實驗(yan)室常(chang)用(yong)的20種(zhong)限制(zhi)性內切酶

在(zai)分子生物學(xue)領(ling)域，限制(zhi)性內切酶（Restriction Endonucleases）是壹類重要(yao)的酶，能夠(gou)識別特(te)定的DNA序列(lie)並在(zai)其(qi)特(te)定位置切割雙鏈DNA，從(cong)而(er)產(chan)生特定的DNA片(pian)段。這些酶(mei)被(bei)廣泛應(ying)用(yong)於DNA重(zhong)組、基(ji)因(yin)克隆、PCR等實驗(yan)中(zhong)。以(yi)下是(shi)20種(zhong)常用(yong)的限制(zhi)性內切酶及其(qi)相(xiang)關(guan)應(ying)用(yong)介紹，以(yi)及在(zai)實(shi)驗(yan)中(zhong)需(xu)要(yao)註(zhu)意的事項。

 1. EcoRI

- 序列(lie)識別：GAATTC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的定向克隆和DNA連接實驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：適宜的反應緩(huan)沖(chong)液(ye)和(he)適(shi)當(dang)的溫度對反應效果(guo)至關(guan)重(zhong)要(yao)。

 2. HindIII

- 序列(lie)識別：AAGCTT

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：應註意避免酶(mei)的過(guo)度消耗(hao)和(he)不(bu)必(bi)要(yao)的環境汙(wu)染。

 3. BamHI

- 序列(lie)識別：GGATCC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的定向克隆和DNA連接實驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：反應條件的優化(hua)對保證酶(mei)的活性(xing)和特(te)異(yi)性至關(guan)重(zhong)要(yao)。

 4. XhoI

- 序列(lie)識別：CTCGAG

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的定向克隆和DNA連接實驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：應避免酶(mei)與(yu)RNA的結合(he)，以(yi)免影響(xiang)實(shi)驗(yan)結果(guo)。

 5. EcoRV

- 序列(lie)識別：GATATC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：在反應中(zhong)應(ying)嚴(yan)格控(kong)制(zhi)酶的濃(nong)度，避(bi)免過(guo)度消耗(hao)。

 6. SalI

- 序列(lie)識別：GTCGAC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的定向克隆和DNA連接實驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：酶的保存和使用(yong)條件對保持其(qi)活性(xing)至關(guan)重(zhong)要(yao)。

 7. XbaI

- 序列(lie)識別：TCTAGA

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的定向克隆和DNA連接實驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：應避免酶(mei)的不(bu)必(bi)要(yao)凍(dong)融和長(chang)時(shi)間存放。

 8. PstI

- 序列(lie)識別：CTGCAG

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：應選(xuan)擇適宜(yi)的反應緩(huan)沖(chong)液(ye)，以(yi)確(que)保酶的最佳(jia)活性(xing)。

 9. SmaI

- 序列(lie)識別：CCCGGG

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：酶的反應條件需(xu)要(yao)在(zai)酶活性(xing)和DNA完(wan)整性(xing)之(zhi)間(jian)取得平(ping)衡(heng)。

 10. NotI

- 序列(lie)識別：GCGGCCGC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：應避免酶(mei)與(yu)DNA的過(guo)度反應，以(yi)免影響(xiang)DNA片(pian)段的完(wan)整性(xing)。

 11. KpnI

- 序列(lie)識別：GGTACC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的定向克隆和DNA連接實驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：反應體系(xi)中(zhong)的離子濃(nong)度和(he)pH值對酶的活性(xing)有重要(yao)影響(xiang)，應(ying)予(yu)以(yi)嚴(yan)格控(kong)制(zhi)。

 12. SacI

- 序列(lie)識別：GAGCTC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：反應溫(wen)度和(he)時(shi)間的選(xuan)擇對酶的活性(xing)和特(te)異(yi)性至關(guan)重(zhong)要(yao)。

 13. SphI

- 序列(lie)識別：GCATGC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：應避免酶(mei)與(yu)反應體系(xi)中(zhong)的其(qi)他(ta)成(cheng)分發生不(bu)必(bi)要(yao)的相互(hu)作用(yong)。

 14. EcoRII

- 序列(lie)識別：CCWGG

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：酶的保存和稀釋應避免超過(guo)其(qi)最佳(jia)活性(xing)濃(nong)度。

 15. BglII

- 序列(lie)識別：AGATCT

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的定向克隆和DNA連接實驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：反應體系(xi)中(zhong)的酶和(he)DNA的比例(li)應適(shi)當(dang)控(kong)制(zhi)，以(yi)避(bi)免浪(lang)費(fei)和(he)不(bu)必(bi)要(yao)的反應。

 16. AvaI

- 序列(lie)識別：CYCGRG

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：反應體系(xi)中(zhong)的離子濃(nong)度和(he)溫度需(xu)要(yao)仔(zai)細(xi)控(kong)制(zhi)，以(yi)確(que)保酶的最佳(jia)活性(xing)。

 17. NdeI

- 序列(lie)識別：CATATG

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：酶的保存和凍融條件對其(qi)活性(xing)和穩(wen)定性至關(guan)重(zhong)要(yao)。

 18. SstI

- 序列(lie)識別：GAGCTC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：應選(xuan)擇適宜(yi)的反應緩(huan)沖(chong)液(ye)和(he)反應溫(wen)度，以(yi)保證酶(mei)的活性(xing)和特(te)異(yi)性。

 19. BstEII

- 序列(lie)識別：GGTNACC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：反應時(shi)間和酶(mei)的濃(nong)度需(xu)要(yao)進行(xing)優化(hua)，以(yi)獲(huo)得最佳(jia)的實驗(yan)結果(guo)。

 20. HpaI

- 序列(lie)識別：GTTAAC

- 應(ying)用(yong)：常(chang)用(yong)於DNA片(pian)段的切割(ge)和DNA重(zhong)組實(shi)驗(yan)中(zhong)。

- 註(zhu)意事項：酶的穩定性受到(dao)環(huan)境條件的影響(xiang)，應(ying)在(zai)適宜的溫度下保存和使用(yong)。

限(xian)制(zhi)性內切酶在分子生物學(xue)實(shi)驗(yan)中(zhong)很(hen)常用(yong)，其(qi)特(te)異(yi)性識別和(he)切割DNA序列(lie)的能力(li)使其(qi)成(cheng)為(wei)DNA重組、基(ji)因(yin)克隆和PCR等實(shi)驗(yan)的關(guan)鍵工具(ju)。然(ran)而(er)，在(zai)使用(yong)限(xian)制(zhi)性內切酶時(shi)，也(ye)需(xu)要(yao)註(zhu)意壹些重要(yao)事(shi)項，如(ru)優化(hua)反應條件、嚴(yan)格控(kong)制(zhi)酶的濃(nong)度、避(bi)免酶(mei)的過(guo)度消耗(hao)和(he)不(bu)必(bi)要(yao)的環境汙(wu)染等(deng)，以(yi)確(que)保實驗(yan)能夠(gou)順(shun)利進行(xing)並(bing)獲(huo)得可靠的結果(guo)。更多(duo)實驗(yan)室儀(yi)器(qi)，實驗(yan)耗(hao)材，科(ke)研(yan)試劑(ji)請進入(ru)蘇州阿(e)爾法生物進行(xing)咨詢(xun)