單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)篩(shai)選(xuan)方法(fa)

單(dan)克(ke)隆抗體(ti)（Monoclonal Antibody，簡稱mAb）是現代生(sheng)物(wu)技(ji)術中(zhong)的(de)壹種(zhong)重(zhong)要(yao)產品(pin)，廣泛應用於(yu)醫學(xue)、生(sheng)物(wu)學(xue)、藥理學(xue)等(deng)領域。在(zai)過(guo)去的(de)幾(ji)十(shi)年裏(li)，隨(sui)著(zhe)生(sheng)物(wu)技(ji)術的(de)不(bu)斷(duan)發(fa)展(zhan)，單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)制(zhi)備(bei)和(he)應用取得了(le)不(bu)錯(cuo)的(de)成績(ji)。本(ben)文(wen)將(jiang)介(jie)紹(shao)單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)篩(shai)選(xuan)方法(fa)，以幫(bang)助(zhu)讀(du)者(zhe)了解這(zhe)壹領域的(de)基本(ben)知(zhi)識，並探(tan)討(tao)如(ru)何利用(yong)先(xian)進(jin)技(ji)術(shu)提(ti)高(gao)篩(shai)選(xuan)效(xiao)率(lv)。

壹、單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)制(zhi)備(bei)過(guo)程

單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)制(zhi)備(bei)過(guo)程主要(yao)包(bao)括(kuo)以下(xia)幾個步驟(zhou)：

1.免疫(yi)：將目(mu)標(biao)抗原（如(ru)病(bing)毒(du)、細(xi)菌(jun)、癌(ai)細(xi)胞等(deng)）註(zhu)入(ru)實(shi)驗動(dong)物(wu)（如(ru)小鼠、大(da)鼠、兔(tu)等(deng)）體(ti)內，使其(qi)免疫(yi)系(xi)統(tong)產生(sheng)抗體(ti)。

2.細(xi)胞融(rong)合：然(ran)後，從免疫(yi)動物(wu)的(de)脾(pi)臟中(zhong)提(ti)取B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞，並將其(qi)與(yu)骨(gu)髓瘤細(xi)胞進(jin)行(xing)細(xi)胞融(rong)合，形(xing)成雜交瘤細(xi)胞。

3.篩選(xuan)：接下(xia)來，通過(guo)特定的(de)篩(shai)選(xuan)方法(fa)，從雜交瘤細(xi)胞中(zhong)篩選(xuan)出能(neng)產生(sheng)目(mu)標(biao)抗體(ti)的(de)單(dan)克(ke)隆細(xi)胞。

4.擴(kuo)增(zeng)：將篩(shai)選(xuan)出的(de)單(dan)克(ke)隆細(xi)胞進(jin)行(xing)體(ti)外培養，擴(kuo)增(zeng)其(qi)數量，以獲(huo)得(de)大(da)量的(de)單(dan)克(ke)隆抗體(ti)。

二(er)、單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)篩(shai)選(xuan)方法(fa)

在(zai)單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)制(zhi)備(bei)過(guo)程中(zhong)，篩選(xuan)方法(fa)是非常關(guan)鍵的(de)環節。目(mu)前，常見的(de)篩(shai)選(xuan)方法(fa)主要(yao)有(you)以下(xia)幾種(zhong)：

1.酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附試(shi)驗（ELISA）：ELISA是壹種(zhong)基於(yu)抗原-抗體(ti)反應的(de)檢(jian)測(ce)方法(fa)，廣泛應用於(yu)單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)篩(shai)選(xuan)。其(qi)原理是將抗原固定在(zai)固體(ti)載體(ti)上，然(ran)後加入抗體(ti)，通過(guo)檢測(ce)抗體(ti)與(yu)抗原的(de)結(jie)合(he)情況，從而(er)篩(shai)選(xuan)出能(neng)產生(sheng)目(mu)標(biao)抗體(ti)的(de)單(dan)克(ke)隆細(xi)胞。

2.免疫(yi)熒光法(fa)：免疫(yi)熒光法(fa)是將熒光物質(zhi)標(biao)記(ji)在(zai)抗體(ti)上，通過(guo)檢測(ce)熒光信(xin)號(hao)來篩選(xuan)單(dan)克(ke)隆細(xi)胞。該(gai)方法(fa)具有(you)操作(zuo)簡便、結(jie)果(guo)直觀(guan)等(deng)優(you)點。

3.放(fang)射(she)性免疫(yi)測(ce)定法(fa)：放(fang)射(she)性免疫(yi)測(ce)定法(fa)是將放(fang)射(she)性同位素(su)標(biao)記(ji)在(zai)抗原或抗體(ti)上，通過(guo)檢測(ce)放(fang)射(she)性信(xin)號(hao)來篩選(xuan)單(dan)克(ke)隆細(xi)胞。該(gai)方法(fa)具有(you)較高(gao)的(de)靈敏度(du)和(he)特異性，但(dan)存(cun)在(zai)放(fang)射(she)性汙(wu)染的(de)風(feng)險。

