G418篩(shai)選(xuan)293t細(xi)胞(bao)的濃度是多少(shao)合(he)適(shi)？

 在細(xi)胞(bao)培養實驗(yan)中(zhong)，293T細(xi)胞(bao)是壹(yi)種(zhong)常用(yong)的工具(ju)細(xi)胞(bao)，廣(guang)泛應(ying)用(yong)於基(ji)因表(biao)達、病毒(du)包裝等領域。G418是壹(yi)種(zhong)常用(yong)的篩(shai)選(xuan)抗(kang)生(sheng)素(su)，用(yong)於篩(shai)選(xuan)帶(dai)有(you)新(xin)黴(mei)素(su)抗性(xing)基(ji)因的細(xi)胞(bao)。那麽(me)， 293T細(xi)胞(bao)用(yong)G418篩選(xuan)的(de)濃度是多少(shao)？在操(cao)作(zuo)過程(cheng)中需要註(zhu)意(yi)哪些(xie)事項呢？本文(wen)將(jiang)為(wei)您詳(xiang)細(xi)解答。

壹(yi)、G418篩(shai)選(xuan)293T細(xi)胞(bao)的工作原(yuan)理(li)

G418是壹(yi)種(zhong)新黴(mei)素(su)類(lei)抗生(sheng)素(su)，通過(guo)幹擾(rao)細(xi)胞(bao)內(nei)蛋白質的(de)合(he)成(cheng)，從而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)死(si)亡。但是，帶(dai)有(you)新(xin)黴(mei)素(su)抗性(xing)基(ji)因的細(xi)胞(bao)可以產(chan)生(sheng)抗(kang)性(xing)蛋白，從而(er)抵抗G418的(de)毒(du)性(xing)。因此，在含(han)有(you)G418的培(pei)養基中(zhong)，只有(you)帶(dai)有(you)新(xin)黴(mei)素(su)抗性(xing)基(ji)因的細(xi)胞(bao)能(neng)夠(gou)存活(huo)和生(sheng)長(chang)。

二(er)、G418濃度對293T細(xi)胞(bao)的影響(xiang)

G418濃度對293T細(xi)胞(bao)的影響(xiang)是多方(fang)面的(de)，包括(kuo)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)、細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)、細(xi)胞(bao)形態和(he)細(xi)胞(bao)抗性(xing)等方(fang)面(mian)。G418濃度對293T細(xi)胞(bao)的具(ju)體影響(xiang)主要表(biao)現在以下(xia)幾(ji)個方面：

1.細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)：在較(jiao)低(di)的(de)G418濃度下（如(ru)0.25 mg/ml），293T細(xi)胞(bao)能(neng)夠(gou)正常(chang)生(sheng)長(chang)，細(xi)胞(bao)密度逐(zhu)漸(jian)增(zeng)加(jia)，形態保(bao)持(chi)良好(hao)。隨(sui)著(zhe)G418濃度的增(zeng)加(jia)（如(ru)0.5 mg/ml），細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)速(su)度開始減(jian)慢，細(xi)胞(bao)密度增(zeng)加(jia)緩慢。當G418濃度達到1 mg/ml時(shi)，部分細(xi)胞(bao)開始(shi)死(si)亡，細(xi)胞(bao)密度明(ming)顯(xian)下降(jiang)。繼(ji)續(xu)增(zeng)加(jia)G418濃度（如(ru)2 mg/ml），細(xi)胞(bao)死(si)亡更加(jia)嚴(yan)重(zhong)，細(xi)胞(bao)密度降(jiang)低(di)。

2.細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)：G418濃度越(yue)高，細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)越(yue)低(di)。在低(di)濃度G418（如(ru)0.25 mg/ml）下(xia)，細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)較(jiao)高，細(xi)胞(bao)形態飽(bao)滿，染(ran)色(se)均(jun)勻。隨(sui)著(zhe)G418濃度的增(zeng)加(jia)，細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)逐(zhu)漸(jian)下降(jiang)，細(xi)胞(bao)形態變(bian)得(de)不(bu)規則，染色不均勻。在高濃度G418（如(ru)2 mg/ml）下(xia)，細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)低(di)，細(xi)胞(bao)形態嚴(yan)重(zhong)受損(sun)，染(ran)色(se)異(yi)常(chang)。

