如何(he)提高細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)

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細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)是(shi)將(jiang)外來(lai)核(he)酸RNA或(huo)DNA 等小(xiao)分子(zi)物質(zhi)轉移(yi)到(dao)健(jian)康(kang)細(xi)胞(bao)中(zhong)以(yi)產(chan)生“轉基(ji)因細(xi)胞(bao)"的(de)過(guo)程。 在轉染(ran)過(guo)程(cheng)中(zhong)，外源(yuan)核酸(suan)鏈進(jin)入健康細(xi)胞(bao)後(hou)，核(he)酸(suan)與(yu)細(xi)胞(bao)中(zhong)現(xian)有(you)的(de) DNA 結(jie)合(he)，形(xing)成壹(yi)個轉基(ji)因細(xi)胞(bao)。細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)過(guo)程(cheng)中(zhong)如何(he)提高轉染(ran)效(xiao)率(lv)，轉染(ran)效(xiao)率(lv)的(de)影(ying)響(xiang)因(yin)素有(you)哪些(xie)。
細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)的(de)主(zhu)要(yao)方(fang)法(fa)是(shi)什麽？
細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)主(zhu)要(yao)分為(wei)兩大(da)類(lei)，即(ji)：穩(wen)定(ding)轉染(ran)和瞬時(shi)轉染(ran)。
     穩(wen)定(ding)轉染(ran)是(shi)將(jiang)外源(yuan)核酸(suan)繞(rao)過細(xi)胞(bao)膜(mo)，進(jin)入細(xi)胞(bao)，並通過(guo)核膜(mo)傳遞從而(er)使外源(yuan)核酸(suan)與(yu)宿主(zhu) DNA（或(huo) RNA）整合(he)以(yi)產(chan)生修(xiu)飾(shi)基(ji)因。這種轉染(ran)方(fang)式所(suo)培(pei)育(yu)的(de)細(xi)胞(bao)後(hou)代(dai)都(dou)將(jiang)整合(he)這種修(xiu)飾(shi)基(ji)因，主(zhu)要(yao)應用領(ling)域(yu)為(wei)：藥物篩(shai)選(xuan)、研(yan)究(jiu)形(xing)態變(bian)化、抗生素耐藥性等(deng)。
瞬時轉(zhuan)染(ran)是(shi)將(jiang)外源(yuan)核酸(suan)繞(rao)過細(xi)胞(bao)膜(mo)進(jin)入細(xi)胞(bao)，並且（如果是(shi) DNA）通過(guo)核膜(mo)傳遞。與(yu)穩(wen)定(ding)轉染(ran)的(de)區(qu)別(bie)是(shi)：外源(yuan) DNA 不(bu)會(hui)整合(he)到(dao)宿主(zhu) DNA 中(zhong)，而(er)是(shi)通過(guo)蛋(dan)白(bai)質(zhi)生產(chan)繼(ji)續(xu)表(biao)達(da)自(zi)己。
      瞬時(shi)轉(zhuan)染(ran)方(fang)式的(de)主(zhu)要(yao)特(te)點(dian)是(shi)：外源(yuan) DNA 不(bu)會(hui)傳(chuan)遞給未(wei)來的(de)細(xi)胞(bao)後(hou)代(dai)，所(suo)以(yi)環(huan)境因(yin)素(su)改改(gai)變或(huo)細(xi)胞(bao)分裂(lie)產(chan)生都(dou)將(jiang)終止表(biao)達(da)。瞬(shun)時轉(zhuan)染(ran)有(you)助(zhu)於(yu)了(le)解基(ji)因沈(chen)默(mo)、抑制性(xing) RNA 和小(xiao)規模(mo)蛋(dan)白(bai)質(zhi)生產(chan)。
至(zhi)於，實驗中(zhong)選(xuan)擇哪種轉染(ran)方(fang)法(fa)，其實主(zhu)要(yao)取(qu)決(jue)於(yu)兩個因素(su)：妳(ni)的(de)研(yan)究(jiu)方(fang)向和正在(zai)使用的(de)細(xi)胞(bao)區(qu)別(bie)。

細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)過(guo)程(cheng)：
細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)按細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)過(guo)程(cheng)的(de)不(bu)同(tong)可(ke)以(yi)分為(wei)以(yi)下(xia)幾種：
