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動(dong)物細(xi)胞(bao)培(pei)養需(xu)要(yao)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi)設(she)備和耗材(cai)清單(dan)
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用(yong)於(yu)動(dong)物細(xi)胞(bao)培(pei)養的(de)實(shi)驗(yan)室(shi)設(she)備和耗材(cai)有很多種(zhong),進行動物細(xi)胞(bao)培(pei)養所需(xu)的(de)基本(ben)設(she)備如(ru)下(xia):
設備 | 有益設(she)備 | 有用(yong)的(de)附(fu)加設備 |
振蕩培(pei)養箱 | 生(sheng)物安全櫃(gui) | 低(di)溫冷(leng)凍櫃(gui) |
顯(xian)微(wei)鏡 | 細(xi)胞(bao)計數(shu)儀(yi) | 玻(bo)璃(li)器皿清洗(xi)機(ji) |
滅(mie)菌器(qi) | 真空泵(beng) | 菌落(luo)櫃臺(tai) |
清洗(xi)儀(yi)器(qi) | 二氧化(hua)碳(tan)培養箱 | 共(gong)聚(ju)焦顯(xian)微(wei)鏡 |
殺(sha)菌幹(gan)燥(zao)箱 | 制(zhi)備和質量(liang)控制 | 熒(ying)光(guang)激活(huo)細(xi)胞(bao)分(fen)選(xuan)儀 |
離(li)心(xin)機(ji) | 溫度(du)記(ji)錄 | |
純(chun)水(shui)機(ji) | 細(xi)胞(bao)生(sheng)物反(fan)應(ying)器(qi) | |
液(ye)氮罐(guan) | 移液(ye)器和自(zi)動(dong)移液(ye)器 | |
水(shui)浴(yu)鍋(guo) |
動物細(xi)胞(bao)培(pei)養實(shi)驗(yan)室(shi)所需(xu)基本(ben)設(she)備清單(dan):
無(wu)菌(jun)工(gong)作區/細(xi)胞(bao)培(pei)養罩(zhao)(即層(ceng)流罩(zhao)或生(sheng)物安全櫃(gui))
培養箱(推薦(jian)使用(yong)潮(chao)濕(shi)的(de)二氧化(hua)碳(tan)培養箱)
水(shui)浴(yu)
離心(xin)機(ji)
冰(bing)箱和冰(bing)櫃 (–20°C)
細(xi)胞(bao)計數(shu)器(qi)(例如(ru)自(zi)動(dong)細(xi)胞(bao)計數(shu)器(qi)或(huo)血(xue)細(xi)胞(bao)計數(shu)器(qi))
倒(dao)置(zhi)顯微鏡
液(ye)氮 (N 2 ) 冷(leng)凍箱(xiang)或(huo)低(di)溫儲存(cun)容器(qi)
1、滅(mie)菌器(qi)(即高壓滅(mie)菌器(qi))
細(xi)胞(bao)培(pei)養所需(xu)的(de)無菌(jun)工作(zuo)區:
為了保(bao)持清潔(jie)的(de)細(xi)胞(bao)培(pei)養工作(zuo),如(ru)果(guo)可能,有必要(yao)準(zhun)備壹個(ge)單(dan)獨(du)的(de)房間(jian)或(huo)空間(jian)。
這(zhe)個(ge)房(fang)間(jian)應(ying)該是密(mi)閉的(de),另外需(xu)要(yao)配(pei)備壹個(ge)氣(qi)流櫃(gui),已提(ti)供潔(jie)凈的(de)空氣(qi),壹(yi)些(xie)實(shi)驗(yan)室(shi)還(hai)會(hui)采(cai)用(yong)HEPA空氣(qi)過(guo)濾(lv)器(qi)。實(shi)驗(yan)室(shi)必須(xu)是為潔(jie)培養工作(zuo)二設計,嚴格(ge)限制(zhi)在(zai)細(xi)胞(bao)培(pei)養實(shi)驗(yan)室(shi)內(nei)或(huo)附(fu)近(jin)培養原(yuan)代動(dong)物組織和微生(sheng)物。
