常(chang)用(yong)化學消毒(du)劑對(dui)諾卡菌(jun)屬的(de)消毒(du)效(xiao)果實驗對(dui)比

實驗目(mu)的(de)：通(tong)過常(chang)用(yong)化學消毒(du)劑對(dui)諾卡菌(jun)屬的(de)消毒(du)效(xiao)果，為(wei)諾(nuo)卡菌(jun)屬的(de)消毒(du)策略(lve)提(ti)供依(yi)據。
實驗方(fang)法(fa)： 以鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)為指(zhi)示(shi)菌(jun)，分(fen)別選(xuan)取(qu)高效(xiao)消毒(du)劑（含(han)氯(lv)類）、中(zhong)效(xiao)消毒(du)劑（醇(chun)類）、中(zhong)低效(xiao)消毒(du)劑（季(ji)銨鹽(yan)類）進行載(zai)體(ti)浸(jin)泡定(ding)量殺菌(jun)試(shi)驗，並(bing)以染(ran)有定(ding)量鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)的(de)不銹鋼(gang)臺面為(wei)對(dui)象進行物(wu)體(ti)表(biao)面消毒(du)模擬(ni)現(xian)場試(shi)驗。結(jie)果(guo) 載(zai)體(ti)浸(jin)泡定(ding)量殺菌(jun)試(shi)驗結(jie)果(guo)表(biao)明(ming)，60%乙(yi)醇(chun)作(zuo)用2min、有效(xiao)氯(lv)500mg/L 含(han)氯(lv)消毒(du)劑作(zuo)用 5min、1000mg/L季(ji)銨鹽(yan)作(zuo)用10min均(jun)可(ke)殺滅(mie)鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)物(wu)體(ti)表(biao)面消毒(du)模擬(ni)現(xian)場試(shi)驗中(zhong)，75%乙醇作(zuo)用5min，有效(xiao)氯(lv)1000mg/L含(han)氯(lv)消毒(du)劑作(zuo)用 10 min 均(jun)對(dui)鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)殺滅(mie)效(xiao)果，而(er)1900mg/L季(ji)銨鹽作用(yong)20min仍(reng)未能(neng)殺滅(mie)鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)。
實驗結(jie)論 ：針(zhen)對(dui)諾卡菌(jun)屬選(xuan)用(yong)常(chang)用(yong)化學消毒(du)劑時，可(ke)初(chu)選(xuan)醇(chun)類和含氯(lv)消毒(du)劑；若選(xuan)用(yong)季(ji)銨(an)鹽(yan)類消毒(du)劑，則(ze)需較(jiao)高的(de)濃(nong)度(du)和較(jiao)長(chang)的(de)作用時間。
具體實驗步(bu)驟(zhou)： 
1. 菌(jun)懸液(ye)的(de)制備(bei)
參(can)照2002年(nian)版(ban)《消毒(du)技(ji)術(shu)規範(fan)》的(de)方法(fa)，取(qu)鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)48 h新鮮(xian)培(pei)養物(wu)，用(yong)胰(yi)蛋(dan)白腖生理鹽(yan)水溶液(ye)(TPS)洗(xi)脫，加(jia)入有機(ji)幹擾(rao)物(wu)牛(niu)血(xue)清白蛋(dan)白，菌(jun)懸液(ye)濃(nong)度(du)為2.5×10⁷～2.5×10⁸ cfu/mL
2. 消毒(du)劑選(xuan)擇(ze)及配(pei)制
在(zai)實驗室(shi)常(chang)用(yong)消毒(du)劑中(zhong)，分(fen)別選(xuan)取(qu)高效(xiao)消毒(du)劑(84消毒(du)液(ye))、中(zhong)效(xiao)消毒(du)劑。(75%乙(yi)醇)和中(zhong)低效(xiao)消毒(du)劑(雙癸基二甲(jia)基(ji)溴(xiu)化銨(an))。用無(wu)菌(jun)標準(zhun)硬(ying)水配(pei)制成(cheng)使(shi)用(yong)濃(nong)度(du)。
