攪(jiao)拌(ban)罐生(sheng)物(wu)反應器培(pei)養(yang)貼壁細(xi)胞(bao)如(ru)何選(xuan)擇(ze)微(wei)載體(ti)

    微(wei)載體(ti)能(neng)夠(gou)在(zai)攪拌(ban)罐生(sheng)物(wu)反應器中培(pei)養(yang)貼壁細(xi)胞(bao)。然(ran)而(er)，不存(cun)在(zai)用於(yu)微(wei)載體(ti)選(xuan)擇(ze)的(de)穩(wen)健、可(ke)轉(zhuan)移的(de)方(fang)法，研(yan)究提(ti)供(gong)很少(shao)或(huo)沒有解(jie)釋為什麽(me)使用微(wei)載體(ti)的(de)原(yuan)因(yin)。我(wo)們(men)系(xi)統地評估(gu)了來(lai)自(zi)三個(ge)供(gong)體(ti)的(de)用於(yu)人骨髓(sui)來(lai)源的(de) MSC (hBM-MSCs) 擴增的(de) 13 種(zhong)微(wei)載體(ti)，以(yi)建立(li)壹種可重(zhong)現(xian)和可轉移的(de)微(wei)載體(ti)選(xuan)擇(ze)方法。單層(ceng)研(yan)究證(zheng)明了(le)輸(shu)入(ru)細(xi)胞(bao)系(xi)在生(sheng)長動(dong)力學和代謝物(wu)通(tong)量(liang)方(fang)面(mian)的(de)變(bian)異(yi)性(xing)。

    與 hBM-MSC2 和 hBM-MSC3 相(xiang)比(bi)，HBM-MSC1 在三個(ge)傳(chuan)代中經(jing)歷了更(geng)多(duo)的(de)累(lei)積(ji)群體(ti)倍(bei)增。在 100 mL 轉(zhuan)瓶中，攪拌(ban)條件明顯(xian)優於(yu)靜(jing)態條件，與(yu)供(gong)體(ti)無(wu)關，並且相(xiang)對(dui)微(wei)載體(ti)性(xing)能(neng)相(xiang)同(tong)，其中相(xiang)同(tong)的(de)微(wei)載體(ti)在(zai)生(sheng)長(chang)動(dong)力學和代謝物(wu)通(tong)量(liang)方(fang)面(mian)優於(yu)其他微(wei)載體(ti)。微(wei)載體(ti)上供(gong)體(ti)細(xi)胞(bao)之間(jian)的(de)相(xiang)對(dui)生(sheng)長(chang)動(dong)力學與單層(ceng)研(yan)究相(xiang)同(tong)。選(xuan)擇(ze)塑料(liao)微(wei)載體(ti)作為 hBM-MSC 擴增的(de)最佳(jia)微(wei)載體(ti)。HBM-MSCs 被(bei)成(cheng)功收(shou)獲(huo)和表征，證(zheng)明了(le) hBM-MSC 免疫(yi)表型(xing)和分化能力。這(zhe)種方(fang)法為微(wei)載體(ti)選(xuan)擇(ze)提(ti)供(gong)了壹(yi)種系(xi)統方(fang)法，研(yan)究結果確(que)定(ding)了對基(ji)於(yu)微(wei)載體(ti)的(de)同(tong)種(zhong)異(yi)體(ti)細(xi)胞(bao)療法制造的(de)潛(qian)在(zai)重(zhong)要生物加工影響。相(xiang)對(dui)微(wei)載體(ti)性(xing)能(neng)相(xiang)同(tong)，其中相(xiang)同(tong)的(de)微(wei)載體(ti)在(zai)生(sheng)長(chang)動(dong)力學和代謝物(wu)通(tong)量(liang)方(fang)面(mian)優於(yu)其他微(wei)載體(ti)。

[細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)微(wei)載體(ti)]

壹(yi)、間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)簡(jian)介(jie)

  1970 年代的(de)開(kai)創(chuang)性(xing)工作促(cu)成(cheng)了間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)/基(ji)質細(xi)胞(bao) (MSC) 的(de)分(fen)離(li)和鑒定；這(zhe)些(xie)細(xi)胞(bao)現(xian)在被認(ren)為是基(ji)於(yu)細(xi)胞(bao)的(de)CTR、組(zu)織工程(cheng)和再生醫學應(ying)用的(de)前(qian)景(jing)候選(xuan)者(zhe)，因為它們(men)具有多(duo)能(neng)性、體(ti)外(wai)生(sheng)長(chang)傾(qing)向(xiang)、有希望的(de)功效(xiao)數(shu)據、易於(yu)分離(li)  和免疫(yi)調節(jie)特性(xing)然(ran)而(er)，人類(lei)間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao) (hMSC) 能(neng)否有效(xiao)轉(zhuan)移到(dao)廣泛的(de)實(shi)際(ji)應(ying)用中，在很(hen)大程(cheng)度(du)上取(qu)決於(yu)大規(gui)模(mo)制(zhi)造(zao)平(ping)臺的(de)開(kai)發(fa)，以(yi)生產滿(man)足(zu)實際需求所(suo)需(xu)的(de)全(quan)功能細(xi)胞(bao)。

二、攪拌(ban)罐生(sheng)物(wu)反應器培(pei)養(yang)貼壁細(xi)胞(bao)