實(shi)驗(yan)室(shi)外套(tao)應(ying)放(fang)在(zai)實(shi)驗(yan)室(shi)入(ru)口(kou)處,不(bu)得在(zai)實(shi)驗(yan)室(shi)外使用(yong)。
生(sheng)物安全櫃(gui)既可以提(ti)供無(wu)菌(jun)的(de)條件(jian),而且(qie)還(hai)可(ke)以控制傳(chuan)染性的(de)飛濺(jian)物或(huo)氣(qi)溶膠(jiao)。
為滿(man)足多樣化(hua)的(de)研究需(xu)要(yao),生(sheng)物安全櫃(gui)壹般有I、II、III三類(lei)。
I 類(lei)層(ceng)安全櫃(gui)為實(shi)驗(yan)室(shi)工(gong)作(zuo)人員和環(huan)境(jing)提(ti)供了基本(ben)水(shui)平的(de)保(bao)護(hu),但(dan)它們(men)不(bu)能保(bao)護(hu)培(pei)養物免(mian)受汙染。 它們(men)在(zai)設計和氣(qi)流特(te)性(xing)方面與化(hua)學通風(feng)櫃(gui)基本(ben)相(xiang)同(tong)。
對於涉及 BSL-1、2 和 3 材(cai)料(liao)的(de)工作(zuo)或者細(xi)胞(bao)培(pei)養時為了處理有害(hai)物質(zhi)(例如(ru),靈(ling)長(chang)類(lei)動物培(pei)養物、病(bing)毒(du)感染培養物、放(fang)射(she)性(xing)同(tong)位(wei)素、致(zhi)癌或(huo)有毒試(shi)劑(ji)),應(ying)使用(yong) II 類(lei)生(sheng)物安全櫃(gui)。
清潔(jie)工作(zuo)臺:垂直(zhi)層(ceng)流或(huo)水(shui)平層(ceng)流潔(jie)凈工作(zuo)臺(tai)是將(jiang)經(jing)過(guo) HEPA 過(guo)濾的(de)空氣(qi)從機(ji)櫃(gui)後(hou)部(bu)穿(chuan)過(guo)工(gong)作(zuo)臺表面有助於(yu)保(bao)護(hu)樣(yang)品而(er)不(bu)是工作人員。
2.振(zhen)蕩培(pei)養箱:
為了在(zai) 30-40 0 C下為細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)提(ti)供合適(shi)的(de)溫度(du)環(huan)境(jing),需(xu)要(yao)壹(yi)個(ge)培(pei)養箱。
根(gen)據(ju)培養的(de)細(xi)胞(bao)類(lei)型,孵(fu)育(yu)溫度(du)會(hui)有所不(bu)同。
CO2 振(zhen)蕩培(pei)養箱時(shi)壹(yi)種(zhong)可以(yi)自(zi)動(dong)進行控溫、濕(shi)度(du)和氣(qi)體(ti)調節的(de)培養箱,可(ke)以(yi)使培(pei)養基中(zhong),CO2 的(de)濃(nong)度(du)與(yu)碳酸氫(qing)鈉(na)保(bao)持平衡(heng)。細(xi)胞(bao)培(pei)養時,壹(yi)般保(bao)持培(pei)養箱中(zhong)保(bao)持 2-5% CO2 氣(qi)體(ti)含(han)量(liang)。
3.用(yong)於(yu)標(biao)本(ben)保(bao)存的(de)超(chao)低(di)溫冰(bing)箱和低(di)溫冰(bing)櫃(-20 ° C) :
冰(bing)箱和冰(bing)櫃對於在(zai) 2–8°C 下儲存液(ye)體培(pei)養基以(yi)及在(zai) –5°C 到 –20°C 下儲存酶(例如(ru)胰(yi)蛋(dan)白酶)和某些培(pei)養基成(cheng)分(例如(ru)谷(gu)氨酰(xian)胺和血清)都非(fei)常(chang)重要(yao)。