3.細(xi)胞(bao)形態：G418濃度越(yue)高，細(xi)胞(bao)形態越(yue)不(bu)規則。在低(di)濃度G418下，細(xi)胞(bao)形態飽(bao)滿，呈梭形或扁(bian)平(ping)形。隨(sui)著(zhe)G418濃度的增(zeng)加(jia)，細(xi)胞(bao)形態變(bian)得(de)不(bu)規則，細(xi)胞(bao)體積(ji)縮(suo)小(xiao)，細(xi)胞(bao)邊(bian)緣(yuan)不清晰。在高濃度G418下，細(xi)胞(bao)形態嚴(yan)重(zhong)受損(sun)，細(xi)胞(bao)體積(ji)極(ji)小(xiao)，細(xi)胞(bao)邊(bian)緣(yuan)破碎(sui)。

4.細(xi)胞(bao)抗性(xing)：G418濃度越(yue)高，細(xi)胞(bao)抗性(xing)越(yue)強。在低(di)濃度G418下，細(xi)胞(bao)對G418的敏(min)感(gan)性(xing)較(jiao)高，細(xi)胞(bao)容易(yi)死(si)亡。隨(sui)著(zhe)G418濃度的增(zeng)加(jia)，細(xi)胞(bao)逐(zhu)漸(jian)產(chan)生(sheng)抗(kang)性(xing)，細(xi)胞(bao)存活(huo)率(lv)提(ti)高。在高濃度G418下，細(xi)胞(bao)抗性(xing)達到頂點(dian)，細(xi)胞(bao)能(neng)夠(gou)抵抗高濃度的G418毒(du)性(xing)。

所(suo)以，對於293T細(xi)胞(bao)，G418的篩(shai)選(xuan)濃度通常(chang)在1-2 mg/ml之(zhi)間(jian)。這個(ge)濃度可以根(gen)據實(shi)驗(yan)需求(qiu)進(jin)行調(tiao)整。壹(yi)般來說，篩選(xuan)濃度越(yue)高，篩選(xuan)效果(guo)越(yue)好(hao)，但同時(shi)也(ye)會(hui)對細(xi)胞(bao)造(zao)成壹(yi)定(ding)的(de)損傷。因此，在選(xuan)擇(ze)篩(shai)選(xuan)濃度時，需要根據實(shi)驗(yan)目的和細(xi)胞(bao)耐受(shou)性(xing)進(jin)行權(quan)衡。在實(shi)際(ji)操作(zuo)中，可以先(xian)從(cong)較低(di)濃度開始，如(ru)0.5 mg/ml，觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)情(qing)況，逐(zhu)漸(jian)增(zeng)加(jia)濃度，直到找到合(he)適(shi)的(de)篩(shai)選(xuan)濃度。

三、293T細(xi)胞(bao)篩選(xuan)步(bu)驟(zhou)：

1. 篩(shai)選(xuan)前(qian)準備：在篩(shai)選(xuan)前(qian)，需(xu)要將(jiang)293T細(xi)胞(bao)接種(zhong)到含有G418的(de)培養基中(zhong)。為(wei)了(le)提高篩選(xuan)效率(lv)，可以先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)接種(zhong)到含有較(jiao)低(di)濃度G418的培養基中(zhong)，然(ran)後逐(zhu)漸(jian)提高濃度。此外，可以預先在培(pei)養基中(zhong)加(jia)入適(shi)量的(de)抗(kang)生(sheng)素(su)，如(ru)慶(qing)大(da)黴(mei)素(su)或卡(ka)那(na)黴(mei)素(su)，以防(fang)止(zhi)汙染(ran)。