3.中(zhong)和劑鑒(jian)定(ding)試(shi)驗
中(zhong)和劑為(wei)D/E中(zhong)和肉(rou)湯(tang)主要(yao)中(zhong)和成(cheng)分(fen)為0.1%硫(liu)乙醇(chun)酸鈉(na)、0.6%硫(liu)代(dai)硫(liu)酸鈉(na)、0.25%亞硫(liu)酸氫(qing)鈉、0.7%卵(luan)磷脂和0.5%吐溫(wen)80。按(an)2002年(nian)版(ban)《消毒(du)技(ji)術(shu)規範(fan)》)對(dui)上(shang)述(shu)消毒(du)劑進行中(zhong)和劑鑒(jian)定(ding)試(shi)驗。
4.載(zai)體(ti)浸(jin)泡定(ding)量殺菌(jun)試(shi)驗
以(yi)不(bu)銹(xiu)鋼(gang)圓片為載(zai)體(ti)，對(dui)鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)進行載(zai)體(ti)浸(jin)泡定(ding)量殺菌(jun)試(shi)驗。
5.對(dui)比實驗：
根(gen)據各類消毒(du)劑的(de)特性分(fen)別設(she)定(ding)3組(zu)作(zuo)用(yong)時間，以該(gai)消毒(du)劑的(de)常(chang)用(yong)濃(nong)度(du)為起(qi)始濃(nong)度(du)，若全殺滅(mie)則降(jiang)低濃(nong)度(du)繼續(xu)試(shi)驗，直至達到(dao)該消毒(du)劑的(de)min使用濃(nong)度(du)，對(dui)照組(zu)回收(shou)菌(jun)量為5×10⁵~5×10⁶cfu/片，殺滅(mie)對(dui)數值≥3.00判定(ding)為(wei)消毒(du)合(he)格。
6.物(wu)體(ti)表(biao)面消毒(du)模擬(ni)現(xian)場試(shi)驗
統(tong)壹(yi)使(shi)用(yong) 500 mL噴壺，以(yi)染(ran)有定(ding)量鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)的(de)不銹鋼(gang)試(shi)驗臺(tai)面為(wei)對(dui)象，用(yong)各消毒(du)劑的(de)常(chang)用(yong)濃(nong)度(du)進行定(ding)量噴灑(sa)消毒(du)。對(dui)照組(zu)回收(shou)菌(jun)量為5×10⁵~5×10⁶cfu/cm2,殺滅(mie)對(dui)數值≥3.00判定(ding)為(wei)消毒(du)合(he)格。
7.載(zai)體(ti)浸(jin)泡定(ding)量殺菌(jun)試(shi)驗結(jie)果(guo)
 3組(zu)消毒(du)劑以(yi)常(chang)用(yong)濃(nong)度(du)75%乙醇(chun)作用(yong)1 min、有效(xiao)氯(lv)1000 mg/L含(han)氯(lv)消毒(du)劑作(zuo)用2 min、1900 mg/L 季(ji)銨鹽(yan)作(zuo)用5 min均(jun)能殺滅(mie)鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)(表(biao)1)。3組(zu)消毒(du)劑降(jiang)低濃(nong)度(du)，60%乙醇(chun)作用(yong)2 min、有效(xiao)氯(lv)500 mg/L含(han)氯(lv)消毒(du)劑作(zuo)用5 min、1000 mg/L,季(ji)銨鹽(yan)作(zuo)用10 min均(jun)可(ke)殺滅(mie)鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)。

8.物(wu)體(ti)表(biao)面消毒(du)模擬(ni)現(xian)場試(shi)驗結(jie)果(guo)
3組(zu)消毒(du)劑以(yi)常(chang)用(yong)濃(nong)度(du)作用(yong)，即75%乙(yi)醇(chun)作(zuo)用5 min、1000 mg/L有效(xiao)氯(lv)作(zuo)用5 min可(ke)全殺滅(mie)諾卡菌(jun)；而(er)1900 mg/L季(ji)銨鹽作用(yong)20 min仍(reng)未殺滅(mie)諾卡菌(jun)，但殺滅(mie)對(dui)數值達到(dao)4.45,可(ke)判(pan)為消毒(du)合(he)格(表(biao)3)。

