實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR技(ji)術和常規(gui) PCR有(you)什(shen)麽不同(tong)?

實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR（Real-time PCR）和(he)常規 PCR（Conventional PCR）是(shi)兩種(zhong)不同(tong)的(de)分(fen)子(zi)生(sheng)物學技(ji)術(shu)，它(ta)們在實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)、數據(ju)分(fen)析以(yi)及(ji)應用領(ling)域(yu)等(deng)方面(mian)存(cun)在差(cha)異。本文將(jiang)詳(xiang)細(xi)介(jie)紹(shao)這兩種(zhong)技術的(de)區(qu)別，幫(bang)助讀者更好(hao)地理解和(he)應用它(ta)們。

壹(yi)、實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)上的區(qu)別

1. Real-time PCR 操(cao)作(zuo)：

   - 實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 技(ji)術可(ke)以(yi)在 PCR 反(fan)應過程中實(shi)時(shi)監測熒(ying)光(guang)信(xin)號(hao)的(de)變(bian)化(hua)。

   - 在 PCR 反(fan)應的指(zhi)數增(zeng)長期，熒(ying)光(guang)信(xin)號(hao)強度與 PCR 產物數量(liang)成正(zheng)比，從而實(shi)現(xian)對 DNA 或 RNA 分(fen)子(zi)數量(liang)的(de)定(ding)量(liang)分(fen)析。

2. 常(chang)規(gui) PCR 操(cao)作(zuo)：

   - 常規(gui) PCR 技(ji)術(shu)是(shi)在 PCR 反(fan)應結(jie)束後通過瓊脂糖凝膠電(dian)泳等(deng)方法檢測(ce) PCR 產(chan)物的累積量(liang)。

   - 雖(sui)然(ran)常規(gui) PCR 技(ji)術(shu)可(ke)以(yi)通過擴增條(tiao)帶(dai)的(de)亮(liang)度(du)與已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)的條(tiao)帶(dai)進(jin)行(xing)比較，從而獲得“半(ban)定(ding)量(liang)"的(de)結(jie)果，但它(ta)無法實(shi)現(xian)對 DNA 或 RNA 分(fen)子(zi)數量(liang)的(de)實(shi)時(shi)定(ding)量(liang)分(fen)析。

二、數據(ju)分(fen)析上的區(qu)別

1. Real-time PCR 數據(ju)分(fen)析：

   - 實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 技(ji)術可(ke)以(yi)通過擴增曲(qu)線(xian)、標準(zhun)曲線(xian)、Cp 值(zhi)等數據(ju)進(jin)行定(ding)量(liang)分(fen)析。

   - 擴(kuo)增(zeng)曲(qu)線(xian)反(fan)映了 PCR 反應過程中熒(ying)光(guang)信(xin)號(hao)的(de)變(bian)化(hua)，而標準(zhun)曲線(xian)是(shi)基(ji)於壹(yi)系(xi)列(lie)已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)的標準(zhun)品繪(hui)制(zhi)而成的(de)。通過標準(zhun)曲線(xian)，可(ke)以(yi)計算(suan)出未知(zhi)樣(yang)品(pin)中(zhong)目(mu)的(de)基(ji)因的(de)濃(nong)度(du)。

2. 常規(gui) PCR 數據(ju)分(fen)析：

   - 常(chang)規(gui) PCR 技(ji)術通常通過瓊脂糖凝膠電(dian)泳等(deng)方法檢測(ce) PCR 產(chan)物的累積量(liang)。

   - 雖(sui)然(ran)可(ke)以(yi)通過擴增條(tiao)帶(dai)的(de)亮(liang)度(du)與已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)的條(tiao)帶(dai)進(jin)行(xing)比較，從而獲得“半(ban)定(ding)量(liang)"的(de)結(jie)果，但它(ta)無法實(shi)現(xian)對 DNA 或 RNA 分(fen)子(zi)數量(liang)的(de)實(shi)時(shi)定(ding)量(liang)分(fen)析。

三、應用領(ling)域(yu)的(de)區(qu)別

1. Real-time PCR 應用領(ling)域(yu)：

   - 基(ji)因表達定(ding)量(liang)：通過實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 技(ji)術，可(ke)以(yi)檢測(ce)特(te)定(ding)基(ji)因在不同(tong)樣(yang)品(pin)中的表達水平(ping)。

   - 病原菌(jun)檢(jian)測：實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 技(ji)術可(ke)以(yi)用於(yu)檢測(ce)病(bing)原菌的(de)基(ji)因序(xu)列(lie)，從而實(shi)現(xian)對病(bing)原(yuan)菌的(de)快速檢測。

   - SNP 基(ji)因分(fen)型：實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 技(ji)術可(ke)以(yi)用於(yu)檢測(ce) SNP 基(ji)因序(xu)列(lie)，從而實(shi)現(xian)對 SNP 基(ji)因型(xing)的分(fen)型。

   - 拷(kao)貝數變(bian)異：實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 技(ji)術可(ke)以(yi)用於(yu)檢測(ce)基(ji)因組中的(de)拷(kao)貝數變(bian)異，從而了(le)解基(ji)因的(de)拷(kao)貝數變(bian)化(hua)。

2. 常規(gui) PCR 應用領(ling)域(yu)：

   - 測(ce)序(xu)：常規(gui) PCR 技(ji)術(shu)可(ke)以(yi)用於(yu)擴增(zeng)目(mu)的(de)基(ji)因序(xu)列(lie)，從而為測序(xu)提供(gong)足(zu)夠(gou)的(de)長度(du)。

   - 基(ji)因分(fen)型：常(chang)規 PCR 技(ji)術可(ke)以(yi)用於(yu)擴增(zeng)特(te)定(ding)基(ji)因序(xu)列(lie)，從而實(shi)現(xian)對基(ji)因型(xing)的分(fen)型。

   - 克(ke)隆(long)：常規 PCR 技術(shu)可(ke)以(yi)用於(yu)擴增(zeng)目(mu)的(de)基(ji)因序(xu)列(lie)，從而為克隆(long)提供足(zu)夠(gou)的(de)長度(du)。

   實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 技(ji)術和常規(gui) PCR 技術在實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)、數據(ju)分(fen)析以(yi)及(ji)應用領(ling)域(yu)等(deng)方面(mian)存(cun)在差(cha)異。實(shi)時(shi)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang) PCR 技(ji)術能夠實(shi)現(xian)對 DNA 或 RNA 分(fen)子(zi)數量(liang)的(de)實(shi)時(shi)定(ding)量(liang)分(fen)析，具(ju)有(you)更(geng)高的(de)靈敏(min)度(du)和(he)準(zhun)確(que)性(xing)。而常(chang)規(gui) PCR 技術雖然(ran)無法實(shi)現(xian)實(shi)時(shi)定(ding)量(liang)分(fen)析，但(dan)它(ta)具(ju)有(you)更(geng)高的(de)特(te)異性(xing)和(he)可(ke)靠(kao)性(xing)。根據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求和目(mu)的(de)，選擇合(he)適(shi)的 PCR 技(ji)術對於(yu)獲得準確(que)可(ke)靠(kao)的實(shi)驗(yan)結(jie)果具有(you)重要意(yi)義。

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