病毒純化(hua)方(fang)法

 病毒提(ti)純是(shi)病毒學研究的(de)重要前提(ti)，病毒的(de)相關詳細(xi)研究都需要(yao)高純度(du)的(de)病毒樣(yang)品(pin)。病毒純化(hua)是(shi)在病毒不(bu)受損、不(bu)失活(huo)的(de)前提(ti)下使用壹些(xie)物(wu)理(li)或(huo)化學方(fang)法，去(qu)除(chu)宿(xiu)主(zhu)細(xi)胞雜(za)質(zhi)組分，提(ti)取出高純度(du)濃縮的(de)病毒樣(yang)品(pin)。病毒純度(du)只(zhi)是壹(yi)個相對的(de)概念，我們通(tong)常會參考病毒的(de)物(wu)理(li)均(jun)壹性(xing)、病毒滴度、蛋(dan)白(bai)含(han)量比(bi)例(li)和免(mian)疫學反(fan)應(ying)來判(pan)斷(duan)病毒的(de)純度(du)。

  在疫苗的(de)制(zhi)備(bei)中(zhong)，需(xu)要(yao)先進的(de)分離純化(hua)技(ji)術和(he)設備。經(jing)典(dian)的(de)疫苗純化(hua)常用離心(xin)、過(guo)濾、沈降(jiang)、萃(cui)取等(deng)方(fang)法分(fen)離(li)純化(hua)，但(dan)隨著(zhe)對疫苗質(zhi)量和(he)安全有越來越(yue)高的(de)要求，疫苗純化(hua)進(jin)入了(le)色(se)譜時(shi)代，高性(xing)能的(de)離子交(jiao)換介質(zhi)、疏水層(ceng)析介(jie)質(zhi)、親(qin)和(he)層(ceng)析介(jie)質(zhi)等(deng)可(ke)滿(man)足(zu)疫苗純化(hua)的(de)各種(zhong)需(xu)求。

純化(hua)工藝(yi)介(jie)紹

病毒純化(hua)方(fang)法

1、離(li)子交(jiao)換層(ceng)析法

常規病毒層(ceng)析純化(hua)方(fang)法主(zhu)要采(cai)用(yong)離(li)子交(jiao)換。離子交(jiao)換層(ceng)析的(de)優(you)勢(shi)是介質(zhi)成本(ben)低(di)，可(ke)以在捕(bu)獲(huo)或(huo)者(zhe)中(zhong)純階(jie)段使用(yong)，能分(fen)離(li)與(yu)雜(za)質(zhi)有(you)不(bu)同離(li)子強(qiang)度(du)的(de)目標樣(yang)品(pin)。病毒衣(yi)殼(ke)大多帶負(fu)電(dian)荷(he)，可(ke)以選擇(ze)陰離子交(jiao)換介質(zhi)進(jin)行(xing)純化(hua)。

2、凝膠(jiao)過濾層(ceng)析法

凝膠(jiao)過濾層(ceng)析又(you)叫(jiao)分(fen)子篩(shai)，大多通(tong)過目的(de)樣(yang)品(pin)與雜(za)質(zhi)的(de)分子量或(huo)形狀(zhuang)差異來分(fen)離(li)。混合樣(yang)品(pin)過柱(zhu)時(shi)，分(fen)子量大或者(zhe)形(xing)狀更大的(de)物(wu)質(zhi)會(hui)因(yin)為(wei)不(bu)能通(tong)過介質(zhi)內部孔(kong)徑(jing)而提(ti)前出峰(feng)，而分(fen)子量小(xiao)或小(xiao)顆(ke)粒(li)物(wu)質(zhi)會(hui)因(yin)為(wei)經(jing)過介質(zhi)內部孔(kong)徑(jing)，路徑(jing)增(zeng)加而出峰(feng)延(yan)遲(chi)達(da)到分離的(de)效果(guo)。

3、多模(mo)式(shi)層(ceng)析法

多(duo)模(mo)式(shi)純化(hua)采(cai)用(yong)離(li)子交(jiao)換、分子篩(shai)、疏水以及氫鍵等多(duo)種作(zuo)用(yong)原理(li)。多(duo)模(mo)式(shi)純化(hua)是(shi)近些(xie)年來興(xing)起(qi)的(de)方(fang)法，此(ci)類(lei)介(jie)質(zhi)可(ke)以結合不(bu)同純化(hua)模(mo)式(shi)的(de)優(you)勢(shi)，單(dan)次(ci)純化(hua)獲(huo)得較(jiao)高純度(du)的(de)病毒，提(ti)高純化(hua)效率(lv)。

案例(li)分享

案(an)例(li)：流感病毒純化(hua)

根(gen)據(ju)上面介紹的(de)病毒純化(hua)工藝(yi)流程(cheng)和(he)相關層(ceng)析介(jie)質(zhi)，我(wo)們選擇(ze)流感病毒樣(yang)品(pin)對比(bi)凝膠(jiao)過濾層(ceng)析介(jie)質(zhi)和(he)多(duo)模(mo)式(shi)層(ceng)析介(jie)質(zhi)的(de)純化(hua)效果(guo)。

流感病毒樣(yang)品(pin)經(jing)過超濾後(hou)，分(fen)別使(shi)用(yong)Smartarose 4FF和Smac Core 700過柱(zhu)純化(hua)，純化(hua)後(hou)檢測病毒回(hui)收(shou)率(lv)。

 

凝膠(jiao)過濾層(ceng)析多(duo)模(mo)式(shi)層(ceng)析

表(biao)1.Smac Core 700和(he)Smartarose分別純化(hua)病毒樣(yang)品(pin)後(hou)回(hui)收(shou)率(lv)統(tong)計(ji)結果(guo)

純化(hua)方(fang)法總(zong)結(jie)

*N/A：未測定

Smac Core 700的(de)純化(hua)效果(guo)與經(jing)典(dian)的(de)Smartarose 4FF分子篩(shai)相近，但相同體積(ji)的(de)介質(zhi)，Smac Core 700的(de)處理量要(yao)遠(yuan)高於(yu)Smartarose 4FF。

總(zong)結(jie)

病毒純化(hua)三(san)種層(ceng)析模(mo)式(shi)各有(you)特(te)點(dian)（見下表(biao)），可(ke)以根據(ju)實(shi)際(ji)情(qing)況對純化(hua)工藝(yi)進(jin)行適(shi)當(dang)調(tiao)整(zheng)以獲(huo)得最合適(shi)且高效的(de)層(ceng)析條件(jian)。

粒(li)子交(jiao)換層(ceng)析法

使(shi)用(yong)的(de)相關純化(hua)試(shi)劑：