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          TECHNICAL ARTICLES

          技(ji)術文(wen)章

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          評估(gu)ELISA實驗數(shu)據(ju)指(zhi)標有哪(na)些?

          更(geng)新(xin)時間(jian):2023-08-09點(dian)擊次(ci)數(shu):1960

          ELISA實驗常(chang)用(yong)於檢測(ce)和(he)定量(liang)復(fu)雜混合(he)物(wu)中(zhong)的(de)特(te)定蛋(dan)白質(zhi)。結果出來後(hou),就需(xu)要壹定的(de)方(fang)法(fa)來(lai)評估(gu)數(shu)據(ju)是(shi)否(fou)可靠(kao)。主(zhu)要從以下幾(ji)個方面進(jin)行(xing)評估(gu):檢測(ce)內(nei)精度(du),稀釋線(xian)性度,回收率,靈敏(min)度(du)(檢測(ce)限)等。

          檢測(ce)內(nei)精度(du)

          檢測(ce)內(nei)精度(du):壹(yi)般(ban)是檢測(ce)孔板間(jian)的(de)重(zhong)復(fu)性。壹般(ban)用(yong)變異(yi)系(xi)數CV值來評估(gu),變(bian)異(yi)系(xi)數(CV)為(wei)標準差(cha)σ與(yu)平(ping)均(jun)數µ的(de)比(bi)值。每個樣品的(de) %CV 通(tong)常(chang)應小於(yu) 10%,%CV越大(da)代(dai)表孔(kong)間(jian)差異(yi)大,重(zhong)復(fu)性不好,結果不可信(xin)。

          免疫(yi)測(ce)定.png

          註(zhu):CV較(jiao)大可由(you)以(yi)下(xia)原(yuan)因(yin)引(yin)起: 移(yi)液不準確;在使(shi)用(yong)前確保(bao)槍(qiang)頭(tou)在移(yi)液器(qi)上套牢,確保(bao)吸(xi)取正(zheng)確的(de)液(ye)體(ti)量;試(shi)劑(ji)濺(jian)入(ru)其他孔(kong)中(zhong);樣本或(huo)試(shi)劑(ji)受(shou)細(xi)菌(jun)或(huo)真(zhen)菌(jun)汙(wu)染;試劑(ji)間(jian)交叉(cha)汙染;酶標板各(ge)處(chu)溫(wen)度(du)不壹致,確保(bao)酶(mei)標板在遠(yuan)離氣(qi)流(liu)的(de)恒(heng)溫環境中(zhong)孵(fu)育;部(bu)分(fen)孔幹(gan)透(tou),確保(bao)酶(mei)標板在孵(fu)育過(guo)程(cheng)中(zhong)始終處(chu)於(yu)被(bei)封蓋(gai)狀(zhuang)態。

          稀釋線(xian)性度

          稀釋線(xian)性度:稀釋線(xian)性度是(shi)指(zhi)不同(tong)稀釋水平(ping)下(xia)測(ce)試樣品的(de)結(jie)果精度。不同(tong)稀釋倍數下(xia)的(de)測(ce)量值與(yu)精(jing)確值的(de)比(bi)值應該(gai)在70%-130%之(zhi)間(jian)。

          在沒有(you)基(ji)質(zhi)幹(gan)擾時,無(wu)論(lun)如(ru)何(he)稀釋,測(ce)量值都和(he)真(zhen)實值吻(wen)合(he)。而(er)有基(ji)質(zhi)幹(gan)擾時,樣品稀釋會導致(zhi)基(ji)質(zhi)被稀釋,會造成非(fei)特(te)異(yi)性結合(he)比(bi)例的(de)減少(shao),測(ce)量值也會隨稀釋倍數的(de)改(gai)變而改(gai)變(bian)。

          回收率

          回收率:回收率用(yong)於確定目(mu)標物(wu)質(zhi)檢測(ce)是否受(shou)樣品基(ji)質(zhi)差異(yi)的(de)影(ying)響(xiang)。例(li)如(ru),待(dai)測(ce)上清液中(zhong)所(suo)含的(de)大(da)量蛋(dan)白質(zhi)可能(neng)會阻(zu)礙(ai)抗(kang)體(ti)結合(he),提高(gao)信(xin)噪(zao)比,從(cong)而導致(zhi)目(mu)標物(wu)質(zhi)檢測(ce)的(de)濃度低(di)於實際值。通過(guo)將(jiang)已知(zhi)濃度的(de)目(mu)標物(wu)質(zhi)加(jia)入(ru)到不同(tong)的(de)樣品基(ji)質(zhi)中(zhong)來(lai)確定回收率。如(ru)果平均回收率為(wei) 80%-120%,則(ze)認為(wei)樣品基(ji)質(zhi)對檢測(ce)準確定量(liang)分(fen)析物(wu)的(de)能(neng)力(li)影(ying)響(xiang)最(zui)小。回收率=用(yong)基(ji)質(zhi)稀釋的(de)目(mu)標物(wu)質(zhi)的(de)檢測(ce)值/用(yong)基(ji)質(zhi)稀釋的(de)目(mu)標物(wu)質(zhi)的(de)確定值*100%。

