HyCyte 人脂(zhi)肪(fang)間充質幹(gan)細胞(bao)-細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學產(chan)品 簡稱：H ADSC；HyCyte 人脂(zhi)肪(fang)間充質幹(gan)細胞(bao) 培(pei)養(yang)基(ji)貨號：ADHX-G102；細(xi)胞(bao)形態：成纖維(wei)細胞(bao)樣

HyCyte 人脂(zhi)肪(fang)間充質幹(gan)細胞(bao)-細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學產(chan)品

HyCyte 人脂肪(fang)間充質幹(gan)細胞(bao)-細(xi)胞(bao)生(sheng)物(wu)學產(chan)品

細胞簡稱(cheng)：H ADSC

產(chan)品貨號：ADHX-C106

種(zhong)屬(shu)來源：人(ren)

組(zu)織來源：脂(zhi)肪(fang)

細胞(bao)形態：成纖維(wei)細胞(bao)樣

生(sheng)長特(te)性：貼壁生(sheng)長

培養(yang)基(ji)貨號：ADHX-G102

傳(chuan)代(dai)比(bi)例：1:3-1:6，每(mei)2-3天(tian)換液壹(yi)次

傳(chuan)代(dai)周期：48-72 h

培養(yang)條(tiao)件(jian)：氣相：95%空(kong)氣+5%CO2，溫(wen)度：37℃

凍(dong)存(cun)條(tiao)件(jian)：60%基(ji)礎(chu)培養(yang)基(ji)+30%FBS+10%DMSO，液氮(dan)儲(chu)存(cun)

質量檢(jian)測(ce)：細菌、真(zhen)菌、支原(yuan)體檢(jian)測(ce)均(jun)為(wei)陰性

毒素(su)檢(jian)測(ce)：＜10 EU/mL

參考(kao)文(wen)獻：

Bianco P, Robey P G,Simmons P J. Mesenchymal stem cells: revisiting history , concepts, and assays[J]. Cell Stem Cell, 2008,2(4):313

Bassi G, Pacelli L, Carusone R, et ai. Adipose-derived stromal cells(ASCs)[J]. Transfus Apher Sci, 2012,47(2):193

DelaRosa O, Sanchez-Correa B, Morgado S, et al. Human adipose derived stem cells impair natural killer cell function and exhibitlow susceptibility to natural killer mediated lysis[J]. Stem Cells Dev,2012,21(8):1333

Estes B T，Diekman B O,Gimble J M, et al. Isolation of adipose derived stem cells and their induction to a chondrogenic phenotype[J]. Nat Protoc,2010,5(7):1294

Bassi G,Pacelli L, Carusone R, et al. Adipose derived stromal cells (ASCs)[J].Transfus Apher Sci,2012,47(2): 193

Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells（H ADSCs）

貨(huo)號：ADHX-C106

規(gui)格(ge)：1×10^6 cells/Vial |

收(shou)貨(huo)後處理方法(fa):

收(shou)到(dao)細胞(bao)後請(qing)檢(jian)查(zha)包裝是否(fou)完整，幹(gan)冰是(shi)否(fou)充足，凍(dong)存(cun)管有(you)無破損(sun)，並核(he)對(dui)管身標簽信(xin)息和(he)數量(liang)， 確(que)認是(shi)否與裝箱單(dan)壹(yi)致。如(ru)有(you)異常(chang)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時與我(wo)們聯(lian)系(xi)。 如不立即進行(xing)實驗，請(qing)將(jiang)細胞(bao)放(fang)至(zhi)-80℃或液氮(dan)中保存。

凍(dong)存(cun)代(dai)次： P2 培(pei)養(yang)體(ti)系(xi)： HyCyteTM成人脂(zhi)肪(fang)間充質幹(gan)細胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)（Cat. ADHX-G101）

換液時機： 發(fa)現有(you)比(bi)較多的(de)死(si)細胞(bao)或(huo)培養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)較黃時，應(ying)換液。壹(yi)般為(wei)每(mei) 2-3 天(tian)換液

