幾(ji)種(zhong)常見的限制性內(nei)切酶及特性

DNA 限制(zhi)性內(nei)切酶（簡(jian)稱限制(zhi)酶）是(shi)壹(yi)類(lei)能識(shi)別並(bing)切割(ge)雙(shuang)鏈(lian) DNA 特定(ding)核苷(gan)酸序列(lie)的酶，廣(guang)泛應用於(yu)基因克隆(long)、分子標(biao)記、基因編(bian)輯等(deng)分子生(sheng)物學(xue)實(shi)驗(yan)中(zhong)。以(yi)下(xia)是(shi)壹(yi)些(xie)常見的限制酶及其主要(yao)用途(tu)：

壹(yi)、常見的限制性內(nei)切酶及特性

1. EcoRI

識(shi)別序列(lie)：5'-GAATTC-3'（切割(ge)後產生(sheng) 5' 粘性末(mo)端(duan)：-G 和 AATTC-）

來(lai)源(yuan)：大(da)腸桿菌(jun)（Escherichia coli RY13）

用途(tu)：

基因克隆(long)中(zhong)常用的工具酶，用於(yu)切割(ge)載(zai)體和目(mu)的(de)基因，產生(sheng)互補(bu)粘性末(mo)端(duan)以(yi)便連(lian)接(jie)。

構(gou)建基因組(zu)文庫(ku)或 cDNA 文庫(ku)時(shi)的(de)酶切處理。

2. HindIII

識(shi)別序列(lie)：5'-AAGCTT-3'（切割(ge)後產生(sheng) 5' 粘性末(mo)端(duan)：-A 和 AGCTT-）

來(lai)源(yuan)：流(liu)感嗜(shi)血桿(gan)菌(jun)（Haemophilus influenzae Rd）

用途(tu)：

與 EcoRI 類(lei)似(si)，常用於(yu)載(zai)體和目(mu)的(de)基因的(de)酶切，構(gou)建重組(zu)質(zhi)粒(li)。

用於(yu) DNA 片段(duan)的限制性長(chang)度多態性（RFLP）分析，輔助基因定(ding)位或親子鑒定(ding)。

3. BamHI

識(shi)別序列(lie)：5'-GGATCC-3'（切割(ge)後產生(sheng) 5' 粘性末(mo)端(duan)：-G 和 GATCC-）

來(lai)源(yuan)：澱粉(fen)芽孢桿菌(jun)（Bacillus amyloliquefaciens H）

用途(tu)：

廣(guang)泛用於(yu)基因克隆(long)中(zhong)的(de)酶切連(lian)接(jie)，尤(you)其適(shi)用於(yu)構(gou)建(jian)表(biao)達載(zai)體。

用於(yu) DNA 甲基化分析（部分甲基化位(wei)點(dian)會抑(yi)制其切割(ge)活(huo)性）。

4. XhoI

識(shi)別序列(lie)：5'-CTCGAG-3'（切割(ge)後產生(sheng) 5' 粘性末(mo)端(duan)：-C 和 TCGAG-）

來(lai)源(yuan)：潮黴素(su)鏈(lian)黴菌(jun)（Streptomyces xanthus）

用途(tu)：

常用於(yu)真核表(biao)達載(zai)體的構(gou)建(jian)（如與載(zai)體上的(de) XbaI 等(deng)酶切位(wei)點(dian)配合）。

因切割(ge)產生(sheng)的末(mo)端(duan)與 SalI（識(shi)別 GTCGAC）互(hu)補(bu)，可(ke)實(shi)現不同(tong)酶切片段(duan)的連(lian)接(jie)。

5. PstI

識(shi)別序列(lie)：5'-CTGCAG-3'（切割(ge)後產生(sheng) 3' 粘性末(mo)端(duan)：-CTGCA 和 G-）

來(lai)源(yuan)：普羅(luo)威登(deng)斯(si)菌(jun)（Providencia stuartii 164）

用途(tu)：

用於(yu)質(zhi)粒(li)載(zai)體的酶切（如(ru) pBR322 的經(jing)典酶切位(wei)點(dian)）。

在(zai)基因克隆(long)中(zhong)，3' 粘性末(mo)端(duan)可(ke)減(jian)少(shao)自(zi)身(shen)環化(hua)概率(lv)，提高(gao)重組(zu)效率(lv)。

6. Sau3AⅠ

識(shi)別序列(lie)：5'-GATC-3'（切割(ge)後產生(sheng) 5' 粘性末(mo)端(duan)：-G 和 ATC-，與 BamHI 末(mo)端(duan)互補(bu)）

來(lai)源(yuan)：金黃(huang)色葡(pu)萄球菌(jun)（Staphylococcus aureus 3A）

用途(tu)：

因(yin)識(shi)別 4 堿(jian)基序列(lie)（切割(ge)頻率(lv)高(gao)），常用於(yu)基因組(zu) DNA 的隨(sui)機(ji)片段(duan)化，構建小(xiao)片段(duan)文庫。

可(ke)與 BamHI 切割(ge)的(de)載(zai)體連(lian)接(jie)（末(mo)端(duan)互補(bu)），增(zeng)加克隆(long)靈(ling)活性。