要(yao)儲(chu)存(cun)培養基和緩沖(chong)液(ye),需(xu)要(yao)冰(bing)箱或(huo)冷(leng)藏(zang)室(shi)。
需(xu)要(yao)低(di)溫冰(bing)箱來(lai)保(bao)存預(yu)先分裝的(de)血清、營(ying)養物質(zhi)和抗(kang)生(sheng)素。
低(di)溫儲存(cun)
隨著傳(chuan)代次數(shu)的(de)增加,連續(xu)培養的(de)細(xi)胞(bao)系(xi)遺傳不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)可能性很大(da),因(yin)此(ci),有必要(yao)制(zhi)備細(xi)胞(bao)的(de)工作(zuo)原(yuan)液(ye)並保(bao)存在(zai)低(di)溫儲存(cun)中。
需(xu)要(yao)註(zhu)意(yi)的(de)是,細(xi)胞(bao)不(bu)應(ying)儲(chu)存(cun)在(zai) 20 o C 或 -80 o C 的(de)冰(bing)箱中(zhong),因(yin)為當(dang)它(ta)們不(bu)在(zai)這些溫度(du)下(xia)儲存(cun)時(shi),它(ta)們(men)的(de)活(huo)力會(hui)降(jiang)低(di)。
4.顯微(wei)鏡:
檢(jian)查細(xi)胞(bao)壹(yi)般使用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微鏡即可(ke)。
盡管染色(se)體(ti)分析或放(fang)射(she)自(zi)顯(xian)影工作(zuo)需(xu)要(yao)非(fei)常(chang)高質量(liang)的(de)顯微(wei)鏡,但(dan)放(fang)大(da)倍數(shu)為 X100 的(de)簡單(dan)的(de)光學(xue)顯微(wei)鏡足以在(zai)血細(xi)胞(bao)計數(shu)器(qi)中(zhong)進(jin)行常(chang)規(gui)細(xi)胞(bao)計數(shu)。
5 、組織培養器皿:
多種(zhong)組織培養塑(su)料(liao)器(qi)皿,最常(chang)見(jian)的(de)是經過特殊(shu)處理的(de)聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯。
少(shao)量(liang)的(de)細(xi)胞(bao)培(pei)養壹般在(zai)25 cm2 或 75 cm2培養皿或細(xi)胞(bao)培(pei)養瓶中(zhong)進(jin)行,而後(hou)再(zai)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)搖瓶中,置於(yu)二氧化(hua)碳(tan)培養箱中(zhong)擴(kuo)培(pei),大(da)規(gui)模(mo)細(xi)胞(bao)培(pei)養還需(xu)要(yao)借(jie)助生(sheng)物反(fan)應(ying)器(qi)等(deng)設(she)備。
6.清洗(xi)消毒(du)設施:
玻(bo)璃(li)器皿如(ru)移(yi)液(ye)器應(ying)浸(jin)泡(pao)在(zai)合適(shi)的(de)清潔(jie)劑(ji)中,然(ran)後(hou)經(jing)過嚴格(ge)的(de)洗(xi)滌(di)程(cheng)序(xu),在(zai)幹(gan)燥(zao)和滅(mie)菌之(zhi)前(qian)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)浸(jin)泡(pao)。
玻(bo)璃(li)器皿如(ru)移(yi)液(ye)管、錐形瓶(ping)、燒杯(bei)(用(yong)鋁(lv)箔(bo)覆(fu)蓋(gai))在(zai) 160°C 的(de)熱空氣(qi)烘箱中(zhong)消毒(du)壹小(xiao)時。
