細胞轉染(ran)效(xiao)率(lv)低(di)的原因

細胞轉染(ran)效(xiao)率(lv)低(di)的原因

 細胞轉染(ran)實驗是指將DNA、RNA等外源(yuan)物(wu)質(zhi)通過電轉染(ran)或(huo)化學轉染(ran)的方式(shi)導入(ru)至細胞內(nei)的實驗方法。不(bu)同的細胞系轉染(ran)難度也各(ge)部相同，尤其是(shi)對生長(chang)條(tiao)件(jian)要(yao)求較為(wei)苛(ke)刻(ke)的細胞，比(bi)如(ru)原(yuan)代細胞的轉染(ran)效(xiao)率(lv)會遠(yuan)低(di)於(yu)其他細胞。這(zhe)裏， 盤(pan)點了(le)壹(yi)下那些(xie)可(ke)能(neng)導致(zhi)細胞轉染(ran)效(xiao)率(lv)低(di)的原因、轉染(ran)試劑選(xuan)擇(ze)指南(nan)，以便(bian)提升您(nin)的細胞轉染(ran)效(xiao)率(lv)。 

壹(yi)、實(shi)驗條件(jian)和操作(zuo)方法不(bu)合(he)規
正常(chang)情(qing)況下，做細胞轉染(ran)實驗前(qian)需(xu)要(yao)充(chong)足(zu)的準備，比(bi)如(ru)：細胞、DNA、轉染(ran)試劑、培養基(ji)等。除(chu)了(le)合(he)規的實驗條(tiao)件(jian)以外(wai)，還(hai)有(you)較為重要(yao)的就(jiu)是實(shi)驗操作(zuo)方法，實(shi)驗(yan)是(shi)壹(yi)個(ge)較為(wei)嚴(yan)謹的過程(cheng)，所(suo)以每(mei)壹(yi)步(bu)的操作(zuo)步(bu)驟都(dou)要(yao)嚴(yan)格(ge)按(an)照(zhao)操作(zuo)規程和說明(ming)書進行操作(zuo)，才能(neng)避免(mian)人(ren)為原(yuan)因所(suo)造成(cheng)的失誤(wu)。
二(er)、細胞活性(xing)不(bu)足(zu)，細胞密度不(bu)足(zu)
細胞的生長(chang)狀(zhuang)態(tai)對細胞的轉染(ran)效(xiao)率(lv)的影(ying)響較(jiao)大，細胞長(chang)勢(shi)弱或(huo)者細胞的鋪板(ban)密度過低(di)，可(ke)能(neng)會轉染(ran)試劑的細胞毒(du)性(xing)而導致(zhi)轉染(ran)效(xiao)率(lv)過低(di)，甚(shen)至(zhi)轉染(ran)失敗(bai)。因此細胞轉染(ran)時(shi)機(ji)應(ying)在細胞的對數生長(chang)期(qi)，細胞的鋪板(ban)密度壹(yi)般以90%-95左右(you)為宜。
三(san)、轉染(ran)的DNA或(huo)RNA濃度過低(di)、質(zhi)量(liang)過低(di)
如(ru)果(guo)轉染(ran)質(zhi)粒(li)的DNA或(huo)RNA的純度不(bu)夠(gou)，其中(zhong)的其它(ta)外源(yuan)物(wu)質(zhi)可(ke)能(neng)會幹(gan)擾(rao)細胞造成(cheng)輕(qing)微(wei)的細胞毒(du)性(xing)，進而影(ying)響到(dao)細胞的轉染(ran)效(xiao)率(lv)。正常(chang)情(qing)況下，用(yong)於(yu)細胞轉染(ran)的質(zhi)粒(li)濃度應(ying)大(da)於(yu)500ng/ul。在(zai)做RNA轉染(ran)實驗時(shi)，可(ke)以嘗試Lip RNAiMAX Transfection Reagent試劑，這(zhe)類試劑的細胞毒(du)性(xing)較低(di)，轉染(ran)效(xiao)率(lv)較高，並且操作(zuo)簡(jian)單易(yi)於(yu)優(you)化，比(bi)較(jiao)適(shi)用(yong)於(yu)高通量(liang)轉染(ran)。

四(si)、細胞本身轉染(ran)難度大 
細胞轉染(ran)效(xiao)率(lv)低(di)的原因還跟需(xu)要(yao)轉染(ran)的細胞類(lei)型(xing)有(you)關。細胞類(lei)型(xing)的不(bu)同，轉染(ran)效(xiao)率(lv)也會(hui)有(you)較大差別(bie)。尤其是(shi)MSC細胞、PSC幹(gan)細胞、神(shen)經幹(gan)細胞、原(yuan)代(dai)細胞等， 對於(yu)壹(yi)些(xie)較(jiao)難(nan)轉染(ran)的細胞，可(ke)以嘗試高效(xiao)率(lv)的轉染(ran)試劑或(huo)者使(shi)用(yong)其他轉染(ran)方法，靈(ling)活變(bian)化。比(bi)如(ru)：使(shi)用(yong)Lipofectamine  Stem試劑。
五(wu)、轉染(ran)試劑選(xuan)擇(ze)不(bu)當(dang)
轉染(ran)試劑的選(xuan)擇(ze)時(shi)保(bao)證(zheng)細胞轉染(ran)效(xiao)率(lv)的關鍵，低(di)質(zhi)量(liang)的轉染(ran)試劑可(ke)能(neng)具有(you)較強的細胞毒(du)性(xing)，操作(zuo)過程(cheng)繁(fan)雜，出(chu)現(xian)轉染(ran)效(xiao)果(guo)不(bu)穩(wen)定(ding)等現(xian)象(xiang)，遇(yu)到(dao)難轉細胞系甚(shen)至(zhi)出現(xian)轉染(ran)失敗(bai)。實(shi)驗室(shi)裏經常(chang)使(shi)用(yong)的LIP2000，LIP3000的轉染(ran)試采(cai)用(yong)脂(zhi)質(zhi)體(ti)納(na)米顆粒(li)技(ji)術，能(neng)夠(gou)將(jiang)轉染(ran)的效(xiao)率(lv)提升(sheng)10倍(bei)作(zuo)用(yong)，比(bi)較(jiao)適(shi)合(he)用(yong)於(yu)HEK293、原(yuan)代細胞、幹(gan)細胞等難以轉染(ran)的細胞類(lei)型(xing)，並且還(hai)具(ju)有(you)可(ke)重復性。
        以上(shang)總(zong)結的是壹(yi)些(xie)常(chang)見(jian)的影(ying)響細胞轉染(ran)效(xiao)率(lv)的因素，可(ke)供(gong)實驗參考(kao)，更多關於(yu)細胞轉染(ran)效(xiao)率(lv)的原因 、LIP3000、LIP2000相關產(chan)品需(xu)求可(ke)進入(ru)蘇州阿(e)爾法生物(wu)網(wang)站。