腫(zhong)瘤細胞特點和細(xi)胞培(pei)養(yang)技術

  腫(zhong)瘤細胞在組織培(pei)養(yang)中占據較為(wei)重(zhong)要(yao)地位。腫(zhong)瘤細胞相(xiang)對(dui)容(rong)易(yi)培(pei)養(yang)，腫(zhong)瘤細胞系(xi)是目(mu)前(qian)建(jian)立(li)的(de)細胞類型(xing)中數(shu)量較多(duo)的。此(ci)外，腫(zhong)瘤是人類疾(ji)病的大威脅(xie)。因(yin)此，腫(zhong)瘤細胞培(pei)養(yang)已(yi)成為(wei)了解(jie)癌癥機制和開發抗癌藥(yao)物的(de)新技術。本(ben)指南(nan)旨(zhi)在(zai)作(zuo)為(wei)腫(zhong)瘤細胞培(pei)養(yang)的基本(ben)介(jie)紹，包括培(pei)養(yang)基、傳代培(pei)養(yang)、冷凍(dong)保存和(he)汙(wu)染防治。

腫(zhong)瘤細胞的生物學特(te)性

腫(zhong)瘤細胞在體(ti)內(nei)外(wai)與(yu)正(zheng)常細胞(bao)在(zai)形態(tai)、生(sheng)長(chang)值(zhi)、遺(yi)傳性狀(zhuang)等(deng)方(fang)面均(jun)有(you)顯著(zhe)差(cha)異。體(ti)外(wai)培(pei)養(yang)的兩種腫(zhong)瘤細胞定(ding)義的(de)差(cha)異很(hen)小，但卻不相(xiang)同。培(pei)養(yang)的腫(zhong)瘤細胞具有(you)以(yi)下特(te)征(zheng)：

1.不斷(duan)分化(hua)，持續(xu)生長(chang)

正(zheng)常細胞(bao)的(de)生長(chang)和死亡受(shou)到嚴格(ge)控制。細胞使用(yong)細胞(bao)外(wai)信(xin)號來(lai)調節分(fen)裂(lie)的速(su)率和位置。壹(yi)般來(lai)說，細胞(bao)雕(diao)亡可(ke)以(yi)由(you)正(zheng)常的生(sheng)命(ming)程序(xu)觸發。相(xiang)反(fan)，腫(zhong)瘤細胞提供(gong)了壹(yi)種機(ji)制，使它(ta)們能夠繞過(guo)細胞周期(qi)檢查點並(bing)抑制細胞雕(diao)亡。在(zai)癌細胞(bao)中，有(you)絲分(fen)裂可(ke)以(yi)連續(xu)發生，產(chan)生過(guo)多(duo)的細(xi)胞以(yi)形成(cheng)腫(zhong)瘤。

2.無(wu)接(jie)觸(chu)抑制

正(zheng)常細胞(bao)會分(fen)裂，直到它(ta)們與鄰(lin)近(jin)的細(xi)胞(bao)接(jie)觸(chu)，然後(hou)它(ta)們會停止生(sheng)長(chang)並(bing)形成(cheng)單(dan)層(ceng)細胞。而癌細胞(bao)通(tong)常會失(shi)去(qu)這(zhe)種接(jie)觸(chu)抑制，導(dao)致它(ta)們堆(dui)積(ji)並(bing)形成(cheng)腫(zhong)瘤。

3.侵(qin)入性

正(zheng)常細胞(bao)通(tong)常位於固(gu)定(ding)位置直至死亡。但是腫(zhong)瘤細胞能夠擴(kuo)散到或(huo)侵(qin)入附(fu)近(jin)的組(zu)織(zhi)。此(ci)外，壹(yi)些腫(zhong)瘤細胞可以(yi)脫(tuo)落(luo)並(bing)通過(guo)血液或淋(lin)巴系(xi)統(tong)轉移(yi)到體(ti)內(nei)遠(yuan)處(chu)，形(xing)成(cheng)遠(yuan)離(li)原(yuan)發腫(zhong)瘤的新腫(zhong)瘤。

腫(zhong)瘤細胞培(pei)養(yang)原理

細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)的基礎(chu)知識現(xian)在相(xiang)對(dui)普(pu)遍(bian)，盡(jin)管(guan)並(bing)非(fei)總(zong)是如(ru)此。細(xi)胞培(pei)養(yang)的主要(yao)條(tiao)件是光線充足(zu)且(qie)通風(feng)良好(hao)的(de)實驗室，配(pei)備(bei)的實驗室儀器應(ying)包括層流罩（II 級）、CO2培(pei)養(yang)箱、生物(wu)安(an)全櫃、臺(tai)式離心(xin)機(ji)、顯微(wei)鏡(jing)、塑料(liao)器皿（燒(shao)瓶(ping)和(he)培(pei)養(yang)板）以(yi)及含(han)有(you)或不(bu)含血(xue)清(qing)補充劑的培(pei)養(yang)基.