所有其他(ta)設(she)備,如(ru)自(zi)動(dong)移液(ye)器吸(xi)頭和瓶子(zi)(蓋(gai)子(zi)松(song)散(san)連接(jie))均(jun)通過(guo) 121 °C 高壓滅(mie)菌 20 分(fen)鐘進行滅(mie)菌。
7.純(chun)水(shui)制(zhi)備或反滲(shen)透裝置(zhi):
為了準(zhun)備培養基和沖(chong)洗(xi)玻(bo)璃(li)器皿,需(xu)要(yao)雙(shuang)蒸(zheng)或(huo)反滲(shen)透水(shui)供應(ying)。
應(ying)定(ding)期(qi)檢(jian)查(zha)雙蒸(zheng)水(shui)的(de) pH 值(zhi),因(yin)為在(zai)某些情(qing)況下可能會(hui)有所不(bu)同。
使用(yong)的(de)水(shui)質(zhi)量(liang)的(de)變化(hua)可(ke)能會(hui)導(dao)致(zhi)結(jie)果的(de)變化(hua),因(yin)此(ci)有必要(yao)使用(yong)單(dan)壹(yi)來(lai)源的(de)水(shui)。
通(tong)過高壓滅(mie)菌將(jiang)水(shui)在(zai) 121 °C 下滅(mie)菌 20 分(fen)鐘。
8.過濾(lv)除(chu)菌(jun)
不(bu)能高壓滅(mie)菌的(de)培養基必須(xu)通過孔(kong)徑(jing)為 0.22 μm 的(de)膜過(guo)濾器(qi)進行滅(mie)菌。
9.離(li)心(xin)機(ji)
為了增加細(xi)胞(bao)濃(nong)度(du)或(huo)洗(xi)去(qu)試劑(ji),細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)需(xu)要(yao)進(jin)行離心(xin)操(cao)作。
可(ke)以使用(yong)的(de)離心(xin)機(ji)有臺式(shi)離心(xin)機(ji)、小(xiao)型(xing)離(li)心(xin)機(ji)、落(luo)地(di)式(shi)離心(xin)機(ji)和冷(leng)凍離(li)心(xin)機(ji)等(deng)。
其(qi)他(ta)擴(kuo)展(zhan)設(she)備和附(fu)加用(yong)品:
用(yong)於(yu)動(dong)物培(pei)養的(de)其他(ta)附(fu)加實(shi)驗(yan)室(shi)設(she)備和耗材(cai)如(ru)下(xia):
蠕動泵(beng)貨(huo)真(zhen)空泵(beng)
PH計
細(xi)胞(bao)生(sheng)物反(fan)應(ying)器(qi)【大(da)規(gui)模(mo)培養】
共聚(ju)焦顯(xian)微(wei)鏡
流式(shi)細(xi)胞(bao)儀(yi)
細(xi)胞(bao)培(pei)養瓶
細(xi)胞(bao)培(pei)養皿
滾瓶(ping)或(huo)搖瓶、細(xi)胞(bao)培(pei)養瓶
移(yi)液(ye)器和移液(ye)器吸(xi)頭
廢物容器(qi)
培(pei)養基、血(xue)清和試劑(ji)
細(xi)胞(bao)
1. pH計:
PH計是壹種(zhong)計算溶液(ye)中氫(qing)離子(zi)(酸度(du)或(huo)堿度(du))活(huo)度(du)的(de)電(dian)子(zi)儀器。
pH 計必須(xu)包括連接(jie)到(dao) pH 響應(ying)電(dian)極和參考(kao)(不(bu)變)電(dian)極的(de)電(dian)壓表。
pH 響(xiang)應(ying)電(dian)極通常(chang)是玻璃(li),汞-氯(lv)化(hua)亞汞(甘汞)電(dian)極通常(chang)是參考(kao)電(dian)極,但(dan)有時也使用(yong)銀-氯(lv)化(hua)銀電(dian)極。
2.共聚(ju)焦顯(xian)微(wei)鏡:
共(gong)聚(ju)焦顯(xian)微(wei)鏡是壹種(zhong)特殊(shu)類(lei)型的(de)標(biao)準(zhun)熒(ying)光(guang)顯微鏡(也稱為寬(kuan)場(chang)熒(ying)光(guang)顯微鏡),它(ta)使用(yong)特(te)定(ding)的(de)光學(xue)組件(jian)產生(sheng)用(yong)熒(ying)光(guang)探針染色(se)的(de)材(cai)料(liao)的(de)高分辨率圖像(xiang)。
3 . 流式(shi)細(xi)胞(bao)儀(yi):
流式(shi)細(xi)胞(bao)術是壹種(zhong)細(xi)胞(bao)分(fen)析方法(fa),在(zai) 1950 年代用(yong)於(yu)確(que)定(ding)流體(ti)流中(zhong)的(de)細(xi)胞(bao)體(ti)積,當(dang)它(ta)們在(zai)觀察孔前(qian)流動(dong)時(shi),流體(ti)流會(hui)快(kuai)速(su)循環(huan)。
流體(ti)、光(guang)學(xue)和電(dian)子(zi)是流式(shi)細(xi)胞(bao)儀(yi)的(de)三個(ge)主要(yao)組成(cheng)部(bu)分(fen)。
樣(yang)品從樣(yang)品管到流動(dong)池(chi)的(de)傳輸(shu)是流式(shi)細(xi)胞(bao)儀(yi)的(de)流體(ti)系(xi)統(tong)的(de)功(gong)能。
樣品要(yao)麽(me)被(bei)分選(xuan)(在(zai)細(xi)胞(bao)分(fen)選(xuan)機(ji)的(de)情(qing)況下),要(yao)麽(me)在(zai)通過流通(tong)池(chi)(並(bing)通過(guo)激(ji)光(guang))後被(bei)運送到廢物中(zhong)。
光(guang)學系統組件(jian)包括激(ji)發光源、透鏡和用(yong)於(yu)在(zai)儀器周圍(wei)捕(bu)獲和移動光(guang)的(de)濾光(guang)片以及光電(dian)流產(chan)生(sheng)檢測(ce)系(xi)統(tong)。
4 . 細(xi)胞(bao)培(pei)養容器(qi):
所有的(de)培養細(xi)胞(bao)的(de)容器(qi)起初(chu)都是玻璃(li)的(de)。
與塑(su)料(liao)相(xiang)比,玻璃(li)的(de)缺點(dian)包括重量(liang)大(da)、成(cheng)本(ben)高、清潔(jie)勞(lao)動強度(du)大(da)和顯微鏡觀(guan)察效果差(cha)。
1960 年(nian)代為聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯開發了表面處理技(ji)術,使塑(su)料(liao)容器(qi)能夠代替(ti)玻璃(li)用(yong)於(yu)大(da)多數(shu)細(xi)胞(bao)培(pei)養應(ying)用(yong)。
培(pei)養瓶瓶(ping)說(shuo)明(ming) | 生(sheng)長(chang)面積(cm 2 ) | 推薦(jian)工作體(ti)積(ji) (ml) | 細(xi)胞(bao)產(chan)量(liang) |
T-25 | 25 | 5-10 | 2.5×10 6 |
T-75 | 75 | 15-25 | 7.5×10 6 |
T-150 | 150 | 30-50 | 15.0 X 10 6 |
T-175 | 175 | 35-60 | 17.5 X 10 6 |
T-225 | 225 | 45-75 | 22.5 X 10 6 |
A.。細(xi)胞(bao)培(pei)養皿:
提(ti)供了較佳的(de)經濟性(xing)和進入生(sheng)長(chang)表面的(de)途徑(jing)。
它們(men)應(ying)該與二氧化(hua)碳(tan)振蕩培(pei)養箱壹(yi)起使用(yong)。
大(da)多數(shu)制(zhi)造(zao)商(shang)提(ti)供四種(zhong)培養皿:35 毫米、60 毫米、100 毫米和 150 毫米。
細(xi)胞(bao)培(pei)養皿主要(yao)用(yong)於(yu)培(pei)養貼壁(bi)細(xi)胞(bao)。