4.流(liu)式(shi)細(xi)胞術（FACS）：FACS是壹種(zhong)基於(yu)細(xi)胞生(sheng)物(wu)學(xue)特性的(de)篩(shai)選(xuan)方法(fa)，通過(guo)檢測(ce)細(xi)胞表面的(de)特定抗原或抗體(ti)，從而(er)篩(shai)選(xuan)出能(neng)產生(sheng)目(mu)標(biao)抗體(ti)的(de)單(dan)克(ke)隆細(xi)胞。該(gai)方法(fa)具有(you)高(gao)通量(liang)、高(gao)靈敏度(du)等(deng)優(you)點。

5.分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)方法(fa)：隨(sui)著(zhe)分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)技術的(de)發(fa)展(zhan)，壹些基於(yu)基因和蛋白(bai)水平(ping)的(de)篩(shai)選(xuan)方法(fa)也(ye)被應用於(yu)單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)篩(shai)選(xuan)。例如(ru)，通過(guo)基因克(ke)隆、表(biao)達和純(chun)化抗體(ti)片段，然(ran)後進(jin)行(xing)功(gong)能(neng)篩(shai)選(xuan)，從而(er)獲(huo)得具有(you)特定活性的(de)單(dan)克(ke)隆抗體(ti)。

三(san)、利用(yong)實(shi)驗設備(bei)等(deng)技術(shu)提(ti)高(gao)篩(shai)選(xuan)效(xiao)率(lv)

在(zai)有(you)限的(de)時(shi)間(jian)內篩選(xuan)和選(xuan)擇轉染群體(ti)中(zhong)高(gao)生(sheng)產率和(he)可擴(kuo)展(zhan)的(de)克(ke)隆體(ti)仍然(ran)是壹項(xiang)重(zhong)大(da)挑(tiao)戰。為了提(ti)高(gao)篩(shai)選(xuan)效(xiao)率(lv)，研(yan)究(jiu)者(zhe)們開發(fa)了多(duo)種(zhong)先(xian)進(jin)技(ji)術(shu)。其(qi)中(zhong)，利用(yong)具有(you)全(quan)過(guo)程參數可控(kong)制(zhi)性(xing)的(de)小(xiao)型(xing)化(hua)高(gao)吞吐量生(sheng)物(wu)反(fan)應器模擬大(da)型(xing)生(sheng)物(wu)反(fan)應器環境(jing)，有(you)助(zhu)於(yu)在(zai)早期(qi)階(jie)段確定(ding)合適(shi)的(de)生(sheng)產克(ke)隆。這(zhe)種(zhong)方法(fa)可以在(zai)更(geng)短(duan)的(de)時(shi)間(jian)內對更(geng)多的(de)克(ke)隆進(jin)行(xing)評(ping)估(gu)，從(cong)而(er)加(jia)快篩選(xuan)進(jin)程。

全(quan)自動(dong)單(dan)克(ke)隆圖像分(fen)析（AEC）系(xi)統(tong)，如(ru)STUDIUS™，整(zheng)合(he)了整(zheng)個(ge)Solentim生(sheng)態(tai)系(xi)統(tong)，簡化了工(gong)作(zuo)流(liu)程，實(shi)現(xian)了(le)高(gao)質(zhi)量數據管(guan)理。這(zhe)種(zhong)系(xi)統(tong)可以實(shi)現(xian)自(zi)動化(hua)，通量(liang)高(gao)，減(jian)少(shao)操(cao)作時(shi)間(jian)，並(bing)且與(yu)第三(san)方機(ji)械(xie)臂輕(qing)松整(zheng)合(he)。自動克(ke)隆性(xing)報告(gao)為IND申報提(ti)供了更(geng)自信(xin)的(de)數據支(zhi)持，匯(hui)合度(du)精(jing)度(du)掃(sao)描(miao)誤差(cha)率(lv)在(zai)5%以內，大(da)大(da)提(ti)高(gao)了(le)篩(shai)選(xuan)的(de)準(zhun)確性(xing)和效(xiao)率(lv)。此(ci)外(wai)，這(zhe)種(zhong)自(zi)動(dong)化(hua)系(xi)統(tong)設置易(yi)於(yu)使用(yong)，減(jian)少(shao)了(le)學(xue)習(xi)時(shi)間(jian)，使得(de)研(yan)究(jiu)人(ren)員能夠更(geng)快地掌握(wo)篩(shai)選(xuan)技術(shu)。

總(zong)之，單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)篩(shai)選(xuan)方法(fa)多種(zhong)多(duo)樣(yang)，每(mei)種(zhong)方法(fa)都有(you)其(qi)優(you)缺點。在(zai)實(shi)際應用中(zhong)，研(yan)究(jiu)者(zhe)需要(yao)根(gen)據實(shi)驗目(mu)的(de)和(he)條(tiao)件(jian)，選(xuan)擇合(he)適(shi)的(de)篩(shai)選(xuan)方法(fa)。通過(guo)利用(yong)壹些實(shi)驗設備(bei)或(huo)技(ji)術(shu)，如(ru)小型(xing)化(hua)高(gao)吞吐量生(sheng)物(wu)反(fan)應器和全(quan)自動(dong)單(dan)克(ke)隆圖像分(fen)析系(xi)統(tong)，篩選(xuan)效(xiao)率(lv)將(jiang)得(de)到(dao)較大(da)提(ti)升(sheng)，加速(su)單(dan)克(ke)隆抗體(ti)的(de)研(yan)發(fa)和應用。

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