傳(chuan)代(dai)比(bi)例： 壹(yi)般為(wei) 1:2

傳(chuan)代(dai)周期： 細胞匯(hui)合(he)度達 80%~90%時，可進行(xing)傳(chuan)代(dai)，壹(yi)般為(wei) 48~72 h，不可讓間(jian)充質幹(gan)細 胞(bao)全(quan)融(rong)合(he)或過度融合(he)，以免(mian)發(fa)生(sheng)生(sheng)長接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)，影(ying)響(xiang)細(xi)胞的生(sheng)長狀態(tai)。

培養(yang)條(tiao)件(jian)： 氣相：95%空(kong)氣+5%CO2，溫(wen)度：37℃

凍(dong)存(cun)條(tiao)件(jian)： 使(shi)用壹(yi)步凍(dong)存(cun)液(ye) HyCyteTM One Step Freezing Medium（Cat. GUCP-R201）

| HyCyteTM H ADSCs 的復蘇

1) 實驗前開啟水(shui)浴(yu)鍋預熱全培養(yang)基(ji)。

2) 在工(gong)作(zuo)臺(tai)中準備好 15 mL 離心(xin)管加入 5 mL 預(yu)熱後的全(quan)培養(yang)基(ji)。

3) 從-80°C 冰(bing)箱(xiang)中取(qu)出(chu)凍(dong)存(cun)管，將(jiang)凍(dong)存(cun)管置於 37℃水浴(yu)鍋內(nei)，快速搖(yao)動解(jie)凍(dong)直到(dao)內(nei)容物(wu)融 化，同(tong)時需(xu)註意避(bi)免水(shui)面(mian)沒過管口。

NOTE：建(jian)議(yi)將(jiang)液氮(dan)中的細胞提前取(qu)出(chu)置於-80°C 待 液氮揮發後復蘇。

4) 對(dui)凍(dong)存(cun)管外(wai)壁進行(xing)常(chang)規(gui)消毒後，在工(gong)作(zuo)臺(tai)內(nei) 小心(xin)開蓋，盡(jin)量避(bi)免(mian)氣泡溢(yi)出(chu)，輕柔(rou)吹(chui)打(da)數次， 轉(zhuan)移至(zhi) 15 mL 離心(xin)管內(nei)。使用 1 mL 培養(yang)基(ji) 清(qing)洗(xi)凍(dong)存(cun)管內(nei)壁，壹(yi)並收(shou)集(ji)至 15 mL 離心(xin)管 內(nei)。

5) 250 g 離心(xin) 5 min，收(shou)集(ji)細胞沈澱(dian)，棄(qi)掉(diao)上清(qing) 並(bing)加(jia)入(ru) 2 mL 全(quan)培養(yang)基(ji)重懸(xuan)（如有(you)臺(tai)盼藍(lan)可 取(qu)少(shao)量進行(xing)染色(se)計數）。

6) 將(jiang)重懸(xuan)後的細(xi)胞接(jie)種至 T25 或同(tong)等底面(mian)積器(qi) 皿(min)，“劃十字(zi)"搖(yao)晃細(xi)胞培養(yang)器(qi)皿(min)，使細(xi)胞均(jun)勻(yun) 分(fen)布(bu)。把(ba)細胞(bao)放(fang)入(ru) 37°C，5%CO2，飽(bao)和(he)濕度的 培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。

7) 24h 後鏡下拍(pai)照(zhao)觀察(cha)，換液後繼(ji)續培養(yang)。如(ru)有(you) 異常(chang)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時與我(wo)們聯(lian)系(xi)。

| HyCyteTM H ADSCs 的傳(chuan)代(dai)

