抗體(ti)-蛋(dan)白(bai)質免疫印(yin)跡條帶(dai)過(guo)多的原(yuan)因(yin)及(ji)解決(jue)方案(an)

抗體(ti)-蛋(dan)白(bai)質免疫印(yin)跡（Western blotting）是壹種廣(guang)泛應用(yong)的(de)蛋(dan)白(bai)質分(fen)析(xi)技(ji)術。然(ran)而(er)，在(zai)實(shi)驗(yan)中，有(you)時可能(neng)會出(chu)現條(tiao)帶(dai)過(guo)多的情(qing)況，這(zhe)可能(neng)影響結果的(de)解讀(du)和數據的(de)準(zhun)確性。下面是壹(yi)些可能(neng) 抗體(ti)-蛋(dan)白(bai)質免疫印(yin)跡條帶(dai)過(guo)多的原(yuan)因(yin)及(ji)解決(jue)方案(an)。

 1. 原因：

 a. 組(zu)織(zhi)或細(xi)胞(bao)裂(lie)解不全(quan)：未能(neng)全(quan)裂(lie)解樣(yang)品可能(neng)導(dao)致包(bao)括未裂(lie)解細(xi)胞(bao)或(huo)細(xi)胞(bao)碎(sui)片(pian)等(deng)在(zai)內的(de)多種蛋(dan)白(bai)質出(chu)現在(zai)鑒(jian)定(ding)結果中(zhong)。 

 b. 過(guo)多的蛋(dan)白(bai)質負(fu)載(zai)：過多的樣(yang)品加(jia)載(zai)可能(neng)導(dao)致大(da)量非特(te)異性(xing)的蛋(dan)白(bai)質結合(he)到膜上(shang)，並(bing)形成多個(ge)條(tiao)帶(dai)。 

 c. 非特(te)異性(xing)抗體(ti)結合(he)：抗體(ti)可能(neng)結合(he)到不是目(mu)標蛋(dan)白(bai)質的(de)其他非特(te)異性(xing)蛋(dan)白(bai)質，導(dao)致多個(ge)條(tiao)帶(dai)出(chu)現。

 解決(jue)辦法(fa)： 

 a. 裂(lie)解條(tiao)件優(you)化(hua)：使用(yong)裂(lie)解緩沖(chong)液和(he)技(ji)術(shu)來確保(bao)全(quan)裂(lie)解細(xi)胞(bao)或(huo)組(zu)織(zhi)樣品。增加(jia)裂(lie)解時(shi)間或(huo)使用(yong)更強(qiang)效的(de)裂(lie)解緩沖(chong)液可以有(you)效提(ti)高裂(lie)解效果(guo)。

 b. 樣品負載(zai)優(you)化(hua)：優(you)化(hua)樣品加(jia)載(zai)量，確保(bao)不超過(guo)膜(mo)的負載(zai)容(rong)量。未超(chao)過(guo)膜容(rong)量的(de)適(shi)當樣(yang)品加(jia)載(zai)量可以減(jian)少非特(te)異性(xing)結合(he)和多個(ge)條(tiao)帶(dai)的(de)產生(sheng)。  

c. 抗體(ti)特(te)異性(xing)驗證：確定(ding)使用(yong)的(de)抗體(ti)特(te)異性(xing)，例如(ru)通過(guo)使用(yong)KO細(xi)胞(bao)或(huo)組(zu)織(zhi)作為陰(yin)性(xing)對(dui)照。此外，使用(yong)單(dan)克(ke)隆(long)抗體(ti)，選(xuan)擇經過充分(fen)驗(yan)證的商業抗體(ti)或(huo)設(she)計合(he)成多肽(tai)免疫原(yuan)以提(ti)高(gao)抗體(ti)特(te)異性(xing)。 

2. 原因(yin)：

 a. 交(jiao)叉(cha)反應：抗體(ti)可能(neng)與(yu)其他蛋(dan)白(bai)質或(huo)化(hua)合(he)物(wu)發生交(jiao)叉(cha)反應，導(dao)致多個(ge)條(tiao)帶(dai)的(de)形成。

 b. 磷酸化或(huo)剪切(qie)變(bian)異：目(mu)標蛋(dan)白(bai)質可能(neng)存(cun)在(zai)不同的(de)剪切變(bian)異形式(shi)或(huo)磷(lin)酸化狀(zhuang)態，導(dao)致多個(ge)遷移條帶(dai)的(de)出現。

 解決(jue)辦法(fa)：

 a. 阻(zu)斷(duan)交(jiao)叉(cha)反應：預(yu)吸附(fu)抗體(ti)，使(shi)用(yong)非特(te)異性(xing)抗體(ti)阻(zu)斷(duan)試(shi)劑來(lai)降低(di)交(jiao)叉(cha)反應。

 b. 亞(ya)細(xi)胞(bao)分(fen)數純化(hua)：對(dui)目(mu)標蛋(dan)白(bai)質進(jin)行(xing)亞(ya)細(xi)胞(bao)分(fen)數純化(hua)，以獲(huo)取相(xiang)對(dui)純(chun)凈的蛋(dan)白(bai)質樣(yang)品，並(bing)消(xiao)除其他形式(shi)的(de)目(mu)標蛋(dan)白(bai)質。 

3. 原(yuan)因(yin)：

 a. 多個(ge)同源蛋(dan)白(bai)：某些(xie)蛋(dan)白(bai)質家(jia)族(zu)可能(neng)具有(you)高度保(bao)守(shou)的結構或(huo)序列(lie)，導(dao)致多個(ge)同源蛋(dan)白(bai)質或(huo)同源蛋(dan)白(bai)質的(de)異構體(ti)存(cun)在(zai)。

 解決(jue)辦法(fa)：

 a. 使(shi)用(yong)多個(ge)靶(ba)標抗體(ti)：使(shi)用(yong)靶(ba)標(biao)特(te)異性(xing)的多個(ge)抗體(ti)來(lai)檢測目(mu)標蛋(dan)白(bai)質以區(qu)別不同的(de)同源蛋(dan)白(bai)質。

 b. 使(shi)用(yong)遺(yi)傳(chuan)學(xue)方法驗證：使用(yong)遺(yi)傳(chuan)學(xue)方法如(ru)基因(yin)敲(qiao)除或(huo)RNA幹擾(rao)來(lai)證實(shi)檢(jian)測到(dao)的(de)條(tiao)帶(dai)與(yu)目(mu)標蛋(dan)白(bai)質相(xiang)關(guan)。

 在(zai)進(jin)行(xing)抗體(ti)-蛋(dan)白(bai)質免疫印(yin)跡實(shi)驗(yan)時，仔(zai)細(xi)考慮(lv)這些可能(neng)導(dao)致條(tiao)帶(dai)過(guo)多的原(yuan)因(yin)，並(bing)采(cai)取(qu)相(xiang)應的(de)解決(jue)辦法(fa)，可以提(ti)高(gao)結果的(de)準(zhun)確性和可靠(kao)性(xing)。此外(wai)，進(jin)行(xing)技(ji)術(shu)重復和進(jin)行(xing)定(ding)量分(fen)析(xi)也(ye)可以進(jin)壹(yi)步驗證結果的(de)可靠(kao)性(xing)。

更多內容(rong)進(jin)入(ru) 蘇(su)州阿(e)爾法(fa)生(sheng)物(wu) 進(jin)行(xing)了解