培(pei)養(yang)基和血(xue)清(qing)

大多(duo)數(shu)培(pei)養(yang)基是添(tian)加(jia)了各(ge)種成(cheng)分(fen)的(de)基(ji)礎鹽(yan)水培(pei)養(yang)基。在這(zhe)種含(han)鹽(yan)培(pei)養(yang)基的基(ji)礎(chu)上，添加(jia)了氨基酸、維(wei)生(sheng)素(su)、金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)、微(wei)量元素(su)和(he)能量來源(yuan)（通(tong)常以(yi)葡萄(tao)糖形(xing)式提供(gong)）以(yi)滿足(zu)細胞(bao)的需(xu)要。其(qi)他添(tian)加(jia)劑包括緩沖液和酚(fen)紅以(yi)指示(shi)培(pei)養(yang)物的酸度(du)。

表(biao) 1. 常用(yong)培(pei)養(yang)基。

   血(xue)清(qing)通常(chang)被(bei)添加(jia)到上(shang)述(shu)培(pei)養(yang)基中以(yi)替代(dai)許(xu)多(duo)缺(que)失(shi)的(de)需(xu)求。存(cun)在(zai)的成(cheng)分(fen)濃(nong)度(du)通(tong)常在 5-20% 之間(jian)變(bian)化(hua)，具體(ti)取(qu)決於(yu)細胞(bao)類型(xing)，並(bing)且使用(yong)新生(sheng)兒(er)或(huo)胎牛血清(qing)的(de)做(zuo)法(fa)已(yi)變(bian)得很(hen)普(pu)遍(bian)。由(you)於(yu)批(pi)次之(zhi)間(jian)存(cun)在(zai)差(cha)異，因(yin)此最(zui)好(hao)堅持使用(yong)壹(yi)家發現與(yu)特(te)定(ding)細胞(bao)系(xi)合作(zuo)良(liang)好(hao)的(de)供(gong)應(ying)商。血清(qing)可分(fen)成等分試(shi)樣並(bing)冷凍(dong)在(zai)-20°C。

有(you)些細(xi)胞類型(xing)不能在含有(you)血清(qing)的培(pei)養(yang)基中培(pei)養(yang)，例如(ru)人微(wei)血(xue)管內皮細(xi)胞(bao)。在(zai)現(xian)有(you)的基(ji)礎培(pei)養(yang)基中添加(jia)特定(ding)的添(tian)加(jia)劑或增加(jia)各(ge)種成(cheng)分(fen)的(de)濃(nong)度(du)都(dou)可以(yi)滿足(zu)特殊(shu)要求。 

繼代培(pei)養(yang)

傳代培(pei)養(yang)是通過(guo)將(jiang)部(bu)分(fen)或(huo)全(quan)部細胞從(cong)以(yi)前(qian)的(de)培(pei)養(yang)物轉移(yi)到新(xin)鮮(xian)的生(sheng)長培(pei)養(yang)基中而產(chan)生新(xin)細(xi)胞(bao)或微(wei)生(sheng)物培(pei)養(yang)物的過(guo)程。不同的細(xi)胞類型(xing)具有(you)特定(ding)的傳代培(pei)養(yang)要求、優(you)選(xuan)的密度(du)範(fan)圍和最(zui)佳(jia)生長的(de)良(liang)好(hao)條(tiao)件。所以(yi)更多(duo)的細(xi)節請參(can)考我(wo)們(men)網站上的(de)具體(ti)技(ji)術(shu)公告(gao)。

冷凍(dong)保存

 為(wei)了有(you)效地(di)儲(chu)存細(xi)胞，然後回收(shou)足夠高的(de)比(bi)例用(yong)於質量研究(jiu)，必須監測儲存條(tiao)件(jian)並(bing)保存良(liang)好(hao)的(de)記錄(lu)。

