LightNing® ApaLI內(nei)切(qie)酶是壹(yi)系(xi)列(lie)經(jing)過(guo)基(ji)因(yin)工(gong)程(cheng)重(zhong)組的快(kuai)速(su)限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶，適用(yong)於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或(huo)基(ji)因(yin)組 DNA 等(deng)的快(kuai)速(su)酶切(qie)。所有(you) LightNing® 快速(su)內(nei)切(qie)酶在通用(yong)的 CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中都具(ju)有(you)優(you)良(liang)的活(huo)性，能(neng)夠在 5~15 分(fen)鐘(zhong)內(nei)完(wan)成(cheng)酶切(qie)。

LightNing® ApaLI內(nei)切(qie)酶組(zu)成(cheng)

特性和用(yong)法

LightNing® ApaLI內(nei)切(qie)酶，可在5~15 min內(nei)完(wan)成(cheng)反應(ying)

u建議反(fan)應條件

1× CutOne®緩沖(chong)液(ye)；

37℃溫(wen)育；

參(can)照(zhao)“DNA 快速(su)酶切(qie)流程(cheng)"配制(zhi)反應體(ti)系(xi)。

u失活條件

80℃溫(wen)育20 min。

u甲基(ji)化(hua)敏感(gan)性

對(dui)於被(bei) CpG 甲基(ji)化(hua)的 DNA，剪(jian)切(qie)可能(neng)受阻，

對(dui)於被(bei) EcoKI 甲基(ji)化(hua)的 DNA，剪(jian)切(qie)可能(neng)受阻。

u存儲條件

-20℃

相(xiang)關(guan)問答

Q:為(wei)什(shen)麽在CutOne® Buffer中加入(ru)HSA？

A:壹(yi)些酶在反應(ying)過(guo)程中需要HSA的參(can)與(yu)，我們(men)在CutOne® Buffer中添加了HSA，避免反(fan)應中(zhong)額外(wai)添加組(zu)分(fen)，使得(de)酶(mei)切(qie)反應更加便(bian)捷。

Q:HSA的添加對(dui)於雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶的功(gong)能(neng)會(hui)產(chan)生什(shen)麽(me)樣的影響？

A:在我們(men)的測(ce)試(shi)中未(wei)曾發現HSA對(dui)於雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶的功(gong)能(neng)有任(ren)何(he)影響。在有些情(qing)況下，對(dui)於部(bu)分(fen)的酶(mei)切反應(ying)有(you)促進(jin)作(zuo)用(yong)。

Q:我需要嚴格遵(zun)守5~15 min的酶(mei)切時(shi)間嗎(ma)？能(neng)夠延(yan)長(chang)反應(ying)時(shi)間嗎(ma)？

A:雷霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶經(jing)過(guo)改(gai)造(zao)可以將(jiang)酶(mei)切時(shi)間縮(suo)短至(zhi)5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消除了限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶的星(xing)活(huo)性（長時(shi)間反(fan)應造(zao)成(cheng)的非(fei)特異性消化(hua)），在說明(ming)書中(zhong)告(gao)知(zhi)的星(xing)活(huo)性出(chu)現的時(shi)間範(fan)圍(wei)內(nei)可以適當(dang)延長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間。

Q:我什(shen)麽時(shi)候(hou)應(ying)當(dang)考慮(lv)星(xing)活(huo)性對(dui)於酶(mei)切(qie)反應(ying)的影響？

A:如果(guo)額外的酶(mei)切條帶(dai)對(dui)於實驗(yan)結果(guo)會(hui)產(chan)生影響時(shi)我們(men)應當(dang)考慮(lv)星(xing)活(huo)性對(dui)於酶(mei)切(qie)反應(ying)的影響。例(li)如：進(jin)行(xing)基(ji)因(yin)型、突(tu)變(bian)型分(fen)析(xi)或克(ke)隆時(shi)我們(men)應當(dang)避免(mian)星(xing)活(huo)性的產(chan)生。避(bi)免(mian)星(xing)活(huo)性的有(you)效(xiao)方(fang)法：適當(dang)擴大反(fan)應體(ti)積(ji)（較(jiao)小(xiao)的反(fan)應體積(ji)容易(yi)造(zao)成(cheng)甘(gan)油(you)體積(ji)達到或(huo)超(chao)過總反應體(ti)積(ji)的5%）；不進(jin)行(xing)超長(chang)時(shi)間孵育（過(guo)夜(ye)消化(hua)極易(yi)產(chan)生星(xing)活(huo)性）。

Q:有哪(na)些關(guan)鍵(jian)因素會(hui)導致(zhi)星(xing)活(huo)性？

A:長時(shi)間孵育、過(guo)量(liang)的酶(mei)、高甘(gan)油(you)含(han)量（通常(chang)高於5%）、較(jiao)小(xiao)的反(fan)應體系(xi)等(deng)因素都會(hui)導致(zhi)星(xing)活(huo)性的產(chan)生。

Q:未經(jing)純化(hua)的PCR產(chan)物直(zhi)接酶(mei)切要(yao)怎樣(yang)設(she)定(ding)體系(xi)？

A:反應體(ti)系推(tui)薦(jian)由這(zhe)些內(nei)容(rong)組成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應(ying)的限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶、ddH2O補齊到30 μl。酶的用(yong)量根(gen)據PCR產(chan)物的濃(nong)度(du)而定(ding)，只加入(ru)2 μl反應緩沖(chong)液(ye)的原因是PCR反應中(zhong)存在對(dui)應(ying)的鹽(yan)離(li)子和(he)金(jin)屬離(li)子，適當(dang)減少反應緩沖(chong)液(ye)的用(yong)量以保(bao)證最(zui)終(zhong)反(fan)應(ying)體系中的環(huan)境適宜(yi)限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶發揮(hui)功(gong)能(neng)。

Q:限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶簡(jian)並(bing)性識別位(wei)點(dian)壹(yi)定(ding)是回(hui)文的嗎(ma)？

A:大多數二型(xing)限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶的識(shi)別序列(lie)是回(hui)文的，而(er)且是特定(ding)的堿(jian)基(ji)序(xu)列(lie)。然而(er)有些限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶具(ju)有簡(jian)並(bing)性識別位(wei)點(dian)，也(ye)就(jiu)是說識(shi)別(bie)位(wei)點(dian)中(zhong)有(you)壹(yi)個(ge)或(huo)以(yi)上(shang)的堿(jian)基(ji)對(dui)是非特異的（例(li)如：BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於這(zhe)樣(yang)的具(ju)有簡(jian)並(bing)性識別位(wei)點(dian)的限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶，只(zhi)要是符(fu)合要求(qiu)的序(xu)列(lie)皆能(neng)被識(shi)別(bie)並且(qie)被正(zheng)確(que)地(di)切(qie)割(ge)（例(li)如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中兩個並(bing)不(bu)是回(hui)文的，仍(reng)然(ran)能(neng)被BsrFI識別並(bing)且切(qie)割）。