生物轉(zhuan)染(ran)：通常(chang)被(bei)稱為(wei)轉導(dao)，方(fang)法(fa)是(shi)通過(guo)病毒感(gan)染(ran)方(fang)式將(jiang) DNA 整合(he)到(dao)宿主(zhu)細(xi)胞(bao)核(he)中(zhong)進(jin)行復(fu)制(zhi)。也是(shi)醫(yi)學研(yan)究(jiu)的(de)常(chang)用方(fang)法(fa)。
化學 轉(zhuan)染(ran)：化學轉(zhuan)染(ran)法(fa)是(shi)通過(guo)陽(yang)離(li)子聚(ju)合(he)物和脂質(zhi)體(ti)將(jiang)核(he)酸(suan)鏈帶入細(xi)胞(bao)。通過(guo)使細(xi)胞(bao)帶負電(dian)和聚合(he)物帶正電(dian)，這(zhe)兩(liang)者被(bei)吸(xi)引，最(zui)終核酸(suan)沈(chen)積(ji)在(zai)細(xi)胞(bao)中(zhong)的(de)細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)方(fang)法(fa)。
物理(li)轉染(ran)：物理(li)轉染(ran)法(fa)是(shi)基(ji)於電(dian)流(liu)、激(ji)光(guang)的(de)轉(zhuan)染(ran)方(fang)法(fa)。比如：通過(guo)電(dian)轉(zhuan)儀實現轉(zhuan)染(ran)或(huo)者通過(guo)光轉染(ran)的(de)方(fang)式，使激(ji)光(guang)束(shu)會(hui)在(zai)特(te)定的(de)亞(ya)細(xi)胞(bao)位置產(chan)生孔洞，來傳遞外源(yuan)核酸(suan)。
決(jue)定(ding)細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)的(de)因(yin)素有(you)哪些(xie)？
決定(ding)細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)主(zhu)要(yao)的(de)幾個因素(su)：
1. 細(xi)胞(bao)群(qun)的(de)生長(chang)態勢(shi)與(yu)細(xi)胞(bao)活(huo)力：-在創建細(xi)胞(bao)分析(xi)的(de)過(guo)程中(zhong)，細(xi)胞(bao)活(huo)力往(wang)往(wang)具(ju)有(you)決(jue)定性的(de)作用。如果沒(mei)有(you)健(jian)康的(de)細(xi)胞(bao)群(qun)，那麽轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)也相對低(di)下(xia)，甚至(zhi)還會(hui)得到(dao)不(bu)正(zheng)確(que)和誤(wu)導(dao)性(xing)的(de)結(jie)果。
2.細(xi)胞(bao)融(rong)合(he)度：細(xi)胞(bao)的(de)融(rong)合(he)度衡量細(xi)胞(bao)在(zai)給(gei)定(ding)表面(mian)上(shang)的(de)堆積程(cheng)度（不(bu)要(yao)與(yu)細(xi)胞(bao)密(mi)度混(hun)淆(xiao)）。50% 的(de)細(xi)胞(bao)匯(hui)合(he)意味著(zhe)壹(yi)半的(de)表(biao)面(mian)被(bei)覆蓋。融(rong)合(he)過少(shao)或(huo)過多(duo)都(dou)會(hui)影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)對轉(zhuan)染(ran)的(de)接(jie)受(shou)程(cheng)度。
3.細(xi)胞(bao)類(lei)型(xing)：不(bu)同(tong)類(lei)型(xing)的(de)細(xi)胞(bao)具(ju)有(you)不(bu)同(tong)的(de)壽(shou)命、細(xi)胞(bao)壁特(te)征及(ji)功(gong)能(neng)。比(bi)如部分細(xi)胞(bao)容(rong)易進(jin)行轉(zhuan)染(ran)，而(er)有(you)些(xie)細(xi)胞(bao)則(ze)本(ben)身就(jiu)難以(yi)轉(zhuan)染(ran)，所(suo)以(yi)轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)也會(hui)存(cun)在差異(yi)。
4.轉染(ran)的(de)核(he)酸類型：不(bu)同(tong)核(he)酸(suan)的(de)復(fu)雜(za)程度也不(bu)相同。比(bi)如：DNA的(de)結(jie)構 比 RNA 復(fu)雜(za)，而(er) RNA 比某(mou)些(xie)單(dan)獨的(de)核(he)酸鏈更(geng)復(fu)雜(za)。壹(yi)般(ban)來(lai)說，核酸復(fu)雜(za)的(de)，轉(zhuan)染(ran)過(guo)程(cheng)相對困(kun)難，轉染(ran)效(xiao)率(lv)相應也較低(di)。