常(chang)用(yong)化學消毒(du)劑消毒(du)機(ji)理：
諾(nuo)卡菌(jun)屬細胞壁的(de)結構組(zu)成(cheng)與(yu)革蘭(lan)陽性菌(jun)相(xiang)似，其主要(yao)成(cheng)分(fen)為肽(tai)聚糖，N-乙酰葡(pu)萄糖胺和N-乙酰胞壁借助(zhu)β-1，4糖苷鍵連接成(cheng)鏈(lian)狀(zhuang)結構(gou)，再(zai)由(you)胞壁酸上(shang)的(de)短肽(tai)側鏈(lian)進壹(yi)步(bu)交(jiao)聯(lian)成(cheng)為(wei)立(li)體(ti)網(wang)格(ge)分(fen)子(zi)，增強(qiang)細(xi)胞壁的(de)保(bao)護(hu)效(xiao)果 ，防(fang)止(zhi)多(duo)種殺菌(jun)藥液(ye)滲(shen)入(ru)，理論上(shang)會(hui)導(dao)致(zhi)對(dui)化學(xue)消毒(du)劑的(de)抵抗力較(jiao)強(qiang)，消毒(du)難(nan)度(du)增大(da)。
乙醇(chun)廣(guang)泛用於皮膚黏(nian)膜(mo)以及醫(yi)療(liao)器(qi)械和精密儀(yi)器(qi)表(biao)面消毒(du)，消毒(du)機(ji)制是對(dui)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)脫水作用(yong)，以及蛋(dan)白質變性、凝固，破壞細(xi)胞壁和細胞膜(mo)的(de)結構功(gong)能(neng)，同時能夠(gou)破壞微(wei)生(sheng)物(wu)酶(mei)系(xi)統(tong)，阻(zu)礙(ai)其正常(chang)代(dai)謝(xie)83。對(dui)於放線菌(jun)來說，主要(yao)消毒(du)方(fang)法(fa)的(de)報道是土(tu)壤中(zhong)物(wu)理 或農(nong)藥的(de)殺滅(mie)試(shi)驗，關(guan)於乙醇對(dui)其消毒(du)效(xiao)果的(de)觀(guan)察(cha)未見(jian)報道。本研究(jiu)發(fa)現(xian)，載(zai)體(ti)浸(jin)泡定(ding)量殺菌(jun)試(shi)驗中(zhong)，75%的(de)乙醇作(zuo)用(yong)1 min對(dui)諾卡菌(jun)屬具有較(jiao)好(hao)殺滅(mie)效(xiao)果浸(jin)泡60%的(de)乙醇消毒(du)劑殺滅(mie)諾卡菌(jun)屬也僅(jin)需作用2min。這說明較(jiao)低濃(nong)度(du)的(de)乙醇仍(reng)然能(neng)有效(xiao)殺滅(mie)諾卡菌(jun)屬，或對(dui)乙醇(chun)為主要(yao)殺菌(jun)成(cheng)分(fen)或復配(pei)成(cheng)分(fen)的(de)消毒(du)劑生(sheng)產有指導(dao)意(yi)義(yi)。
含(han)氯(lv)消毒(du)劑溶(rong)於水能產生次氯(lv)酸(suan)，破壞微(wei)生(sheng)物(wu)細(xi)胞壁，繼而(er)進入細胞內(nei)，氧化(hua)破壞細(xi)胞成(cheng)分(fen)，使其代(dai)謝(xie)失(shi)調(tiao)、停(ting)止。在(zai)酸(suan)性環境中(zhong)含氯(lv)消毒(du)劑溶(rong)解過程能(neng)產生更(geng)多的(de)次氯(lv)酸(suan)，從(cong)而(er)使(shi)其殺菌(jun)能力增強(qiang)。同時，氯(lv)能(neng)與(yu)細胞中(zhong)代(dai)謝(xie)相(xiang)關(guan)的(de)酶(mei)形成(cheng)氮(dan)-氧化合(he)物(wu)，使(shi)細(xi)胞產生代(dai)謝(xie)障礙(ai)而(er)死(si)亡。有研究(jiu)發(fa)現(xian)，使用(yong)500mg/L 含氯(lv)消毒(du)劑擦(ca)拭重癥(zheng)醫(yi)學科(ke)物(wu)體(ti)表(biao)面，對(dui)多種(zhong)耐藥(yao)菌(jun)和耐碳青黴(mei)烯類鮑曼不(bu)動桿菌(jun)有殺滅(mie)效(xiao)果。
