Lip 3000轉染試劑與(yu)Lipofectamine2000的(de)區(qu)別(bie)

Lipofectamine 3000簡(jian)稱(cheng)LIP3000采用了(le)脂質體納米(mi)微粒技(ji)術，提供(gong)了(le)出(chu)眾的(de)轉(zhuan)染性(xing)能(neng)和(he)可(ke)重復(fu)的結(jie)果(guo)。它(ta)適用(yong)於各種難(nan)以(yi)轉染的(de)細(xi)胞和(he)常見(jian)的細(xi)胞，在保(bao)證(zheng)轉染效率的(de)同時也提高(gao)了(le)細胞存(cun)活(huo)率。 Lipofectamine 3000試劑可(ke)以(yi)將(jiang)難(nan)轉(zhuan)染細(xi)胞系的(de)轉染效率提升(sheng)10倍(bei)左右(you)，同時還可(ke)以(yi)降低(di)細(xi)胞的死亡率(lv)。

   另(ling)外，LIP 3000還具(ju)有(you)多(duo)功能(neng)性(xing)，在某(mou)些情況下(xia)，它(ta)甚至(zhi)可(ke)以(yi)取代(dai)電(dian)穿(chuan)孔，由於提升(sheng)了(le)轉染後(hou)細(xi)胞的存(cun)活(huo)率，從而也簡(jian)化(hua)了(le)工作流(liu)程。盡(jin)管Lipofectamine 2000十(shi)分(fen)受歡迎(ying)，但對(dui)於某(mou)些(xie)敏(min)感的細(xi)胞，依(yi)然存(cun)在(zai)細(xi)胞毒(du)性(xing)。為(wei)此，在Lipofectamine 3000的(de)開發(fa)過程中，科學家(jia)們優化了轉(zhuan)染過程的四個步驟(zhou)，並(bing)結(jie)合(he)了先(xian)進(jin)的(de)脂質體納米(mi)微粒技(ji)術。所(suo)以(yi)，Lipofectamine 3000減(jian)少了(le)試劑的用(yong)量(liang)，並(bing)降低(di)潛在(zai)的毒(du)性(xing)風險(xian)。

LIP3000和(he)LIP2000的(de)區(qu)別(bie)是什麽？轉(zhuan)染效率如(ru)何(he)？

    通過科學家(jia)使用這兩種試劑來(lai)轉染來(lai)自(zi)各種組(zu)織(zhi)的癌(ai)細胞。研究(jiu)結(jie)果(guo)證(zheng)實，Lipofectamine 3000試劑的轉(zhuan)染性(xing)能(neng)高(gao)於lip2000。使用Lipofectamine 2000，只(zhi)有25%的癌(ai)細(xi)胞系被(bei)認(ren)為(wei)是容(rong)易轉(zhuan)染的(de)（轉(zhuan)染效率高(gao)於(yu)50%），而使用Lipofectamine 3000，這個比(bi)例(li)高達(da)60%。 

此外，Lipofectamine 3000還促進(jin)了(le)新(xin)的技(ji)術，如(ru)當(dang)下(xia)流(liu)行的基(ji)因組(zu)編(bian)輯。GeneArt TALs和(he)CRISPR靶(ba)定了(le)HepG2和(he)U2OS細(xi)胞中的AAVS1位(wei)點。采用新(xin)的轉(zhuan)染試劑後(hou)，研究(jiu)人員發現(xian)轉染效率、平(ping)均(jun)熒(ying)光(guang)強度(du)和(he)基(ji)因組(zu)切割改善。這些(xie)進(jin)步(bu)可(ke)實現(xian)更(geng)輕松(song)的(de)幹(gan)細(xi)胞操作，增(zeng)強轉基(ji)因的位(wei)點特異(yi)性(xing)插入(ru)。

什麽是脂質(zhi)體？ 
　脂(zhi)質體脂(zhi)質體是類似(si)於(yu)細胞膜(mo)的(de)具(ju)有(you)高(gao)親(qin)和(he)力(li)的(de)囊(nang)泡(pao)，將(jiang)DNA放(fang)入(ru)其(qi)中（準確(que)地(di)說，DNA包(bao)裹在脂質體中）並(bing)導入(ru)細胞。大多(duo)數脂質(zhi)體是脂質(zhi)和(he)亞精(jing)胺衍生物(wu)結(jie)合(he)的類(lei)型(xing)。我嘗試了 Lipofectamin、Lipofectamin2000、Lip3000、Tlansfectine、Tlansfectum、DMRIEC、SuparFect、Fugen6、Tf-x、Do-fecto，將(jiang) Lipofectamin 與(yu)試劑結(jie)合(he)使用。現(xian)在可(ke)以(yi)轉染大(da)多(duo)數貼壁細(xi)胞系。

