瓊脂糖(tang)核酸(suan)電泳實(shi)驗步(bu)驟

瓊(qiong)脂糖(tang)核酸(suan)電泳是壹(yi)種(zhong)常(chang)用(yong)的(de)分(fen)離(li)和檢(jian)測DNA的(de)方法。它通過(guo)使用(yong)瓊(qiong)脂糖(tang)凝膠作為(wei)分(fen)離(li)介質(zhi)，根據DNA的(de)大(da)小和電荷(he)來(lai)實現(xian)DNA分(fen)離(li)和檢(jian)測。下(xia)面是壹(yi)份針對瓊脂糖(tang)核酸(suan)電泳實(shi)驗的(de)詳細(xi)步(bu)驟和參(can)數(shu)設(she)定。

實驗材(cai)料(liao)和設(she)備：

- 制(zhi)膠(jiao)模(mo)具(ju)和(he)梳子(zi)

- 制(zhi)膠平板(ban)

- 電泳槽(cao)

- 三(san)角(jiao)燒瓶(ping)

- 微(wei)波爐(lu)

- 熒光染(ran)料(liao)

- 瓊脂糖(tang)幹粉(fen)

- 電泳緩(huan)沖液

- DNA樣(yang)品

- 載(zai)樣緩(huan)沖液（loading buffer）

- 電源(yuan)

- 凝(ning)膠成(cheng)像儀

實(shi)驗步(bu)驟：

1. 用(yong)蒸(zheng)餾水將(jiang)制膠模(mo)具(ju)和(he)梳子(zi)沖洗幹(gan)凈(jing)，放在(zai)制(zhi)膠(jiao)平(ping)板(ban)上，並封(feng)閉(bi)模(mo)具(ju)邊(bian)緣(yuan)，安(an)裝好梳子(zi)。

2. 根(gen)據所需(xu)分(fen)離(li)的(de)DNA片段(duan)大(da)小，配(pei)制適宜濃度(du)的(de)瓊脂糖(tang)凝膠緩(huan)沖液。準確(que)稱(cheng)量所(suo)需(xu)量(liang)的(de)瓊脂糖(tang)幹粉(fen)，加入到(dao)三(san)角(jiao)燒瓶(ping)中(zhong)，然後(hou)加(jia)入適量的(de)電泳緩(huan)沖液（壹(yi)般20~30 ml）。

3. 將(jiang)三(san)角(jiao)燒瓶(ping)放入微(wei)波爐(lu)中(zhong)加(jia)熱熔化。冷卻(que)片刻後，加入壹(yi)滴(di)熒光染(ran)料(liao)，並輕輕旋轉以(yi)充(chong)分(fen)混勻(yun)凝膠(jiao)溶液。然後(hou)將(jiang)混勻(yun)的(de)凝膠(jiao)溶液倒(dao)入電泳槽(cao)中，並(bing)靜置待(dai)其(qi)凝(ning)固(gu)。

4. 在(zai)室(shi)溫下(xia)靜置(zhi)30~45分(fen)鐘(zhong)，直到(dao)凝(ning)膠全(quan)凝(ning)結後，小心拔(ba)出(chu)梳(shu)子(zi)，並(bing)將(jiang)凝膠安(an)放在(zai)電泳槽(cao)內(nei)。

5. 向(xiang)電泳槽(cao)中倒(dao)入足(zu)夠量(liang)的(de)電泳緩(huan)沖液，使(shi)其(qi)全(quan)覆(fu)蓋凝(ning)膠表面1mm左(zuo)右。如果(guo)在(zai)樣(yang)品孔(kong)內(nei)有(you)氣(qi)泡(pao)，應設(she)法將(jiang)其除去(qu)。

6. 在(zai)DNA樣(yang)品中(zhong)加入10倍(bei)體(ti)積(ji)的(de)載(zai)樣緩(huan)沖液，將(jiang)其混勻(yun)後，使(shi)用(yong)槍將(jiang)混合(he)液(ye)緩(huan)慢(man)加入被(bei)浸(jin)沒的(de)凝膠(jiao)加樣(yang)孔內(nei)。

7. 接(jie)通電源(yuan)，紅色電極(ji)為(wei)正極(ji)，黑色電極(ji)為(wei)負極。切(qie)記DNA樣(yang)品由(you)負極往(wang)正極泳動(dong)（即(ji)靠(kao)近(jin)加樣孔的(de)壹(yi)端(duan)為負極）。通常(chang)設(she)置60~100V的(de)電壓(ya)，進行(xing)20~40分(fen)鐘(zhong)的(de)電泳。

8. 根(gen)據指示劑(ji)在(zai)凝(ning)膠(jiao)中(zhong)的(de)位置，判(pan)斷(duan)是否(fou)終(zhong)止電泳。

9. 電泳完(wan)畢後，關掉電源(yuan)，使(shi)用(yong)凝(ning)膠成像儀(yi)觀察電泳帶(dai)及其(qi)位置，並(bing)與核酸(suan)分(fen)子(zi)量(liang)標準Marker進行(xing)比較(jiao)，以(yi)確(que)定被擴增(zeng)產物(wu)的(de)大(da)小。

瓊脂糖(tang)凝膠電泳是壹(yi)種(zhong)常(chang)用(yong)的(de)DNA分(fen)離(li)技術，其分(fen)離(li)效率與(yu)瓊(qiong)脂糖(tang)凝膠的(de)濃度(du)有(you)壹(yi)定的(de)關系。根據實驗(yan)數(shu)據(ju)整(zheng)理(li)，不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)的(de)瓊脂糖(tang)凝膠適用(yong)於(yu)不(bu)同(tong)大(da)小的(de)線(xian)形(xing)DNA片段(duan)的(de)分(fen)離(li)。