   貼(tie)壁培(pei)養(yang)的(de)主(zhu)要策(ce)略(lve)包(bao)括細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)瓶、細(xi)胞(bao)工(gong)廠、生物(wu)反應器培(pei)養(yang)等(deng)。與(yu)單層(ceng)培(pei)養(yang)相(xiang)比(bi)，基(ji)於(yu)微(wei)載體(ti)的(de)生(sheng)物(wu)反應器系(xi)統具有更(geng)大的(de)表(biao)面(mian)積(ji)與體(ti)積(ji)比(bi)，並且可以(yi)提(ti)供(gong)過程(cheng)控(kong)制(zhi)、靈(ling)活操作（即(ji)分(fen)批(pi)、補(bu)料分(fen)批(pi)、灌(guan)註(zhu)）、通過葉(ye)輪攪(jiao)拌(ban)實現(xian)均勻(yun)培(pei)養(yang)條件等(deng)額外(wai)優勢，培(pei)養(yang)基(ji)和細(xi)胞(bao)材(cai)料  的(de)易於(yu)獲(huo)取的(de)采(cai)樣以(yi)及原(yuan)位收(shou)獲(huo)的(de)能(neng)力 正因(yin)為如此(ci)，科學(xue)家針對 hMSC對這(zhe)些(xie)系(xi)統進行(xing)了大量(liang)研(yan)究  以(yi)及其他貼(tie)壁依賴(lai)性(xing)細(xi)胞(bao)類(lei)型(xing)。

   值得(de)註(zhu)意的(de)是(shi)，目(mu)前(qian)已經(jing)報道(dao)了許(xu)多(duo)不(bu)同(tong)類(lei)型(xing)的(de)微(wei)載體(ti)，每(mei)種(zhong)都(dou)具有不同(tong)的(de)結構（即(ji)實(shi)心(xin)珠(zhu)、大孔、可(ke)酶(mei)消(xiao)化） 、塗(tu)層(ceng)（纖(xian)連(lian)蛋白、膠原(yuan)蛋白、明膠）和粒徑。盡管(guan)有許多(duo)涉(she)及 hMSC 和微(wei)載體(ti)培(pei)養(yang)的(de)研(yan)究調查(zha)了(le)培(pei)養(yang)過程(cheng)的(de)各(ge)個(ge)方(fang)面，但沒有壹套統(tong)壹的(de) hMSC 微(wei)載體(ti)擴增培(pei)養(yang)條件。這(zhe)在壹(yi)定(ding)程(cheng)度(du)上是(shi)可以(yi)理解(jie)的(de)，因(yin)為由於(yu)供(gong)體(ti)差(cha)異(yi)以(yi)及研(yan)究的(de)相(xiang)對(dui)初(chu)期而(er)不可(ke)避(bi)免地產生(sheng)差(cha)異，最早(zao)成(cheng)功的(de) MSC 微(wei)載體(ti)擴展僅在(zai) 2007 年報道(dao)。

三、攪拌(ban)罐生(sheng)物(wu)反應器培(pei)養(yang)貼壁細(xi)胞(bao)如(ru)何選(xuan)擇(ze)微(wei)載體(ti)？

選(xuan)擇(ze)合適的(de)微(wei)載體(ti)是(shi)微(wei)載體(ti)/攪(jiao)拌(ban)罐生(sheng)物(wu)反應器細(xi)胞(bao)擴增的(de)基(ji)本(ben)組(zu)成部分。從(cong)細(xi)胞(bao)CTR加工的(de)角度(du)來(lai)看(kan)，預(yu)計壹(yi)旦(dan)選(xuan)擇(ze)，選(xuan)擇(ze)的(de)微(wei)載體(ti)將(jiang)需要始(shi)終(zhong)保(bao)持(chi)不(bu)變，特別(bie)是(shi)在實際(ji)開(kai)發(fa)的(de)後期階段（II 期和 III 期），此(ci)時過(guo)程(cheng)被(bei)“鎖定(ding)" '. 此(ci)時的(de)任(ren)何變化都可能構成制造(zao)過(guo)程(cheng)的(de)重(zhong)大變(bian)化，需要進行(xing)重(zhong)要的(de)可(ke)比(bi)性測試和重(zhong)復臨床(chuang)試驗(yan)。因此(ci)，最重(zhong)要的(de)是(shi)從(cong)壹(yi)開始(shi)就根(gen)據嚴(yan)格的(de)選(xuan)擇(ze)方法選(xuan)擇(ze)較(jiao)佳(jia)的(de)微(wei)載體(ti)

Kehoe 及(ji)其同(tong)事(shi)進行(xing)了壹(yi)項類似(si)的(de)研(yan)究，其中包(bao)括對細(xi)胞(bao)可(ke)恢復性(xing)的(de)調(tiao)查(zha)，發(fa)現(xian)雖然(ran) Cytodex-1 似(si)乎能(neng)促(cu)進細(xi)胞(bao)生(sheng)長，但與 SoloHill 膠原(yuan)蛋白微(wei)載體(ti)相(xiang)比(bi)，它的(de)細(xi)胞(bao)可(ke)恢復性(xing)較(jiao)低。

    蘇州阿爾(er)法生物提(ti)供(gong)的(de)生(sheng)物(wu)反應器、壹(yi)次(ci)性(xing)生(sheng)物(wu)反應器、片(pian)狀(zhuang)載(zai)體(ti)等(deng)實(shi)驗(yan)室儀器廣泛應(ying)用於(yu)3D細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)、貼壁細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)、細(xi)胞(bao)規(gui)模(mo)化擴增，創新(xin)藥研(yan)究等(deng)領(ling)域。