          回收率過(guo)高(gao)或是(shi)過(guo)低(di),則(ze)提示(shi)實驗體(ti)系(xi)受(shou)到(dao)較(jiao)大的(de)復(fu)雜基(ji)質(zhi)幹(gan)擾。比如(ru)在空(kong)白血清(qing)中(zhong)摻(chan)入(ru)了 1000 pg/mL 的(de) IL-2,回收率只(zhi)有 50%,提示(shi)血清(qing)中(zhong)有(you)幹(gan)擾因素(su)影(ying)響(xiang)了抗(kang)體(ti)與(yu) IL-2 分(fen)子的(de)結(jie)合(he)。

          靈敏(min)度(du)(檢測(ce)限)

          靈敏(min)度(du)(檢測(ce)限):靈敏(min)度(du)指可與(yu)背(bei)景(jing)區(qu)分(fen)的(de)低(di)分(fen)析物(wu)水平(ping),通(tong)常(chang)稱(cheng)為(wei)分(fen)析靈敏(min)度(du)或檢測(ce)限。壹般有(you)三個指(zhi)標,分(fen)別為(wei)LOB,LOD,LOQ。

          LOB(Limit of blank), 就(jiu)是我(wo)們通(tong)常(chang)講的(de)空(kong)白檢測(ce)限。LOB指的(de)是(shi)用(yong)空白樣本去(qu)測(ce)試,在壹(yi)定的(de)概(gai)率下(xia)能(neng)測(ce)得的(de)最(zui)高(gao)測(ce)量結果。

          LOD(Limit of detection), 就是我(wo)們通(tong)常(chang)講的(de)檢測(ce)限,就不是用(yong)空白樣本去(qu)檢測(ce)了,是對(dui)低(di)濃度的(de)分(fen)析物(wu)樣本進(jin)行(xing)測(ce)試,在壹(yi)定的(de)概(gai)率的(de)條(tiao)件(jian)下能(neng)測(ce)得的(de)低(di)值。

          LOQ(Limit of quantitation), 就是(shi)我(wo)們通(tong)常(chang)講的(de)定量(liang)限(xian),這個也是(shi)用(yong)低(di)濃度的(de)分(fen)析物(wu)樣本進(jin)行(xing)測(ce)試得出的(de)較(jiao)低(di)的(de)值,這個值的(de)準(zhun)確性是有(you)要求的(de),就(jiu)是不光(guang)要能(neng)測(ce)到,而且還要保(bao)證結果是準確的(de)。

          打個比(bi)方:比(bi)如(ru)遠(yuan)處(chu)壹(yi)個(ge)物(wu)體(ti),隨著距(ju)離的(de)縮(suo)短(duan),妳(ni)的(de)眼(yan)睛從看(kan)不見(空白檢測(ce)限)到能(neng)看(kan)見(檢測(ce)限),最後到(dao)能(neng)確認是什(shen)麽物(wu)體(ti)(定量(liang)限(xian))。

          信(xin)噪(zao)比

          信(xin)噪(zao)比(Signal/Noise, S/N)就(jiu)是信(xin)號與(yu)噪(zao)音(yin)的(de)比(bi)值,也就(jiu)是(shi)樣品數(shu)據(ju)與(yu)空(kong)白數據(ju)的(de)比(bi)值。壹般(ban)以信(xin)噪(zao)比為(wei) 3 : 1 時相應(ying)濃度或(huo)量(liang)確定檢測(ce)限, 10:1時的(de)量(liang)為(wei)定量(liang)限(xian)。

          更(geng)多酶聯(lian)免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒、緩(huan)沖液等生物(wu)試(shi)劑(ji)、試(shi)劑(ji)盒請(qing)進入(ru)蘇州阿爾(er)法(fa)生(sheng)物(wu)進(jin)行(xing)了解(jie)。


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