脂質(zhi)體的(de)制(zhi)備和(he)轉(zhuan)染過程：
 待轉(zhuan)染的(de)細(xi)胞應在(zai)前(qian)壹天(tian)接(jie)種。具(ju)體轉(zhuan)染步(bu)驟(zhou)如(ru)下(xia)： 
1. 1. 向(xiang) Opti-MEM50ul 中加(jia)入(ru) DNA 溶(rong)液(ye)（1ug；即使在引入多(duo)個質粒時也總共(gong) 1ug）並(bing)混(hun)合(he)。
2. 2. 將(jiang) Plus Regent (4ul) 添加(jia)到(dao) opti-MEM50ul 中並(bing)與(yu) 1 混(hun)合(he)。靜置15分(fen)鐘(zhong)。在此(ci)期(qi)間(jian)，將(jiang)細(xi)胞更(geng)換(huan)為(wei)無(wu)血(xue)清培(pei)養基(ji)（不包(bao)括抗生(sheng)素(su)）。
3. 3. 將(jiang) Lipofectoamine (2ul) 添加(jia)到(dao) opti-MEM100ul 中並(bing)與(yu) 2 混(hun)合(he)。靜置15分(fen)鐘(zhong)。用顯(xian)微(wei)鏡(jing)強烈(lie)放(fang)大(da)時可(ke)以(yi)觀察(cha)到(dao)細(xi)顆粒。
4. 用(yong)新(xin)的 600 ul 無(wu)血(xue)清培(pei)養基(ji)更(geng)換(huan)細胞培(pei)養基(ji)。3. 3. 添加(jia)脂(zhi)質(zhi)體並(bing)緩慢混(hun)合(he)。
5. 2-4 小時後(hou)（2 小時即(ji)可(ke)）加(jia)入(ru) 800 ul 20% 血(xue)清培(pei)養基(ji)。
6. 再(zai)過 2-4 小時後(hou)，用(yong) 10% 血(xue)清培(pei)養基(ji)（不含(han)抗生(sheng)素）更(geng)換(huan)培(pei)養基(ji)。
（換液(ye)隔天(tian)重新(xin)電(dian)鍍(du)） 
細(xi)胞轉染時的(de)註(zhu)意事項： 
 盡(jin)量使用聚(ju)苯乙烯(xi)設備（48孔板方(fang)便(bian)）。DNA 在小量制(zhi)備水(shui)平上(shang)的純化(hua)程度(du)較(jiao)低。將(jiang)其(qi)與(yu) maxi 壹(yi)起(qi)使用並(bing)與(yu) CsCl 結(jie)合(he)，或(huo)通過用苯酚/氯(lv)仿(fang)提取(qu) minipresed DNA 並(bing)用 EtOH 沈澱來(lai)使用它(ta)。

2. 或(huo)者，如(ru)果(guo)在(zai)步驟(zhou) 3 中形成了(le)大(da)的團(tuan)塊，那是由於 DNA 純化(hua)程度(du)低(di)。如(ru)果(guo)在(zai)轉染後(hou)的(de)第(di)二(er)天(tian)觀察(cha)到(dao)真菌汙(wu)染，則(ze)主要認(ren)為(wei)是從質粒 DNA 或(huo)其(qi)管中攜帶的(de)。更(geng)換(huan)10%血(xue)清培(pei)養基(ji)（不含(han)抗生(sheng)素）後(hou)，細(xi)胞在4小時左右(you)即(ji)可(ke)恢復(fu)，因此可(ke)通過更(geng)換(huan)10%血(xue)清培(pei)養基(ji)（含抗(kang)生素(su)）來(lai)防止(zhi)汙(wu)染。 

3. 通常在轉(zhuan)染後(hou)24 至(zhi) 72 小時觀(guan)察(cha)到(dao)轉(zhuan)基(ji)因的表(biao)達。
 4.正(zheng)常情況下(xia)峰(feng)值為(wei)48小時，但當細胞瞬時表(biao)達(da)且(qie)細胞增(zeng)殖能(neng)力(li)高時，表(biao)達(da)水平(ping)會相對(dui)低於(yu)24小時。在(zai)報(bao)告基(ji)因檢測中，轉染後(hou)的(de)第(di)二(er)天(tian)，需(xu)要將(jiang)48孔板稀釋1/3至(zhi)2/3倍(bei)並(bing)重新(xin)鋪展(zhan)，貼(tie)壁培(pei)養。正(zheng)常的核(he)受體配(pei)體反(fan)應(ying)在大(da)約 8 到(dao) 12 小時內(nei)誘(you)導(dao)報(bao)告產物(wu)。

       蘇州(zhou)阿(e)爾(er)法(fa)生(sheng)物(wu)實驗(yan)器(qi)材有限(xian)公司(si)十(shi)三(san)年專註(zhu)於(yu)生物(wu)實驗(yan)室(shi)儀(yi)器(qi)設備及(ji)實驗(yan)試劑耗材的供(gong)應(ying)商，主要供(gong)應(ying)的生物(wu)試劑包括 細胞轉染試劑、Lipofectamine 2000、LIP3000 轉染試劑盒、天(tian)根(gen)試劑盒、碧(bi)雲(yun)天(tian)試劑等(deng)細胞學、分(fen)子生物(wu)學、生(sheng)命科學相關(guan)的(de)試劑及耗(hao)材，另外提供(gong)生(sheng)物(wu)反(fan)應(ying)器、發(fa)酵罐(guan)、振蕩(dang)培(pei)養箱(xiang)、移(yi)液器、離心(xin)機(ji)、顯(xian)微(wei)鏡(jing)、純水(shui)機(ji)等(deng)實驗(yan)室(shi)設備