HyCyte成(cheng)人(ren)骨(gu)髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞(bao) 取(qu)自(zi)18-45歲(sui)成(cheng)人(ren)骨(gu)髓(sui)，傳代擴增至(zhi)第(di)二(er)代凍存。本(ben)產品(pin)經(jing)生(sheng)物安(an)全檢測，無(wu)細(xi)菌(jun)、真菌(jun)、黴菌(jun)、支(zhi)原體(ti)和病毒(du)汙染(ran)，表(biao)達(da)多(duo)種(zhong)人(ren)源(yuan)間(jian)質(zhi)幹細(xi)胞(bao)特(te)異性(xing)標(biao)記，具(ju)有良好(hao)的(de)增殖和分化潛能(neng)，可分化為成(cheng)骨(gu)細(xi)胞(bao)、脂肪細(xi)胞(bao)、軟骨(gu)細(xi)胞(bao)等。

HyCyte成(cheng)人(ren)骨(gu)髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞(bao)

Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells（H BMSCs）

HyCyte成(cheng)人(ren)骨(gu)髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞(bao) 取(qu)自(zi)18-45歲(sui)成(cheng)人(ren)骨(gu)髓(sui)，傳代擴增至(zhi)第(di)二(er)代凍存。本(ben)產品(pin)經(jing)生(sheng)物安(an)全檢測，無(wu)細(xi)菌(jun)、真菌(jun)、黴菌(jun)、支(zhi)原體(ti)和病毒(du)汙染(ran)，表(biao)達(da)多(duo)種(zhong)人(ren)源(yuan)間(jian)質(zhi)幹細(xi)胞(bao)特(te)異性(xing)標(biao)記，具(ju)有良好(hao)的(de)增殖和分化潛能(neng)，可分化為成(cheng)骨(gu)細(xi)胞(bao)、脂肪細(xi)胞(bao)、軟骨(gu)細(xi)胞(bao)等。

細(xi)胞(bao)名(ming)稱(cheng)：成(cheng)人(ren)骨(gu)髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞(bao)

細(xi)胞(bao)簡(jian)稱(cheng)：H MSC

產(chan)品(pin)貨號(hao)：BMHX-C106

種(zhong)屬來(lai)源(yuan)：人(ren)

規格：1× 10^6 cells/Vial

組織(zhi)來(lai)源(yuan)：骨(gu)髓(sui)

細(xi)胞(bao)形(xing)態：成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣

生(sheng)長特(te)性：貼壁(bi)生(sheng)長

配套培(pei)養(yang)基(ji)貨號(hao)：BMHX-G101

傳代比例(li)：1:3-1:6，每(mei)2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

傳代周(zhou)期：48-72 h

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)：氣(qi)相(xiang)：95%空(kong)氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條(tiao)件：60%基(ji)礎(chu)培(pei)養(yang)基(ji)+30%FBS+10%DMSO，液(ye)氮儲(chu)存(cun)

質量檢測：細(xi)菌(jun)、真菌(jun)、支(zhi)原體(ti)檢測(ce)均(jun)為陰(yin)性

毒(du)素檢測(ce)：＜10 EU/mL

參考(kao)文(wen)獻：

Bartsch T,Falke T , Brehm M. Intra-arterial and intrarnuscular transplanta-tion of adult , autologous bone marrow stem cells. Novel treatment for thera-py refractory peripheral arterial occlusive disease[ J]. Dtsch Med Wochen-schr ,2006 ; 131(3):79-83.

Sohara Y , Shimada H , Minkin C,et al.Bone marrow mesenchymal stemcells provide an alternate pathway of osteoclast activation and bone de-struction by cancer cells[ J]. Cancer Res , 2005 ;65(4):1129-35.

Assali AR , Moustapha A , Sdringola S,et al. Acute coronary syndrome mayoccur with instent restenosis and is associated with adverse outcomes ( thePRESTO trial)[J].Am J Cardiol ,2006;98(6):729-33.

