生命科(ke)學研(yan)究中常(chang)用的(de)幾種(zhong)實驗(yan)方法(fa)

生命科(ke)學研(yan)究時(shi)生物學的(de)分支(zhi)，下面介紹(shao)幾個關(guan)於(yu)生命科(ke)學常(chang)用的(de)幾種(zhong)實驗(yan)方法(fa)：
壹(yi)、BCA法(fa)測(ce)蛋(dan)白質濃(nong)度

實(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)：BCA(bicinchoninic acid，二(er)辛(xin)可(ke)酸(suan))法(fa)測(ce)定(ding)蛋(dan)白質即在堿(jian)性條件(jian)下蛋(dan)白質與Cu2+絡合(he)，並將(jiang)其還(hai)原(yuan)成(cheng)Cu1+。Cu1+和(he)BCA試(shi)劑反(fan)應(ying)使其(qi)由原(yuan)來的(de)蘋(ping)果(guo)綠(lv)形(xing)成(cheng)穩(wen)定(ding)的(de)紫藍色復(fu)合物，在562 nm有(you)強烈的(de)光吸收，且吸(xi)光值和(he)蛋(dan)白質濃(nong)度在(zai)廣泛範圍(wei)內有(you)良(liang)好的(de)線性關系，因(yin)此可用於蛋(dan)白質濃(nong)度測(ce)定(ding)。

二(er)、免(mian)疫(yi)組(zu)化

原(yuan)理(li):免(mian)疫(yi)組(zu)織(zhi)化學，即免疫(yi)組(zu)化，是應(ying)用免疫(yi)學(xue)基(ji)本(ben)原(yuan)理(li)壹(yi)-抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)反(fan)應(ying)，即抗(kang)原(yuan)與抗(kang)體(ti)特(te)異(yi)性結合(he)的(de)原(yuan)理(li)，通過(guo)化學反(fan)應(ying)使標(biao)記抗(kang)體(ti)的(de)顯色劑(ji)(熒光素、翻(fan)、金屬(shu)離(li)子、同(tong)位素)顯色來確(que)定組(zu)織(zhi)細胞內抗(kang)原(yuan)《多肽和(he)蛋(dan)白質)，對其(qi)進行定(ding)位、定(ding)性及定(ding)量的(de)研(yan)究。常用於免(mian)疫(yi)組(zu)化實驗(yan)的(de)有(you)組織(zhi)石蠟(la)切(qie)片、組織(zhi)冰(bing)凍(dong)切(qie)片、細胞爬片或細胞塗(tu)片。

三(san)、RNA提取(qu)（Trizol法(fa)）

Trizol試(shi)劑中的(de)主要成(cheng)分為異(yi)硫(liu)氰(qing)酸胍和(he)苯(ben)酚，其中(zhong)異(yi)硫(liu)氰(qing)酸胍可裂解(jie)細胞，促使(shi)核(he)蛋(dan)白體(ti)的(de)解(jie)離(li)，使(shi)RNA與蛋(dan)白質分離，並將(jiang)RNA釋放到(dao)溶(rong)液(ye)中。當加入氯仿時(shi)，它可(ke)抽提(ti)酸(suan)性的(de)苯(ben)酚，而酸(suan)性苯(ben)酚可促(cu)使(shi)RNA進入水相(xiang)，離心(xin)後(hou)可(ke)形成(cheng)水(shui)相(xiang)層和(he)有(you)機層，這(zhe)樣RNA與仍(reng)留(liu)在(zai)有(you)機相(xiang)中的(de)蛋(dan)白質和(he)DNA分離開。水相(xiang)層（無色）主要為(wei)RNA，有(you)機層（黃色(se)）主要為(wei)DNA和(he)蛋(dan)白質。

四(si)、RT-PCR

RT-PCR是(shi)將RNA的(de)反(fan)轉(zhuan)錄(lu)（RT）和(he)cDNA的(de)聚(ju)合(he)酶鏈式擴增(zeng)（PCR）相(xiang)結合(he)的(de)技(ji)術(shu)。首(shou)先(xian)經反(fan)轉(zhuan)錄(lu)酶的(de)作用從(cong)RNA合(he)成(cheng) cDNA，再(zai)以(yi)cDNA為(wei)模(mo)板(ban)，擴增(zeng)合成(cheng)目的(de)片段。RT-PCR可(ke)以壹(yi)步(bu)法(fa)或兩步(bu)法(fa)的(de)形(xing)式(shi)進(jin)行(xing)。在兩步(bu)法(fa)RT-PCR中，每壹(yi)步(bu)都在最佳條件(jian)下進行(xing)。

實(shi)驗(yan)步(bu)驟主要包(bao)括(kuo)：1、RNA的(de)提(ti)取(qu)；2、反(fan)轉(zhuan)錄(lu)合(he)成(cheng)cDNA；3、PCR擴增(zeng)；4、產(chan)物的(de)電泳(yong)和(he)結果(guo)的(de)測(ce)定(ding)。

五(wu)、實時(shi)熒光定量(liang)PCR（Q—PCR）（Real-time Quantitative PCR ）

利(li)用熒光信號的(de)變(bian)化實時(shi)檢測(ce)PCR擴增(zeng)反(fan)應(ying)中每壹(yi)個(ge)循(xun)環擴增(zeng)產(chan)物量的(de)變(bian)化，通過(guo)Ct值和(he)標(biao)準曲(qu)線的(de)關(guan)系對起(qi)始模(mo)板(ban)進(jin)行(xing)定(ding)量分析。

閾值：是(shi)循(xun)環開始3～15個(ge)循(xun)環的(de)熒(ying)光信號的(de)標(biao)準偏差(cha)的(de)10倍(bei)，設(she)定在擴增(zeng)曲線指(zhi)數增(zeng)長期。

C(t)值：熒(ying)光信號（擴增(zeng)產(chan)物）到(dao)達閾值時(shi)所(suo)經過的(de)擴增(zeng)循(xun)環次數。
 

蘇州(zhou)阿(e)爾(er)法(fa)生物14年(nian)專(zhuan)註(zhu)於實驗(yan)室儀(yi)器(qi)、科(ke)研儀(yi)器(qi)、實(shi)驗(yan)耗(hao)材、生(sheng)物試(shi)劑的(de)供應(ying)，致(zhi)力(li)於(yu)打(da)造(zao)實驗(yan)儀(yi)器、試(shi)劑和(he)耗材壹(yi)站(zhan)式(shi)采(cai)購服(fu)務平臺。