5.轉(zhuan)染(ran)方(fang)法(fa)：使用不(bu)同(tong)的(de)轉(zhuan)染(ran)方(fang)法(fa)，所(suo)獲(huo)得的(de)細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)也是(shi)不(bu)壹(yi)樣的(de)。

如何(he)提高轉染(ran)效(xiao)率(lv)
     在不(bu)同(tong)的(de)轉(zhuan)染(ran)過(guo)程(cheng)（生物、化學、物理(li)）中(zhong)，隨(sui)著(zhe)技(ji)術(shu)和工藝(yi)不(bu)斷(duan)改進(jin)，轉染(ran)效(xiao)率(lv)也在不(bu)斷(duan)提升(sheng)。例(li)如，光學技(ji)術(shu)和激(ji)光(guang)精(jing)度的(de)每(mei)壹(yi)次進(jin)步都(dou)會(hui)對光(guang)轉染(ran)產(chan)生有(you)利(li)的(de)影(ying)響(xiang)。
但在此(ci)之前，提高細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)的(de)方(fang)法(fa)主(zhu)要(yao)有(you)：
1. 培(pei)養健康的(de)活(huo)力指數高的(de)健(jian)康細(xi)胞(bao)群(qun)。細(xi)胞(bao)分選(xuan)儀可以(yi)降(jiang)低(di)細(xi)胞(bao)分選(xuan)時高電(dian)壓(ya)對細(xi)胞(bao)的(de)刺(ci)激(ji)，是(shi)輔(fu)助(zhu)培(pei)養健康細(xi)胞(bao)群(qun)的(de)重(zhong)要工(gong)具(ju)。
2. 優化核酸(suan)，保證(zheng)有(you)效(xiao)的(de)核(he)酸純度。 細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)過(guo)程(cheng)中(zhong)需(xu)要(yao)確(que)保所(suo)引入細(xi)胞(bao)的(de) DNA 和 RNA 盡可(ke)能(neng)接(jie)近同質(zhi)。否則，分析(xi)結果(guo)時(shi)變量太(tai)多，轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)會(hui)因(yin)不(bu)同(tong)類(lei)型(xing)的(de)基(ji)因進(jin)入細(xi)胞(bao)而(er)變得混(hun)亂(luan)。轉染(ran)前(qian)，可(ke)以(yi)制(zhi)備不(bu)同(tong)濃(nong)度核酸來(lai)用於細(xi)胞(bao)檢測(ce)的(de)測(ce)試(shi)。例如，通過(guo)逐步制備 25-250 ng 的(de)核(he)酸濃度以(yi)針(zhen)對實驗的(de)細(xi)胞(bao)群(qun)進(jin)行測(ce)試(shi)，從而(er)篩選(xuan)出合(he)適的(de)轉(zhuan)染(ran)濃(nong)度從而(er)提升(sheng)轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)。
3.實時校(xiao)正每(mei)個孔的(de)細(xi)胞(bao)群(qun)，使每(mei)個孔內的(de)細(xi)胞(bao)群(qun)盡量保(bao)持適(shi)宜的(de)密(mi)度。
    當細(xi)胞(bao)大(da)量聚(ju)集(ji)在壹(yi)個孔中(zhong)時(shi)，由(you)於(yu)細(xi)胞(bao)接(jie)觸(chu)面(mian)會(hui)受(shou)到(dao)抑制，容(rong)易造成(cheng)低(di)轉(zhuan)染(ran)率(lv)。正常(chang)情(qing)況下(xia)，細(xi)胞(bao)的(de)匯(hui)合(he)度在大(da)約(yue) 60-80%之間，轉染(ran)效(xiao)率(lv)較高。
           蘇州(zhou)阿爾(er)法(fa)生物實驗器(qi)材有(you)限公(gong)司14年專(zhuan)註於(yu)生物實驗室(shi)儀器(qi)設備及(ji)實驗試(shi)劑耗(hao)材的(de)供(gong)應，提供(gong)的(de)生物試(shi)劑包(bao)括 細(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑、轉染(ran)試(shi)劑盒、天(tian)根(gen)試(shi)劑盒、碧(bi)雲天(tian)試(shi)劑等細(xi)胞(bao)學、分子(zi)生物學、生命科(ke)學相關的(de)試(shi)劑及耗(hao)材，另(ling)外提供(gong)生物反應器(qi)、發(fa)酵罐(guan)、電(dian)轉(zhuan)儀、細(xi)胞(bao)成(cheng)像(xiang)儀、細(xi)胞(bao)計數儀、振蕩(dang)培(pei)養箱、移(yi)液(ye)器(qi)、離(li)心機(ji)、顯微(wei)鏡、純水(shui)機(ji)等實驗室(shi)設備。