有(you)哪些關鍵因(yin)素(su)會(hui)導(dao)致星(xing)活(huo)性？

A:長(chang)時間孵(fu)育(yu)、過(guo)量的(de)酶(mei)、高(gao)甘油含量（通(tong)常(chang)高(gao)於5%）、較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應體(ti)系(xi)等因素(su)都(dou)會(hui)導(dao)致星(xing)活(huo)性的(de)產(chan)生。

Q:未(wei)經(jing)純(chun)化(hua)的(de)PCR產(chan)物直(zhi)接(jie)酶(mei)切(qie)要怎樣(yang)設(she)定體(ti)系(xi)？

A:反(fan)應體(ti)系(xi)推(tui)薦(jian)由這些內(nei)容組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的(de)限(xian)制性內(nei)切酶(mei)、ddH2O補(bu)齊到30 μl。酶(mei)的(de)用(yong)量根(gen)據(ju)PCR產(chan)物的(de)濃(nong)度(du)而定，只(zhi)加(jia)入(ru)2 μl反(fan)應緩沖(chong)液(ye)的(de)原(yuan)因(yin)是PCR反(fan)應中(zhong)存(cun)在對(dui)應的(de)鹽離子(zi)和(he)金屬離子(zi)，適(shi)當減(jian)少反應緩沖(chong)液(ye)的(de)用(yong)量以保(bao)證(zheng)最(zui)終(zhong)反(fan)應體(ti)系(xi)中(zhong)的(de)環(huan)境適宜限制性內(nei)切酶(mei)發(fa)揮(hui)功(gong)能(neng)。

Q:限(xian)制性內(nei)切酶(mei)簡(jian)並(bing)性識(shi)別位點(dian)壹定(ding)是回(hui)文(wen)的(de)嗎？

A:大(da)多(duo)數(shu)二型限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的(de)識(shi)別序(xu)列是回(hui)文(wen)的(de)，而(er)且是特(te)定(ding)的(de)堿(jian)基(ji)序(xu)列。然(ran)而(er)有(you)些限制性內(nei)切酶(mei)具(ju)有(you)簡(jian)並(bing)性識(shi)別位點(dian)，也(ye)就(jiu)是說(shuo)識(shi)別位點(dian)中(zhong)有(you)壹(yi)個(ge)或以上的(de)堿(jian)基(ji)對(dui)是非(fei)特(te)異(yi)的(de)（例如(ru)：BsrfI識(shi)別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於這(zhe)樣(yang)的(de)具(ju)有簡(jian)並(bing)性識(shi)別位點(dian)的(de)限(xian)制性內(nei)切酶(mei)，只(zhi)要是符(fu)合要求的(de)序(xu)列皆(jie)能被識(shi)別並(bing)且被正確地切割(ge)（例如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其(qi)中(zhong)兩個並(bing)不是回(hui)文(wen)的(de)，仍(reng)然能被BsrFI識(shi)別並(bing)且切割(ge)）。