舉例(li)來說(shuo)，0.5%濃度(du)的(de)瓊脂糖(tang)凝膠適用(yong)於(yu)1,000-30,000bp大(da)小的(de)線(xian)形(xing)DNA片段(duan)的(de)分(fen)離(li)。這意(yi)味著如果(guo)我(wo)們(men)有(you)壹(yi)段(duan)1,000-30,000bp大(da)小的(de)DNA片段(duan)需(xu)要(yao)分(fen)離(li)，我們(men)可以(yi)選(xuan)擇使用(yong)0.5%濃(nong)度的(de)瓊脂糖(tang)凝膠進行(xing)電泳分(fen)離(li)。這種(zhong)濃(nong)度(du)的(de)瓊脂糖(tang)凝膠能(neng)夠提供(gong)適當(dang)的(de)凝膠(jiao)孔徑，讓(rang)這(zhe)個(ge)大(da)小範(fan)圍(wei)的(de)DNA片段(duan)能(neng)夠有(you)效地分(fen)離(li)出來(lai)。

而2.0%濃度的(de)瓊脂糖(tang)凝膠適用(yong)於(yu)50-2,000bp大(da)小的(de)線(xian)形(xing)DNA片段(duan)的(de)分(fen)離(li)。這意(yi)味著如果(guo)我(wo)們(men)有(you)壹(yi)段(duan)50-2,000bp大(da)小的(de)DNA片段(duan)需(xu)要(yao)分(fen)離(li)，我們(men)可以(yi)選(xuan)擇使用(yong)2.0%濃(nong)度的(de)瓊脂糖(tang)凝膠進行(xing)電泳分(fen)離(li)。相(xiang)比於(yu)0.5%濃度(du)的(de)瓊脂糖(tang)凝膠，2.0%的(de)濃度(du)可以(yi)提供(gong)更緊密的(de)凝膠(jiao)孔徑，以(yi)更(geng)好地分(fen)離(li)這個(ge)大(da)小範(fan)圍(wei)的(de)DNA片段(duan)。

選擇適當(dang)的(de)瓊脂糖(tang)凝膠濃(nong)度(du)可以(yi)幫助我們(men)更(geng)好地分(fen)離(li)不(bu)同(tong)大(da)小的(de)線(xian)形(xing)DNA片段(duan)。這(zhe)些(xie)數(shu)據(ju)的(de)整(zheng)理(li)為(wei)科(ke)研工作者(zhe)提供(gong)了在(zai)瓊(qiong)脂糖(tang)凝膠電泳實(shi)驗中(zhong)選(xuan)擇合(he)適的(de)凝膠(jiao)濃度(du)的(de)參(can)考。

通過(guo)瓊脂糖(tang)核酸(suan)電泳實(shi)驗，我(wo)們(men)能夠獲(huo)得壹(yi)系(xi)列不(bu)同(tong)大(da)小的(de)DNA片段(duan)的(de)分(fen)離(li)圖(tu)譜(pu)，進而(er)確(que)定DNA樣品中(zhong)的(de)特定目(mu)標(biao)片段(duan)的(de)大(da)小。這種(zhong)技(ji)術在(zai)分(fen)子(zi)生(sheng)物學和遺(yi)傳學研究(jiu)中具(ju)有(you)廣泛的(de)應用(yong)，並(bing)且是壹(yi)種(zhong)簡(jian)單(dan)、經濟(ji)且可靠(kao)的(de)分(fen)析(xi)方(fang)法。

   以(yi)上就是關於(yu)瓊脂糖(tang)核酸(suan)電泳的(de)實驗(yan)步驟和參(can)數(shu)設(she)定的(de)詳細(xi)介(jie)紹(shao)。希望(wang)對您有(you)所幫助！

       蘇州阿爾法生物是壹(yi)家提供(gong)實驗(yan)室儀(yi)器(qi)設(she)備、耗(hao)材和試劑(ji)的(de)公(gong)司。我們的(de)實驗(yan)室儀(yi)器(qi)產(chan)品主要(yao)包(bao)括(kuo)實驗室(shi)培(pei)養(yang)箱類、移(yi)液(ye)槍類、發酵(jiao)罐、生(sheng)物(wu)反應器(qi)、PCR儀(yi)、實驗(yan)室(shi)離(li)心機類、粉(fen)碎研磨儀類、乳酸(suan)分(fen)析(xi)儀(yi)、瓊(qiong)脂糖(tang)凝膠核酸(suan)電泳儀(yi)、電泳槽(cao)等(deng)分(fen)子(zi)生(sheng)物學設(she)備以(yi)及(ji)其他儀(yi)器(qi)設(she)備如純水機、滅(mie)菌(jun)器(qi)、洗(xi)瓶機、安(an)全(quan)櫃(gui)、低溫冰(bing)箱等(deng)。他們(men)也(ye)提供(gong)各種(zhong)實(shi)驗(yan)耗(hao)材，如吸頭(tou)、移(yi)液(ye)吸頭(tou)、PCR管、離(li)心管(guan)、培養(yang)瓶(ping)、細(xi)胞(bao)培養(yang)板(ban)等(deng)。此外，他(ta)們還(hai)提供(gong)實驗(yan)試劑(ji)，涵蓋了(le)細(xi)胞(bao)類產品、基(ji)因(yin)編(bian)輯細(xi)胞(bao)、基(ji)因(yin)組提取(qu)試劑(ji)盒、細(xi)胞(bao)培養(yang)試劑(ji)、分(fen)子(zi)生(sheng)物學試劑(ji)等(deng)。