siRNA轉(zhuan)染試(shi)劑與轉(zhuan)染方(fang)法介紹

 RNA 代(dai)表核糖(tang)核(he)酸(suan)和(he) siRNA——小幹擾 RNA（也(ye)稱為沈默(mo) RNA）。siRNA 是(shi)分子(zi)中的(de)壹(yi)種(zhong)短(duan) (21-23 bp) 雙鏈(lian) RNA 核苷(gan)酸(suan)，在細(xi)胞中發(fa)揮各(ge)種(zhong)生(sheng)物系統的(de)功能。siRNA轉(zhuan)染是(shi)“轉(zhuan)移(yi)"，將siRNA細(xi)胞內轉(zhuan)移(yi)到(dao)細(xi)胞中，這(zhe)是(shi)壹個(ge)涉及(ji)基因(yin)沈默(mo)的過(guo)程(cheng)。為了(le)成(cheng)功優化(hua) siRNA 轉(zhuan)染，需(xu)要(yao)合適(shi)的(de)轉(zhuan)染試(shi)劑和(he)轉(zhuan)染方(fang)法來進行(xing)體(ti)外和(he)體(ti)內RNAi 實(shi)驗。這(zhe)些(xie)過程(cheng)因細(xi)胞類型和(he)轉(zhuan)染方(fang)法而(er)異。對(dui)於(yu)siRNA轉(zhuan)染有(you)許多(duo)針對(dui)特定(ding)細(xi)胞類型優(you)化(hua)的體(ti)外siRNA 轉(zhuan)染試(shi)劑。

siRNA轉(zhuan)染技(ji)術(shu)

   體(ti)內siRNA於(yu)siRNA轉(zhuan)染技(ji)術(shu) 應用(yong)是(shi)基於(yu)納米(mi)顆粒(li)、聚合物或(huo) 脂(zhi)質(zhi)體(ti)的壹(yi)種(zhong)技(ji)術(shu)。

    科學(xue)家們(men)發(fa)現 siRNA 在大規(gui)模(mo)沈默(mo)基因(yin)表(biao)達(da)和(he)研究(jiu)基因(yin)功能方(fang)面(mian)比較(jiao)有(you)價值。此(ci)類實驗(yan)的成(cheng)功通(tong)常(chang)取決(jue)於(yu) siRNA的轉(zhuan)染方(fang)法。可以(yi)使(shi)用(yong)優(you)化的 轉(zhuan)染試(shi)劑 和(he)試劑盒在體(ti)外和(he)體(ti)內轉(zhuan)染 siRNA。

    影(ying)響siRNA 轉(zhuan)染效(xiao)率的因(yin)素(su)主要(yao)包(bao)括(kuo)培養(yang)細(xi)胞的生長狀況、轉(zhuan)染發(fa)生的(de)條件、引(yin)入(ru)的轉(zhuan)染方(fang)法、以及(ji)實驗(yan)中使(shi)用(yong)的(de) siRNA 的質(zhi)量和(he)數量(liang)。

同(tong)時，細(xi)胞密度(du)、體(ti)積(ji)、暴(bao)露時間(jian)和(he) siRNA 細(xi)胞的數量對(dui) siRNA 轉(zhuan)染的(de)成(cheng)功率以(yi)及(ji)在 穩定轉(zhuan)染實(shi)驗中建(jian)立(li)穩定的 RNAi 敲低細(xi)胞系也(ye)起(qi)著(zhe)重(zhong)要(yao)作(zuo)用(yong)。

RNAi 誘(you)導(dao)的(de)基(ji)因沈(chen)默(mo)通(tong)常(chang)用(yong)於(yu)研究(jiu)培養(yang)細(xi)胞中的(de)基(ji)因功能。大多(duo)數情況(kuang)下(xia)，這些(xie)基(ji)因功能是(shi)由引(yin)入(ru)小幹擾 RNA (siRNA) 或(huo) microRNA (miRNA) 的(de)介入(ru)所引(yin)起(qi)的(de)。siRNA 分(fen)子(zi)屬(shu)於(yu)雙鏈(lian)，長度(du)為 20-24 個堿(jian)基(ji)對(dui)，終止於(yu)具有(you)磷酸(suan)化(hua) 5' 和(he)羥基(ji)化 3' 末端的兩個(ge)突出核苷酸(suan)。壹(yi)個(ge) miRNA 分(fen)子是(shi)單鏈(lian)的，有(you) 22 個核(he)苷(gan)酸(suan)長(chang)；它(ta)與 RNA 的(de)互補片段結(jie)合形成(cheng)雙鏈(lian)分子(zi)。這兩(liang)種(zhong)分(fen)子(zi)都可能在細(xi)胞中自然(ran)產(chan)生(sheng)，也(ye)可能是(shi)人工(gong)引(yin)入(ru)的，它(ta)們(men)的作(zuo)用(yong)可能會(hui)持續(xu)三到七天。

