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更(geng)新(xin)時間(jian):2023-02-21
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瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝(ning)膠電泳分(fen)子生(sheng)物(wu)學(xue)常用(yong)的實(shi)驗(yan)方法,那麽在凝(ning)膠電泳過程(cheng)中(zhong)需要註(zhu)意哪(na)些(xie)事(shi)項(xiang)呢(ne)?
壹、切(qie)膠時的註(zhu)意事(shi)項(xiang)
1. 盡(jin)量保證(zheng)電泳的buffer和(he)gel都(dou)是新(xin)制(zhi)的,切(qie)膠的臺(tai)子清(qing)理(li)幹凈(jing),刀片也(ye)要洗(xi)凈(jing),確(que)保切(qie)下的沒(mei)有(you)外(wai)源dna汙(wu)染。
2. 為(wei)了(le)減少(shao)膠的體積(ji),可以用(yong)相(xiang)對比較(jiao)薄(bo)的膠來做,只要(yao)夠點樣(yang)即可,也(ye)可采(cai)用薄(bo)而(er)寬的梳(shu)子來跑膠。
3. 關(guan)於防(fang)護(hu),戴(dai)壹般(ban)有(you)機玻璃眼(yan)罩(zhao)就(jiu)足(zu)夠了,戴(dai)上防(fang)護(hu)面具也(ye)以保護眼睛,如果戴(dai)樹(shu)脂(zhi)眼鏡(jing)就(jiu)可以了(le)。要(yao)是非(fei)常(chang)害(hai)怕(pa)紫(zi)外(wai)照(zhao)射(she),或(huo)者(zhe)對於膠有(you)特殊要(yao)求(qiu),例如要求(qiu)不(bu)含(han)EB,可以采(cai)用點(dian)marker和(he)帶刻度(du)的尺子壹起(qi)照(zhao)相(xiang)的方(fang)法(fa)來確(que)定目(mu)的條(tiao)帶在膠上(shang)的位(wei)置(zhi)進行(xing)切(qie)膠。
4. 按(an)照(zhao)正(zheng)常(chang)程(cheng)序點(dian)marker跑膠,然後(hou)切(qie)下有(you)marker的膠,EB染色,紫(zi)外(wai)燈(deng)下與(yu)帶刻度(du)的尺子壹起(qi)照(zhao)相(xiang)。由(you)於要回(hui)收的帶與(yu)marker間(jian)的相(xiang)對位置已知,根據尺子來衡(heng)量未染色膠上(shang)目的帶的位(wei)置(zhi)即可。如果覺得(de)很(hen)難(nan)判(pan)斷,可以直(zhi)接(jie)在marker邊(bian)點(dian)少(shao)量的樣(yang),這樣(yang)位置(zhi)就(jiu)容(rong)易確(que)定了(le)。
二、使(shi)用(yong)凝(ning)膠成像(xiang)分(fen)析系統(tong)時的註(zhu)意事(shi)項(xiang)
凝(ning)膠成像(xiang)分(fen)析系統(tong):可以應用在蛋白電泳凝(ning)膠,DNA凝(ning)膠,樣(yang)品(pin)進行(xing)圖象(xiang)采(cai)集(ji)並(bing)進行(xing)定性(xing)和(he)定量分(fen)析,樣(yang)品(pin)包括(kuo):EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸監測;以(yi)及(ji)Coomassie Blue、SYPRO Orange、各種(zhong)染色的蛋白質凝(ning)膠如考染等。(或(huo)UV,EB和(he)有(you)色及可見(jian)樣(yang)品(pin)成像(xiang))
使(shi)用(yong)時需要註(zhu)意以(yi)下(xia)幾(ji)個(ge)方面:
• 註意開(kai)機順(shun)序(xu),先開(kai)凝(ning)膠成像(xiang)系統(tong),再(zai)打(da)開(kai)電腦進(jin)入軟(ruan)件(jian)。
• 紫(zi)外(wai)凝(ning)膠照(zhao)相(xiang)時要防(fang)止(zhi)EB 汙(wu)染儀器(qi),凝(ning)膠成像(xiang)系統(tong)的門(men)不(bu)能用汙(wu)染的手套(tao)接(jie)觸(chu),進(jin)行(xing)軟(ruan)件(jian)操(cao)作時同(tong)樣(yang)不能(neng)被(bei)汙(wu)染的手套(tao)接(jie)觸(chu)。
• 在使(shi)用(yong)紫(zi)外(wai)光源(yuan)照(zhao)相(xiang)的過程(cheng)中(zhong),不可以打(da)開(kai)凝(ning)膠成像(xiang)系統(tong)前面板。
• 照(zhao)相(xiang)後(hou)經廢膠取出,並(bing)用較(jiao)軟(ruan)的紙(zhi)擦(ca)拭幹凈(jing)。
• 調(tiao)焦(jiao)時要輕(qing),動(dong)作不(bu)要(yao)劇烈。
• 環(huan)境(jing)電壓不(bu)穩(wen)定時,請使(shi)用(yong)穩(wen)壓(ya)電源。使(shi)用(yong)過程(cheng)中(zhong)如遇斷電,請及(ji)時將(jiang)儀器(qi)電源關(guan)閉(bi),直至重(zhong)新(xin)來電。
• 使(shi)用(yong)時,請先打(da)開(kai)儀器(qi)的電源開(kai)關(guan),再打開(kai)電腦開(kai)關(guan)並(bing)打開(kai)軟(ruan)件(jian)( Quantity One )。
• 保持觀測室(shi)內(nei)環(huan)境(jing)幹燥,及(ji)時將(jiang)遺(yi)留(liu)在觀測板(ban)上(shang)的水或(huo)其(qi)他(ta)液體檫幹(可使(shi)用(yong)軟(ruan)質紙,壹般(ban)卷紙即(ji)可)。
• 觀測用(yong)EB(溴(xiu)乙(yi)錠(ding))染色的凝(ning)膠時,註意不(bu)要(yao)汙(wu)染儀器(qi)表面。千萬不要(yao)用(yong)手直(zhi)接(jie)接觸(chu)凝(ning)膠,或(huo)戴(dai)著(zhe)接(jie)觸(chu)過凝(ning)膠的手套(tao)去(qu)接觸(chu)儀(yi)器(qi)的門(men)和(he)觀測臺(tai)的把(ba)手。
• 使(shi)用(yong)儀(yi)器(qi)時,要將(jiang)門及觀測臺(tai)關緊(jin),否則(ze)將(jiang)無法正(zheng)常(chang)使(shi)用(yong)紫(zi)外(wai)燈(deng)。
• 盡可能不(bu)要(yao)將(jiang)電腦連(lian)接到(dao)因(yin)特網或(huo)局(ju)域網上,同(tong)時在電腦上(shang)安(an)裝殺毒軟(ruan)件(jian)(推(tui)薦使(shi)用(yong)正(zheng)版軟(ruan)件(jian)),做到(dao)專(zhuan)機專(zhuan)用。
• 較(jiao)長時間(jian)不用(yong)儀器(qi)時,請將(jiang)儀器(qi)用防(fang)塵(chen)罩(zhao)蓋(gai)上(shang)。
• 為(wei)延(yan)長燈(deng)管的使(shi)用(yong)壽命(ming),請(qing)觀測好(hao)凝(ning)膠後(hou)及(ji)時關閉(bi)光源(儀(yi)器(qi)自身(shen)有(you) 15 分(fen)鐘(zhong)的自(zi)動(dong)保護程(cheng)序)。
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