Iso Y, Spees JL,Serrano C,et al.Multipotent human stromal cells improve cardiac function after myocardial infarction in mice without long-term en-graftment[J].Biochem Biophys Res Commun ,2007;354(3):700-6.5

Friendenstein AJ, Chailakhyan RK , Cerasimov Uv ,et al. Bone marrow osteogenic stem cells :in vitro c*tion and transplantation in diffusionchambers[ J ]. Cell Tissue Kinet , 1987;20(3);263-72.

| 收(shou)貨後(hou)處理(li)方法

收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後請檢查包(bao)裝是(shi)否完整(zheng)，幹冰是(shi)否充足，凍存管(guan)有無(wu)破(po)損(sun)，並核(he)對管(guan)身標(biao)簽信(xin)息(xi)和數量，

確(que)認是(shi)否與裝箱(xiang)單壹(yi)致(zhi)。如有異常(chang)情況(kuang)，請及時與(yu)我們聯系(xi)。

如(ru)不立即(ji)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)，請將細(xi)胞(bao)放至(zhi)-80℃或液氮中(zhong)保(bao)存。

| 產(chan)品(pin)描(miao)述(shu)

蘇州(zhou)阿(e)爾法(fa)生(sheng)物實(shi)驗(yan)器材有限(xian)公(gong)司提(ti)供的(de)間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)取(qu)自(zi)成(cheng)人(ren)骨(gu)髓(sui)，經(jing)檢(jian)測(ce)，確(que)保細(xi)胞(bao)無(wu)細(xi)菌(jun)、真菌(jun)、支(zhi)原體(ti)和病毒(du)汙染(ran)，表(biao)達(da)多(duo)種(zhong)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細(xi)胞(bao)特(te)異性(xing)表(biao)面標(biao)記，具(ju)有良好(hao)的(de)增殖和分化潛能(neng)，經(jing)定向(xiang)誘(you)導，可分化為脂肪細(xi)胞(bao)、成(cheng)骨(gu)細(xi)胞(bao)、成(cheng)軟骨(gu)細(xi)胞(bao)等。

凍存代次： P2

培(pei)養(yang)體(ti)系(xi)： HyCyteTM成(cheng)人(ren)骨(gu)髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)（Cat. BMHX-G101）

換(huan)液(ye)時機(ji)： 發(fa)現有比較(jiao)多(duo)的(de)死細(xi)胞(bao)或培(pei)養(yang)基(ji)顏色(se)較(jiao)黃時，應(ying)換(huan)液(ye)。壹(yi)般為每(mei) 2-3 天換(huan)液(ye)

傳代比例(li)： 壹(yi)般為 1:2

傳代周(zhou)期： 細(xi)胞(bao)匯(hui)合度達 80%~90%時，可進行(xing)傳代，壹(yi)般為 48~72 h，

不可讓間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)融(rong)合或過度融(rong)合，以(yi)免發(fa)生(sheng)生(sheng)長接(jie)觸抑(yi)制，影(ying)響細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長狀態。

培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)： 氣(qi)相(xiang)：95%空(kong)氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條(tiao)件： 海星壹(yi)步(bu)凍存液(ye) HyCyteTM One Step Freezing Medium（Cat. GUCP-R201）

NOTE：該(gai)產品(pin)僅供(gong)科研(yan)使用(yong)，不可用(yong)於其(qi)他方面。

使用(yong)說明(ming)書(shu)：

| HyCyteTM H BMSCs 的(de)復(fu)蘇

1) 實(shi)驗(yan)前(qian)開啟(qi)水浴(yu)鍋(guo)預熱(re)培(pei)養(yang)基(ji)。

2) 在(zai)工(gong)作臺(tai)中(zhong)準(zhun)備好 15 mL 離(li)心管(guan)加入(ru) 5 mL預熱(re)後的(de)培(pei)養(yang)基(ji)。

3) 從-80°C 冰箱(xiang)中取(qu)出凍存管(guan)，將凍存管(guan)置於(yu)37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)內，快速(su)搖動解(jie)凍直到(dao)內容物融(rong)化，同(tong)時需註意(yi)避免水面沒(mei)過管(guan)口。

NOTE：建(jian)議將液氮中(zhong)的(de)細(xi)胞(bao)提(ti)前(qian)取(qu)出置(zhi)於-80°C 待(dai)液(ye)氮揮(hui)發(fa)後復(fu)蘇。

4) 對凍存管(guan)外壁(bi)進行(xing)常(chang)規消毒(du)後，在(zai)工(gong)作臺(tai)內小(xiao)心開蓋，盡量避免氣泡溢(yi)出(chu)，輕(qing)柔(rou)吹(chui)打(da)數(shu)次，轉(zhuan)移至(zhi) 15 mL 離(li)心(xin)管(guan)內。使用(yong) 1 mL 培(pei)養(yang)基(ji)

清(qing)洗凍存管(guan)內壁，壹(yi)並(bing)收(shou)集(ji)至(zhi) 15 mL 離(li)心(xin)管(guan)內。

5) 250 g 離心(xin) 5 min，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈澱，棄掉上清並(bing)加入(ru) 2 mL 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸（如有臺(tai)盼(pan)藍可取(qu)少量進行(xing)染(ran)色(se)計(ji)數）。