細(xi)胞(bao)培(pei)養皿說(shuo)明(ming) | 生(sheng)長(chang)良好(hao) (cm 2 ) | 工(gong)作容積(ji)(ml) | 細(xi)胞(bao)產(chan)量(liang) |
96孔 | 0.32 | 0.1-0.2 | 0.32×10 5 |
48孔 | 1.00 | 0.3-0.6 | 0.8×10 5 |
24孔(kong) | 1.88 | 0.5-1.2 | 1.9×10 5 |
12孔(kong) | 3.83 | 1.0-2.4 | 3.8×10 5 |
6孔 | 9.40 | 2.0-3.0 | 9.5×10 5 |
B。 滾瓶(ping):
為了增加貼壁(bi)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang),壹般使用(yong)滾瓶(ping)、搖瓶培養,細(xi)胞(bao)培(pei)養瓶的(de)使用(yong)與(yu)燒瓶基本(ben)相(xiang)同(tong)但(dan)勞(lao)動力大(da)大(da)減少(shao)。
滾瓶(ping)的(de)說(shuo)明(ming) | 生(sheng)長(chang)面積(cm 2) | 工(gong)作容積(ji)(mL) | 細(xi)胞(bao)產(chan)量(liang) |
小的(de) | 490 | 100-150 | 4.9×10 5 |
標(biao)準(zhun) | 850 | 170-250 | 8.5×10 5 |
制(zhi)藥(yao) | 1750 | 340-500 | 17.5 X 10 5 |
C . 移液(ye)器和移液(ye)管:
血清移液(ye)管是壹種(zhong)相對常(chang)見(jian)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi)儀(yi)器(qi),用(yong)於(yu)轉(zhuan)移(yi)毫升(sheng)體(ti)積的(de)液(ye)體。
為了計算被(bei)吸出(chu)或分配的(de)液(ye)體體(ti)積,血(xue)清移液(ye)管通常(chang)沿其(qi)側(ce)面有刻度(du)。
這(zhe)些儀(yi)器(qi)最常(chang)與(yu)移(yi)液(ye)器分(fen)液(ye)器壹(yi)起使用(yong),通(tong)過(guo)產(chan)生(sheng)部(bu)分(fen)真(zhen)空來(lai)增強液(ye)體轉(zhuan)移。
根(gen)據(ju)您(nin)想要(yao)通(tong)過(guo)的(de)體積(ji)量(liang),相同的(de)移液(ye)器分(fen)液(ye)器可(ke)與多種(zhong)血清移液(ye)器尺寸(cun)壹(yi)起使用(yong)。
血(xue)清移液(ye)管通常(chang)是可消毒(du)和可重復使用(yong)的(de),可以(yi)是塑(su)料(liao)的(de)、無菌(jun)的(de)、壹次性(xing)的(de)或玻(bo)璃(li)的(de)。
對於液(ye)體的(de)轉移(yi)可使用(yong)移(yi)液(ye)器來(lai)進行操(cao)作。
蘇(su)州(zhou)阿爾法(fa)生(sheng)物13年(nian)專(zhuan)註於生(sheng)命科(ke)學儀器(qi)和試劑(ji)耗材(cai)的(de)供應(ying),產(chan)品包(bao)括生(sheng)物安全櫃(gui)、超(chao)凈臺、細(xi)胞(bao)培(pei)養生(sheng)物反(fan)應(ying)器(qi)、移(yi)液(ye)器、動(dong)物細(xi)胞(bao)培(pei)養設備、二氧化(hua)碳(tan)振蕩培(pei)養箱、流式(shi)細(xi)胞(bao)儀(yi)、發酵罐(guan)、搖瓶、滾瓶(ping)、培(pei)養瓶、培(pei)養皿、移液(ye)器、移(yi)液(ye)器吸(xi)頭等(deng)。
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