  siRNA體(ti)內轉(zhuan)染現(xian)狀

由於(yu) siRNA 具有(you)穩定性差(cha)、遞送(song)效(xiao)率低、生(sheng)物分布不正(zheng)確(que)以及(ji)靶(ba)向(xiang)特定(ding)組織等(deng)缺點(dian)，因(yin)此(ci)體(ti)內 RNAi 研究(jiu)面臨(lin)了(le)許多(duo)技術(shu)挑戰(zhan)。這些技術(shu)挑戰(zhan)意(yi)味著(zhe)不適(shi)宜(yi)在動物身(shen)上進行 大量(liang)的(de)RNAi 實(shi)驗。

 siRNA體(ti)內轉(zhuan)染主(zhu)要(yao)方(fang)法：是(shi)通(tong)過(guo) RNAi技術(shu)：即(ji)：使用(yong) siRNA 或(huo) miRNA 、質(zhi)粒(li) DNA 、病毒(du)載(zai)體(ti)等(deng)，在體(ti)內表(biao)達(da)生成(cheng)短鏈(lian) RNA (shRNA)，隨後加工成(cheng)活性(xing) siRNA。壹般來說(shuo)，基於(yu)病毒(du)的(de) shRNA 載體(ti)在體(ti)內提(ti)供(gong)較(jiao)高的(de)遞送(song)效(xiao)率，但構(gou)建(jian)起(qi)來比較(jiao)耗費(fei)時間(jian)，並且(qie)存(cun)在免疫(yi)原性(xing)等(deng)問題(ti)。

使(shi)用(yong) RNAi 技(ji)術(shu)面臨(lin)的主要(yao)挑(tiao)戰(zhan)之(zhi)壹(yi)是(shi)成(cheng)功地將穩定的功能性 siRNA 或(huo) microRNA 分(fen)子(zi)傳(chuan)遞到目(mu)標(biao)組織。siRNA 或(huo) miRNA 必(bi)須(xu)克(ke)服(fu)核(he)酸(suan)酶(mei)的降解，逃避先天免(mian)疫系(xi)統的(de)檢測(ce)，從而(er)減少脫靶(ba)效(xiao)應(ying)並被(bei)靶(ba)組織所吸(xi)收。近(jin)來研究(jiu)發(fa)現對(dui) siRNA 或(huo) miRNA 進(jin)行(xing)化(hua)學修(xiu)飾(shi)可以(yi)增(zeng)加它(ta)們(men)在體(ti)內的(de)穩定性。這些(xie)化(hua)學(xue)修(xiu)飾(shi)維(wei)持了(le) siRNA 分子(zi)的效(xiao)力、功效和(he)特異(yi)性(xing)，並增(zeng)加了(le)它(ta)們(men)在生物體(ti)動態(tai)環(huan)境中的(de)整體(ti)穩定性。

   目(mu)前(qian)市(shi)場(chang)上常用(yong)的(de)siRNA轉(zhuan)染試(shi)劑主要(yao)有(you)RFect 系列轉(zhuan)染試(shi)劑盒、Lipo2000、Lipo3000，RNAiMAX等(deng)都可以(yi)用(yong)於(yu)siRNA的體(ti)外化(hua)學轉(zhuan)染法。

     蘇(su)州阿(e)爾(er)法生物實驗器(qi)材有(you)限公(gong)司(si)十三(san)年(nian)專註(zhu)於(yu)生物實驗室(shi)儀(yi)器(qi)設備及(ji)實驗(yan)試劑耗材的供(gong)應(ying)商，主要(yao)供(gong)應(ying)的生物試劑包括(kuo) 細(xi)胞轉(zhuan)染試(shi)劑、siRNA轉(zhuan)染試(shi)劑、質(zhi)粒(li)轉(zhuan)染試(shi)劑、天根(gen)試劑盒、碧雲(yun)天(tian)試(shi)劑等(deng)細(xi)胞學、分子生物學、生命(ming)科學(xue)相關(guan)的(de)試劑及(ji)耗材，另(ling)外提(ti)供(gong)生(sheng)物反應(ying)器(qi)、發(fa)酵(jiao)罐(guan)、振(zhen)蕩培養(yang)箱(xiang)、移(yi)液(ye)器(qi)、離(li)心機、顯(xian)微(wei)鏡(jing)、純水機等(deng)實驗(yan)室(shi)設(she)備，更(geng)多(duo)siRNA轉(zhuan)染 試(shi)劑相關(guan)問(wen)題(ti)進(jin)入(ru)了(le)解。

   關(guan)鍵(jian)詞(ci)：試(shi)劑  細(xi)胞轉(zhuan)染  科(ke)學  生物技術(shu)  轉(zhuan)染試(shi)劑 轉(zhuan)染方(fang)法 siRNA轉(zhuan)染試(shi)劑