  凍(dong)融(rong)引(yin)起的(de)細胞損(sun)傷壹(yi)般認(ren)為(wei)是由(you)細(xi)胞(bao)內(nei)冰晶和滲(shen)透(tou)作(zuo)用(yong)引(yin)起的(de)。添加(jia)冷凍(dong)保護劑，如(ru)二(er)甲基(ji)亞(ya)碸(feng) (DMSO) 或甘油，並(bing)選擇(ze)合適的(de)冷凍(dong)和(he)解(jie)凍(dong)速(su)率可最(zui)大限度(du)地(di)減(jian)少細胞損(sun)傷。雖(sui)然(ran)可(ke)以(yi)使用(yong)機械(xie)冷凍(dong)機(ji) (-75°C) 短期(qi)儲(chu)存(cun)細(xi)胞系(xi)，但更優選(xuan)儲存(cun)在(zai)液氮 (-196°C) 或其(qi)蒸氣(qi)（至 -135°C）中。使用(yong)液氮冰箱是有(you)利的(de)，不僅(jin)因(yin)為較(jiao)低的溫(wen)度(du)，因(yin)此幾(ji)乎(hu)可以(yi)無限存(cun)儲(chu)時間(jian)，而且還因(yin)為沒有(you)機械(xie)故(gu)障(zhang)的(de)風(feng)險，並(bing)且現(xian)在可以(yi)延長保存時間(jian)。

細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)過(guo)程中的汙染(ran)

細胞(bao)培(pei)養(yang)應(ying)染(ran)色(se)無菌，定(ding)期(qi)進(jin)行無(wu)菌檢測是必要(yao)的(de)。雖(sui)然(ran)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)物可能在內源(yuan)性（主(zhu)要(yao)是病(bing)毒）感(gan)染(ran)中產(chan)生，但大多(duo)數(shu)感(gan)染(ran)和(he)汙(wu)染是後天(tian)獲得的(de)。以(yi)下是(shi)壹(yi)些常(chang)見的文化(hua)汙(wu)染(ran)，但不限於(yu)：

細(xi)菌

細菌是壹(yi)大群普(pu)遍(bian)存(cun)在(zai)的(de)單(dan)細(xi)胞微(wei)生(sheng)物。由(you)於(yu)它(ta)們的普(pu)遍(bian)存(cun)在(zai)、大小和快(kuai)速(su)生長(chang)速(su)度(du)，細(xi)菌是細胞培(pei)養(yang)中最(zui)常(chang)見的生物汙(wu)染物之(zhi)壹(yi)。如(ru)果存在(zai)，通過(guo)肉眼觀(guan)察很(hen)容易檢測到酚(fen)紅會變(bian)黃，並(bing)且在(zai)倒置顯微(wei)鏡(jing)下細(xi)胞(bao)會被(bei)細菌菌落(luo)取(qu)代。向培(pei)養(yang)物中添加(jia)抗生(sheng)素(su)是(shi)常(chang)見的做(zuo)法(fa)，這(zhe)可(ke)以(yi)在相(xiang)當(dang)長(chang)的(de)時間(jian)內(nei)掩(yan)蓋(gai)低(di)水平感(gan)染(ran)。

黴(mei)菌

黴菌是真(zhen)菌界的真(zhen)核(he)微(wei)生(sheng)物。與細菌汙染不同，培(pei)養(yang)物的 pH 值(zhi)在(zai)汙染的(de)初始(shi)階(jie)段(duan)會保持穩(wen)定(ding)，然後(hou)隨著(zhe)培(pei)養(yang)物受(shou)到更嚴重的(de)感(gan)染(ran)並(bing)變(bian)得混(hun)濁而迅速(su)升高。在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下，通(tong)常(chang)會出(chu)現菌絲體(ti)。壹(yi)般來(lai)說，在培(pei)養(yang)物中加(jia)入抗(kang)生(sheng)素(su)，就(jiu)能在壹(yi)定(ding)程度(du)上(shang)降低感(gan)染(ran)程(cheng)度(du)。

酵(jiao)母菌

酵(jiao)母是(shi)單(dan)細(xi)胞真(zhen)核(he)微(wei)生(sheng)物，類似於(yu)黴菌汙染，被(bei)酵(jiao)母汙(wu)染(ran)的(de)培(pei)養(yang)物變(bian)得渾(hun)濁，特(te)別是(shi)如(ru)果汙染(ran)處(chu)於(yu)晚期(qi)。被(bei)酵(jiao)母汙(wu)染(ran)的(de)培(pei)養(yang)物的 pH 值(zhi)可(ke)能不會變(bian)化(hua)太(tai)多(duo)，直到汙(wu)染(ran)變(bian)重，在(zai)這個(ge)階(jie)段(duan) pH 值(zhi)通(tong)常會增加(jia)。在顯微(wei)鏡(jing)下，很(hen)明(ming)顯酵(jiao)母表(biao)現(xian)為(wei)單(dan)個(ge)卵(luan)形(xing)或(huo)球(qiu)形(xing)顆粒(li)，甚(shen)至可能會長(chang)出更小的顆(ke)粒(li)。向培(pei)養(yang)物中添加(jia)抗生(sheng)素(su)效果不佳(jia)。大多(duo)數(shu)實驗室通(tong)常(chang)會處(chu)理(li)受(shou)感(gan)染(ran)的(de)培(pei)養(yang)物並(bing)重新(xin)開始。