載(zai)體(ti)浸(jin)泡定(ding)量殺菌(jun)試(shi)驗結(jie)果(guo)顯(xian)示，500mg/L有效(xiao)氯(lv)作(zuo)用2、5、10min對(dui)鼻疽諾(nuo)卡菌(jun)均有殺滅(mie)效(xiao)果物(wu)體(ti)表(biao)面消毒(du)模擬(ni)現(xian)場試(shi)驗中(zhong)，有效(xiao)氯(lv)500mg/L含(han)氯(lv)消毒(du)劑作(zuo)用5min、有效(xiao)氯(lv)1000mg/L含(han)氯(lv)消毒(du)劑作(zuo)用2min 即(ji)有殺滅(mie)效(xiao)果，提(ti)示(shi)隨(sui)消毒(du)劑內(nei)有效(xiao)氯(lv)濃(nong)度(du)增加(jia)和作用時間延長(chang)，殺滅(mie)效(xiao)果也隨之提(ti)高。
季(ji)銨(an)鹽類化(hua)合(he)物(wu)是壹(yi)類陽離子(zi)表(biao)面活(huo)性劑，包(bao)括單(dan)鏈(lian)季銨(an)鹽(yan)和雙鏈(lian)季銨(an)鹽(yan)，其殺菌(jun)作用(yong)機(ji)制主要(yao)是帶正電荷的(de)陽離子(zi)通(tong)過異性電(dian)荷的(de)吸引作(zuo)用(yong)，在(zai)菌(jun)體表(biao)面濃(nong)集(ji)，再(zai)滲(shen)透擴(kuo)散(san)穿透細(xi)胞壁使其被(bei)破壞，經(jing)過被(bei)破壞的(de)細胞膜(mo)人侵到(dao)細胞內(nei)部，使蛋(dan)白質變性沈(chen)澱，酶(mei)活(huo)性受(shou)到損(sun)害，加(jia)速細菌(jun)調亡(wang)季(ji)銨(an)鹽是近(jin)些(xie)年(nian)在(zai)消毒(du)領域應(ying)用廣(guang)泛的(de)新型消毒(du)劑，對(dui)細菌(jun)、真(zhen)菌(jun)和親脂病(bing)毒(du)均(jun)有良好(hao)的(de)殺滅(mie)效(xiao)果。
季(ji)銨(an)鹽(yan)載(zai)體(ti)消毒(du)濕巾對(dui)耐甲(jia)氧西(xi)林金(jin)黃(huang)色(se)葡(pu)萄球(qiu)菌(jun)、泛耐(nai)藥(yao)鮑曼不(bu)動桿菌(jun)及泛(fan)耐(nai)藥銅綠假(jia)單胞菌(jun)均有較(jiao)好(hao)的(de)殺滅(mie)效(xiao)果。
另(ling)外(wai)，季(ji)銨鹽類消毒(du)劑有壹(yi)定(ding)持效(xiao)殺菌(jun)作用(yong)，單(dan)鏈(lian)季銨(an)鹽(yan)、復(fu)合(he)季銨(an)鹽和固化季銨(an)鹽(yan)，其殺菌(jun)持效(xiao)性依(yi)次(ci)增強；同樣(yang)，雙鏈(lian)季銨(an)鹽(yan)消毒(du)劑在(zai)較(jiao)低濃(nong)度(du)下（850mg/L）對(dui)表(biao)面噴霧(wu)後(hou)存放(fang)4h後(hou)，對(dui)大腸(chang)埃希菌(jun)、金(jin)黃(huang)色(se)葡(pu)萄球(qiu)菌(jun)和白色念珠菌(jun)仍(reng)具有良好(hao)的(de)持效(xiao)殺滅(mie)作用(yong)；
雙鏈(lian)季銨(an)鹽(yan)消毒(du)液(ye)（含(han)量0.3%±0.03%）對(dui)ICU物(wu)品(pin)表(biao)面的(de)消毒(du)適(shi)宜間隔時間為8h，研究(jiu)結果(guo)表(biao)明(ming)季(ji)銨(an)鹽(yan)具有持效(xiao)殺菌(jun)作用(yong)。
  在(zai)該(gai)實驗中(zhong)，載(zai)體(ti)定(ding)量殺菌(jun)濃(nong)度(du)1000 mg/L季銨(an)鹽，作(zuo)用(yong)10min可(ke)全殺滅(mie)諾卡菌(jun)；物(wu)體(ti)表(biao)面消毒(du)模擬(ni)現(xian)場試(shi)驗中(zhong)，1900mg/L季銨鹽(yan)才能達到(dao)殺滅(mie)效(xiao)果，說明日(ri)常(chang)消毒(du)過程中(zhong)可(ke)使(shi)用較(jiao)高濃(nong)度(du)的(de)季銨鹽(yan)並(bing)延長(chang)作用時間。

來源：蘇(su)州(zhou)阿(e)爾法(fa)生物(wu)實驗器(qi)材有限公(gong)司(si)