1) 預熱 1×PBS、胰酶(mei)和(he)全(quan)培(pei)養(yang)基(ji)。

2) 吸(xi)去原(yuan)培(pei)養(yang)基(ji)。用 1×PBS 洗(xi)滌細胞 2~3 次。

3) 吸(xi)去 1×PBS。加(jia)入(ru)胰酶(mei)。輕輕旋(xuan)轉(zhuan)，使胰(yi)酶(mei) 覆蓋(gai)細胞(bao)表(biao)面(mian)，消化，顯(xian)微鏡下觀察(cha)約(yue) 70%~80%左(zuo)右的(de)細胞變(bian)圓(yuan)後，用手(shou)輕拍(pai)培(pei)養(yang) 器(qi)皿(min)外(wai)壁使細(xi)胞(bao)脫壁。

4) 當(dang)觀察(cha)到(dao)細胞(bao)明(ming)顯脫落，立即加入(ru)預(yu)熱的培養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化。用(yong)吸(xi)管吸(xi)取(qu)液(ye)體，反復輕 柔(rou)吹(chui)打(da)培(pei)養(yang)器(qi)皿(min)底壁，使細(xi)胞(bao)脫離器(qi)皿(min) 底壁。 NOTE：建(jian)議(yi)可添加 2 倍(bei)胰酶(mei)用量的全培養(yang)基(ji)用於 終(zhong)止消(xiao)化。

5) 將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移到(dao)離心(xin)管中。用 1xPBS 清(qing)洗(xi) 底(di)壁，收(shou)集(ji)細胞懸(xuan)液(ye)至離心(xin)管中。

6) 250 g 離心(xin) 5 min。

7) 小(xiao)心(xin)棄(qi)去上清(qing)液(ye)，加(jia)入(ru) 1~2mL 全(quan)培養(yang)基(ji)重 懸(xuan)細胞。

8) 選擇(ze)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)器(qi)皿(min)，加入(ru)適量(liang)全培養(yang)基(ji)， 按照(zhao)合(he)適的(de)傳(chuan)代(dai)比(bi)例（壹(yi)般為(wei) 1:2）接(jie)種細胞， “劃十字(zi)"搖(yao)晃細(xi)胞培養(yang)器(qi)皿(min)，使細(xi)胞均(jun)勻(yun)分(fen)布(bu)。

9) 把(ba)細胞(bao)放(fang)入(ru) 37°C，5%CO2，飽(bao)和(he)濕度的培(pei)養(yang) 箱(xiang)中培養(yang)。

| HyCyte H ADSCs 的(de)凍(dong)存(cun)

1) 待(dai)細胞(bao)生(sheng)長至可傳(chuan)代(dai)的匯合(he)度，即可消化準備 凍(dong)存(cun)。

2) 消(xiao)化細(xi)胞，取(qu)少(shao)量細胞懸(xuan)液(ye)計(ji)數。細(xi)胞(bao)懸液(ye)經 250 g離心(xin)5 min。

3) 小(xiao)心(xin)棄(qi)掉(diao)上清(qing)。用(yong)4°C預(yu)冷(leng)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)重懸(xuan)細胞， 壹(yi)般凍(dong)存(cun)密度為1×10^6個(ge)/mL。

4) 對(dui)凍(dong)存(cun)管進行(xing)標識後，把(ba)細胞(bao)分(fen)裝到(dao)凍(dong)存(cun)管中， 旋(xuan)緊凍(dong)存(cun)管蓋。

5) 如使(shi)用(yong)HyCyte使用(yong)壹(yi)步凍(dong)存(cun)液(ye)，凍(dong)存(cun)管直接(jie) 豎(shu)直放(fang)入(ru)-80°C冰箱即可。 如使(shi)用(yong)程序凍(dong)存(cun)液(ye)，需將(jiang)凍(dong)存(cun)管放入程(cheng)序降溫(wen) 盒後方可放入(ru)-80°C冰(bing)箱。

6) 24小(xiao)時後可將(jiang)細胞(bao)轉(zhuan)移到(dao)液氮(dan)進(jin)行(xing)長期保(bao)存。