6) 將重懸後的(de)細(xi)胞(bao)接(jie)種(zhong)至(zhi) T25 或同等(deng)底面積器皿(min)，“劃十字"搖晃(huang)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)器(qi)皿(min)，使細(xi)胞(bao)均(jun)勻(yun)分布。把(ba)細(xi)胞(bao)放入(ru) 37°C，5%CO2，飽(bao)和濕度的(de)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。

7) 24h 後(hou)鏡(jing)下(xia)拍(pai)照(zhao)觀(guan)察(cha)，換(huan)液(ye)後繼續培(pei)養(yang)。如(ru)有異常(chang)情況(kuang)，請及時與(yu)我們聯系(xi)。

| HyCyteTM H BMSCs 的(de)傳代

1) 預熱(re) 1×PBS、胰酶(mei)和培(pei)養(yang)基(ji)。

2) 吸去原培(pei)養(yang)基(ji)。用(yong) 1×PBS 洗滌細(xi)胞(bao) 2~3 次。

3) 吸去 1×PBS。加入(ru)胰酶(mei)。輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉(zhuan)，使胰酶 覆蓋細(xi)胞(bao)表(biao)面，消化，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)約(yue) 70%~80%左(zuo)右的(de)細(xi)胞(bao)變圓(yuan)後(hou)，用(yong)手輕(qing)拍(pai)培(pei)養(yang) 器(qi)皿(min)外壁(bi)使細(xi)胞(bao)脫壁。

4) 當觀(guan)察(cha)到(dao)細(xi)胞(bao)明(ming)顯(xian)脫落(luo)，立即(ji)加入(ru)預熱(re)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消化(hua)。用(yong)吸管(guan)吸取(qu)液體(ti)，反(fan)復(fu)輕(qing) 柔吹打(da)培(pei)養(yang)器(qi)皿(min)底壁，使細(xi)胞(bao)脫離器皿(min)底壁。

NOTE：建(jian)議可添(tian)加 2 倍(bei)胰(yi)酶(mei)用(yong)量的(de)完培(pei)用(yong)於 終(zhong)止消化(hua)。

5) 將細(xi)胞(bao)懸液轉(zhuan)移到(dao)離心(xin)管(guan)中。用(yong) 1xPBS 清洗 底壁，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)懸液至(zhi)離(li)心(xin)管(guan)中。

6) 250 g 離(li)心(xin) 5 min。

7) 小(xiao)心棄去(qu)上清液(ye)，加入(ru) 1~2mL 完培(pei)重(zhong) 懸細(xi)胞(bao)。

8) 選擇(ze)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)器(qi)皿(min)，加入(ru)適量完培(pei)， 按照(zhao)合(he)適的(de)傳代比例(li)（壹(yi)般為 1:2）接(jie)種(zhong)細(xi)胞(bao),“劃十字"搖晃(huang)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)器(qi)皿(min)，使細(xi)胞(bao)均(jun)勻(yun)分布。

9) 把(ba)細(xi)胞(bao)放入(ru) 37°C，5%CO2，飽(bao)和濕度的(de)培(pei)養(yang) 箱(xiang)中培(pei)養(yang)。

HyCyteTM H BMSCs 的(de)凍存

1) 待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)可傳代的(de)匯(hui)合度，即(ji)可消化(hua)準(zhun)備 凍存。

2) 消(xiao)化細(xi)胞(bao)，取(qu)少量細(xi)胞(bao)懸液計(ji)數(shu)。細(xi)胞(bao)懸液經(jing) 250 g離(li)心(xin)5 min。

3) 小(xiao)心棄掉上清。用(yong)4°C預冷(leng)的(de)凍存液(ye)重懸細(xi)胞(bao)， 壹(yi)般凍存密(mi)度為1×10^6個(ge)/mL。

4) 對凍存管(guan)進行(xing)標(biao)識後(hou)，把(ba)細(xi)胞(bao)分裝到(dao)凍存管(guan)中， 旋(xuan)緊凍存管(guan)蓋。

5) 如使用(yong)HyCyteTM海星壹(yi)步(bu)凍存液(ye)，凍存管(guan)直接(jie) 豎(shu)直放入(ru)-80°C冰箱(xiang)即(ji)可。 如使用(yong)程序凍存液(ye)，需將凍存管(guan)放入(ru)程序降溫 盒(he)後方可放入(ru)-80°C冰箱(xiang)。

6) 24小(xiao)時後可將細(xi)胞(bao)轉(zhuan)移到(dao)液氮進(jin)行(xing)長(chang)期保存(cun)。