蛋白(bai)質(zhi)電泳(yong)常用(yong)試(shi)劑配制(zhi)方(fang)法

蛋白(bai)質(zhi)電泳(yong)常用(yong)試(shi)劑配制(zhi)方(fang)法如下(xia)：

壹、3×SDS-PAGE loading buffer的配制(zhi)

1、將除BPB以外的藥品(pin)溶(rong)解。SDS常溫(wen)下很難(nan)溶(rong)解，可(ke)以在37℃水(shui)浴(yu)溶解。溶(rong)解(jie)後(hou)，再加(jia)入BPB，進行(xing)溶(rong)解(jie)；

2、把(ba)溶好的(de)buffer分(fen)裝到(dao)1.5ml的(de)離(li)心管(guan)中，1ml/管(guan)，常溫(wen)放置(zhi)；

3、使(shi)用(yong)前，每(mei)管(guan)加入(ru)30µL巰(qiu)基(ji)乙醇(chun)。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：巰(qiu)基(ji)乙醇(chun)為(wei)危(wei)險(xian)品(pin)，加(jia)入(ru)的過(guo)程在(zai)通(tong)風櫥(chu)中完(wan)成(cheng)，並(bing)且(qie)帶(dai)好手(shou)套(tao)。

二、10×PBS的(de)配制(zhi)

1、用(yong)去(qu)離(li)子水(shui)將以上藥品(pin)進行(xing)溶(rong)解(jie)；（溶(rong)解(jie)的非常慢(man)，可(ke)能(neng)需(xu)要過(guo)夜）

2、調(tiao)PH值到(dao)7.2，用(yong)0.4µm的濾膜過(guo)濾。常溫(wen)保存(cun)；

3、工(gong)作(zuo)時用(yong)的是1×PBS。

三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制(zhi)

1、用(yong)200ml去(qu)離(li)子水(shui)將Tris溶解(jie)。

2、用(yong)濃(nong)鹽酸(suan)調(tiao)PH值到(dao)8.8。

3、調(tiao)好PH的(de)Tris-Hcl定(ding)容(rong)到(dao)250ml。

4、0.4µm的(de)濾膜過(guo)濾，常溫(wen)保存(cun)。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：Tris的緩沖能力很強(qiang)，調(tiao)PH值時，費(fei)些時間，但不要(yao)調(tiao)過(guo)。

四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制(zhi)

1、用(yong)200ml去(qu)離(li)子水(shui)將Tris溶解(jie)；

2、用(yong)濃(nong)鹽酸(suan)調(tiao)PH值到(dao)6.8；

3、調(tiao)好PH的(de)Tris-Hcl定(ding)容(rong)到(dao)250ml；

4、0.4µm的(de)濾膜過(guo)濾，常溫(wen)保存(cun)。

五(wu)、30%丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺的配制(zhi)

1、把(ba)藥品(pin)用(yong)去(qu)離(li)子水(shui)溶解(jie)後(hou)定(ding)容(rong)到(dao)250ml；

2、用(yong)濾紙(zhi)過(guo)濾，放在(zai)棕色瓶(ping)子(zi)中，4℃保存(cun)。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：兩種藥品(pin)有(you)毒性，配制(zhi)過(guo)程要(yao)帶(dai)手(shou)套(tao)和(he)口(kou)罩(zhao)。

六、10%SDS的配制(zhi)

1．1g SDS加(jia)入10ml去(qu)離(li)子水(shui)進行(xing)溶(rong)解(jie)；

2．分(fen)裝(zhuang)到(dao)1.5ml離(li)心管(guan)中，-20℃保存(cun)。

七、10%過(guo)硫(liu)酸(suan)銨(an)的配制(zhi)

1．1g 過(guo)硫(liu)酸(suan)銨(an)加入(ru)10ml去(qu)離(li)子水(shui)進行(xing)溶(rong)解(jie)。

2．分(fen)裝(zhuang)到(dao)1.5ml離(li)心管(guan)中，-20℃保存(cun)。

八、5×SDS-PAGE電泳(yong)緩(huan)沖液(ye)的配制(zhi)

將以上藥品(pin)用(yong)去(qu)離(li)子水(shui)溶解(jie)後(hou)定(ding)容(rong)到(dao)1L，常溫(wen)保存(cun)。工(gong)作(zuo)時用(yong)的是1×SDS-PAGE電泳(yong)緩(huan)沖液(ye)。

九、考馬(ma)斯(si)亮藍(lan)R-250染(ran)色液(ye)的配制(zhi)

1、往1g考馬(ma)斯(si)亮藍(lan)R-250中加(jia)入(ru)250ml異(yi)丙(bing)醇(chun)，在磁(ci)力(li)攪(jiao)拌(ban)器(qi)上攪(jiao)拌(ban)六(liu)小(xiao)時以上；

2、加(jia)入(ru)650ml去(qu)離(li)子水(shui)，磁力(li)攪(jiao)拌(ban)器(qi)攪(jiao)拌(ban)過(guo)夜；

3、再加(jia)入(ru)100ml冰醋酸(suan)進行(xing)溶(rong)解(jie)，磁(ci)力(li)攪(jiao)拌(ban)器(qi)攪(jiao)拌(ban)；

4、在(zai)通(tong)風櫥(chu)內(nei)用(yong)濾紙(zhi)進行(xing)過(guo)濾。常溫(wen)保存(cun)。染(ran)色液(ye)只能(neng)反(fan)復用(yong)兩次(ci)。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：在磁力攪(jiao)拌(ban)器(qi)上攪(jiao)拌(ban)時，要把(ba)容(rong)器(qi)封(feng)口(kou)。

十(shi)、脫(tuo)色液(ye)的配制(zhi)

常溫(wen)保存(cun)。