酵(jiao)母汙(wu)染(ran)細(xi)胞

支(zhi)原體(ti)

支(zhi)原體(ti)可(ke)能是細胞(bao)培(pei)養(yang)實驗室中最(zui)常(chang)見和最(zui)容(rong)易被(bei)遺漏的(de)感(gan)染(ran)，其(qi)影(ying)響(xiang)是(shi)陰(yin)險(xian)的(de)。可能存在問題的指標包括生長速(su)度(du)降低、形(xing)態(tai)變(bian)化(hua)、染(ran)色(se)體(ti)畸變(bian)和新(xin)陳代(dai)謝改(gai)變(bian)。有(you)多(duo)種檢測支(zhi)原體(ti)的(de)方(fang)法(fa)，可(ke)以(yi)使用(yong)支(zhi)原體(ti)清(qing)除試(shi)劑盒進(jin)行清(qing)除或(huo)預(yu)防。

病毒

壹(yi)些細(xi)胞(bao)系(xi)包含病毒，包括整合到它(ta)們的基(ji)因(yin)組中，或作(zuo)為(wei)內(nei)源(yuan)性非(fei)致死性感(gan)染(ran)。在(zai)許(xu)多(duo)情(qing)況(kuang)下，這(zhe)些(xie)不(bu)被(bei)視為感(gan)染(ran)，細(xi)胞(bao)的病毒轉化(hua)是(shi)產(chan)生連(lian)續(xu)細(xi)胞系(xi)的歷(li)史悠(you)久的(de)方(fang)法(fa)。然(ran)而，使用(yong)病毒感(gan)染(ran)的(de)細(xi)胞培(pei)養(yang)物會對(dui)實驗室人員(yuan)造(zao)成嚴重的(de)健(jian)康(kang)危害(hai)，尤(you)其(qi)是在(zai)實驗室培(pei)養(yang)人類或(huo)靈長類動(dong)物(wu)細(xi)胞(bao)時。

   蘇州阿爾法(fa)生(sheng)物(wu)與(yu)海(hai)星生(sheng)物(wu)深(shen)度(du)合(he)作(zuo)提(ti)供(gong)以(yi)下產(chan)品與(yu)服(fu)務(wu)：

     HyCyte™ 幹(gan)細(xi)胞(bao)、原代細(xi)胞、細胞系(xi)、三系(xi)誘(you)導(dao)培(pei)養(yang)試劑、專(zhuan)用(yong)培(pei)養(yang)基、細胞(bao)培(pei)養(yang)基、F12培(pei)養(yang)基、MEM培(pei)養(yang)基、基因(yin)編輯(ji)試(shi)劑盒、細(xi)胞(bao)株現貨(huo)、細(xi)胞專(zhuan)用(yong)血清(qing)等(deng)細(xi)胞生(sheng)物學試(shi)劑。提供(gong)的服務(wu)包括：CRISPR-Cas9細胞基因(yin)編輯(ji)、載(zai)體(ti)構(gou)建(jian),病(bing)毒包裝(zhuang),分子(zi)量標準(zhun)品(pin)，突(tu)變(bian)基因(yin)標準(zhun)品(pin)，融合基因(yin)標準(zhun)品(pin)，細胞穩(wen)轉，細胞(bao)幹(gan)擾(rao)等服(fu)務(wu)。

     蘇州阿爾法(fa)同時提供(gong)過(guo)氧化(hua)氫(qing)消(xiao)毒液、季銨鹽消(xiao)毒劑、復方(fang)季銨鹽消(xiao)毒液、殺孢(bao)子(zi)劑、醇(chun)類消(xiao)毒液、濃縮(suo)消(xiao)毒液、除黴(mei)菌消(xiao)毒液、無塵布(bu)、潔(jie)凈抹(mo)布(bu)、滅菌拖把(ba)等(deng)廣(guang)泛應(ying)用(yong)於生(sheng)命(ming)科(ke)學、制藥(yao)企業(ye)、醫藥(yao)研發、疾控防(fang)禦、檢驗檢疫等多(duo)種場(chang)景。