2. 篩選(xuan)過(guo)程(cheng)：在含(han)有(you)G418的培(pei)養基中(zhong)，細(xi)胞(bao)可能(neng)會(hui)出現不(bu)同程(cheng)度的損傷。為(wei)了(le)減(jian)輕(qing)細(xi)胞(bao)損傷，可以適(shi)當降(jiang)低(di)培(pei)養基中(zhong)的(de)血清濃度，或者添(tian)加(jia)壹(yi)些(xie)細(xi)胞(bao)保護(hu)劑(ji)，如(ru)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)、雙抗(kang)等。此外，保持培(pei)養基的(de)pH值(zhi)在適(shi)宜(yi)範(fan)圍(wei)內(nei)，壹(yi)般為(wei)7.2-7.4，有(you)利於(yu)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)。

3. 篩(shai)選(xuan)時(shi)間(jian)：G418篩(shai)選(xuan)的(de)時(shi)間(jian)可以根(gen)據細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)情(qing)況來(lai)決(jue)定(ding)。壹(yi)般來說，篩選(xuan)時(shi)間(jian)為(wei)3-7天(tian)。在篩(shai)選(xuan)過(guo)程(cheng)中(zhong)，需(xu)要定(ding)期(qi)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)情(qing)況，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、密度等。如(ru)果(guo)發(fa)現細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)不(bu)良，可以適(shi)當降(jiang)低(di)G418濃度，或者延長(chang)篩(shai)選(xuan)時(shi)間(jian)。

4. 篩(shai)選(xuan)後(hou)處(chu)理：在篩(shai)選(xuan)完(wan)成(cheng)後(hou)，需(xu)要將(jiang)抗性(xing)細(xi)胞(bao)進(jin)行擴(kuo)大培(pei)養。為(wei)了(le)提高細(xi)胞(bao)純(chun)度，可以對細(xi)胞(bao)進(jin)行多(duo)次(ci)傳代和篩(shai)選(xuan)。在傳代過程(cheng)中(zhong)，需要定(ding)期(qi)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)情(qing)況，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、密度等。如(ru)果(guo)發(fa)現細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)不(bu)良，可以適(shi)當降(jiang)低(di)G418濃度，或者延長(chang)篩(shai)選(xuan)時(shi)間(jian)。此外，在傳代過程(cheng)中(zhong)，可以定(ding)期(qi)更換培(pei)養基，以清除殘(can)留(liu)的G418。

四、293T細(xi)胞(bao)篩選(xuan)註(zhu)意(yi)事(shi)項：

1. 在操(cao)作(zuo)過程(cheng)中，要嚴(yan)格(ge)遵(zun)守無菌操(cao)作規程，防(fang)止(zhi)汙染(ran)。

2. 註(zhu)意(yi)培(pei)養基的(de)配(pei)制(zhi)，確(que)保無(wu)菌(jun)無(wu)毒(du)。

3. 定(ding)期(qi)檢查(zha)培養箱的(de)溫(wen)度和濕(shi)度，保持適(shi)宜(yi)的(de)培(pei)養環境。

4. 觀察(cha)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)情(qing)況，及(ji)時(shi)處(chu)理異(yi)常(chang)情況。

5. 做(zuo)好實(shi)驗(yan)記(ji)錄(lu)，便(bian)於(yu)後續(xu)分析和(he)總結。

總之(zhi)，293T細(xi)胞(bao)用(yong)G418篩選(xuan)的(de)濃度通常(chang)在1-2 mg/ml之(zhi)間(jian)，具(ju)體濃度需要根據實(shi)驗(yan)需求(qiu)進(jin)行調(tiao)整。在操(cao)作(zuo)過程(cheng)中，需要註(zhu)意(yi)篩(shai)選(xuan)前(qian)準備、篩選(xuan)過(guo)程(cheng)、篩(shai)選(xuan)時(shi)間(jian)以及(ji)篩(shai)選(xuan)後(hou)處(chu)理等方(fang)面(mian)。通過(guo)合理(li)的篩選(xuan)條(tiao)件和(he)方(fang)法(fa)，可以獲(huo)得(de)高純(chun)度的抗性(xing)細(xi)胞(bao)，為(wei)後(hou)續(xu)實驗提供(gong)良好(hao)的基(ji)礎(chu)。同時(shi)，要註(zhu)意(yi)操(cao)作(zuo)過(guo)程中的註(zhu)意(yi)事(shi)項，確保實驗(yan)的(de)順(shun)利進(jin)行。

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