7. SmaI

識(shi)別序列(lie)：5'-CCCGGG-3'（切割(ge)後產生(sheng)平末(mo)端(duan)：-CCC 和 GGG-）

來(lai)源(yuan)：粘質(zhi)沙(sha)雷(lei)氏(shi)菌(jun)（Serratia marcescens Sb）

用途(tu)：

用於(yu)產生(sheng)平末(mo)端(duan)的 DNA 片段(duan)，適用於(yu)平(ping)末(mo)端(duan)連(lian)接(jie)（如(ru)不同(tong)來源(yuan)的(de)平(ping)末(mo)端(duan)片段(duan)拼(pin)接(jie)）。

因(yin)平末(mo)端(duan)連(lian)接(jie)效率(lv)較低，常需配合 T4 DNA 連(lian)接(jie)酶使(shi)用。

8. NotI

識(shi)別序列(lie)：5'-GCGGCCGC-3'（切割(ge)後產生(sheng) 5' 粘性末(mo)端(duan)：-GCGGCC 和 GC-）

來(lai)源(yuan)：諾(nuo)卡氏菌(jun)（Nocardia otitidis-caviarum）

用途(tu)：

識(shi)別 8 堿(jian)基序列(lie)（切割(ge)頻率(lv)低(di)），常用於(yu)大(da)片段(duan) DNA 的酶切（如(ru)人(ren)工染色體載(zai)體 BAC、YAC 的構(gou)建(jian)）。

用於(yu)保(bao)留(liu)目(mu)的(de)基因完(wan)整序列(lie)（避免內(nei)部(bu)被(bei)頻繁切割(ge)）。

二(er)、限(xian)制(zhi)酶的(de)分類(lei)及選(xuan)擇(ze)依據

限(xian)制(zhi)酶按(an)切割(ge)方(fang)式(shi)可(ke)分為粘性末(mo)端(duan)酶（如(ru) EcoRI、HindIII）和(he)平(ping)末(mo)端(duan)酶（如(ru) SmaI），選(xuan)擇(ze)時(shi)需考(kao)慮(lv)：

目(mu)的(de)基因和(he)載(zai)體上的(de)酶切位(wei)點(dian)是(shi)否(fou)匹(pi)配（避免切割(ge)目(mu)的(de)基因內(nei)部(bu)）。

末(mo)端(duan)類(lei)型(xing)（粘性末(mo)端(duan)連(lian)接(jie)效率(lv)高(gao)於(yu)平(ping)末(mo)端(duan)）。

酶切條件（如(ru)溫度、緩沖液(ye)）是(shi)否(fou)兼容（多(duo)酶切時(shi)需選(xuan)擇(ze)通用緩沖液(ye)）。

三(san)、延伸應用

除(chu)上(shang)述基礎用途(tu)外(wai)，限(xian)制(zhi)酶還(hai)用於(yu)：

基因編(bian)輯驗證：切割(ge) CRISPR/Cas9 編(bian)輯後的 DNA，通(tong)過電(dian)泳(yong)檢測(ce)是(shi)否(fou)成(cheng)功(gong)插入(ru) / 缺失片段(duan)。

甲基化分析：部分酶（如(ru) HpaII）對(dui)甲基化位(wei)點(dian)敏感(gan)，可(ke)用於(yu)檢(jian)測(ce) DNA 甲基化狀態。

選(xuan)擇(ze)時(shi)需結合實(shi)驗(yan)需求(qiu)（如(ru)片段(duan)大(da)小、連(lian)接(jie)效率(lv)）和(he)酶的(de)特(te)異(yi)性，參(can)考(kao)供應(ying)商提供的(de)酶切位(wei)點(dian)圖譜(pu)和(he)反(fan)應(ying)條件。

蘇(su)州(zhou)阿爾法(fa)生(sheng)物作為專業的(de)生(sheng)物試劑(ji)供應(ying)商，不僅(jin)為科(ke)研(yan)機(ji)構(gou)、高(gao)校(xiao)實(shi)驗(yan)室及生(sheng)物醫藥(yao)企(qi)業(ye)提供包(bao)括碧雲天 BeyoFast™系列(lie)限制性內(nei)切酶（如(ru) EcoRI、HindIII、BamHI 等(deng)）在(zai)內(nei)的(de)分子生(sheng)物學(xue)核(he)心(xin)試(shi)劑(ji)，還(hai)涵(han)蓋(gai)百時(shi)美(mei)等(deng)的各類(lei)優(you)質(zhi)產品(pin)，從精(jing)準(zhun)的(de)蛋白 Marker 到酶反(fan)應(ying)緩(huan)沖液(ye)、核酸純化試(shi)劑(ji)盒(he)等(deng)配套耗(hao)材(cai)，形成(cheng)了(le)全(quan)面的試劑(ji)供應(ying)體系。其憑(ping)借穩定(ding)的貨源(yuan)渠道(dao)、嚴(yan)格(ge)的(de)質(zhi)量(liang)把(ba)控和專業的(de)技(ji)術(shu)支(zhi)持，確保(bao)每(mei)壹款產品(pin)都(dou)能滿足(zu)實(shi)驗(yan)的高精(jing)度需求(qiu)，為科(ke)研(yan)人(ren)員在(zai)基因克隆(long)、蛋白分析、分子診斷等(deng)研究(jiu)領(ling)域提供便捷(jie)、可(ke)靠(kao)的(de)物資(zi)保障(zhang)，助力(li)科(ke)研(yan)工作高(gao)效推進(jin)。