共聚焦顯微鏡(jing)的應用(yong)

什麽是(shi)共聚焦顯微鏡(jing)？
共聚焦顯微鏡(jing)是(shi)激光共聚焦掃(sao)描顯微鏡(jing) LCSM 的簡(jian)稱，它(ta)顯微成(cheng)像(xiang)主(zhu)要(yao)采用(yong) 3D 捕(bu)獲(huo)的成(cheng)像(xiang)技(ji)術，使(shi)其具有(you)較高(gao)的三(san)維(wei)圖像(xiang)分(fen)辨率。這 些(xie)都(dou)是 通(tong)過(guo)構(gou)建(jian)顯微照(zhao)片來實現(xian)的。在(zai)熒光顯微鏡(jing)使(shi)用(yong)過(guo)程(cheng)中，由於(yu)需(xu)要(yao)高(gao)強度紫外光輔助成(cheng)像(xiang)，所(suo)以顯微鏡(jing) 內(nei)的汞弧(hu)燈(deng)產(chan)生的強光可能會導致令(ling)人(ren)不安的背(bei)景噪音(yin)，甚(shen)至會導致光漂白。 共聚焦顯微鏡(jing)原(yuan)理是(shi)通(tong)過(guo)數(shu)碼相機針(zhen)孔(kong)的高(gao)強度激(ji)光來實現(xian)數(shu)字(zi)成(cheng)像(xiang)的技(ji)術，有(you)效(xiao)避免了熒(ying)光顯微鏡(jing) 所(suo)產(chan)生 的問(wen)題(ti)。

共焦顯微鏡(jing)原(yuan)理
共聚焦顯微鏡(jing)中(zhong)的圖像(xiang)是(shi)來自壹個(ge)焦平(ping)面(mian)的光通(tong)過(guo)針孔數(shu)碼相機聚焦拍攝(she)，從(cong)而規避(bi) 來自其支點(dian)上方(fang)或(huo)下方(fang)的光。固定在設備(bei)上的激(ji)光連(lian)續聚焦在樣(yang)品的選(xuan)定(ding)區(qu)域，同時，被樣(yang)品吸(xi)附(fu)的熒(ying)光染(ran)料(liao)也會被數(shu)碼相機捕(bu)捉(zhuo)。共聚焦設備(bei)包(bao)含兩(liang)個(ge)旋(xuan)轉(zhuan)鏡(jing)頭(tou)用(yong)來拍攝(she)組(zu)圖。

然(ran)後通(tong)過(guo)所累積(ji)的不同焦平(ping)面(mian)的圖像(xiang)序列(lie)，使(shi)用(yong)軟件編譯完整的 3d 圖像(xiang)。此(ci)圖像(xiang)可(ke)以在軸向(xiang)（z 軸）和(he)橫(heng)向(xiang)（x 和(he) y 軸）平(ping)面(mian)進行(xing)微調。這些(xie)細(xi)胞(bao)和(he)其他矩(ju)陣(zhen)的再(zai)現(xian)是(shi)通(tong)過(guo)使(shi)用(yong)雙倒(dao)置的光錐(zhui)照(zhao)亮物體來實現(xian)的。

使(shi)用(yong)標(biao)準落射熒光顯微鏡(jing)所(suo)存在的問(wen)題(ti)是當(dang)遇(yu)到(dao)較厚的基(ji)質或(huo)標(biao)本時所表(biao)現(xian)出(chu)的熒(ying)光程(cheng)度較大。大於(yu) 2 微米的樣(yang)品發(fa)出的輻射會危及生成(cheng)圖像(xiang)的準確性(xing)，從(cong)而損(sun)失(shi)成(cheng)像(xiang)的細(xi)節(jie)。而共聚焦顯微鏡(jing)則(ze)可以(yi)通(tong)過(guo)縮小激(ji)發(fa)範(fan)圍(wei)並使(shi)用(yong)光學(xue)切片來消除背(bei)景噪聲(sheng)。



共聚焦顯微鏡(jing)的應用(yong) 

ECM模(mo)擬凝(ning)膠(jiao)的成(cheng)像(xiang)
細(xi)胞(bao)外基(ji)質 (ECM) 或(huo)屬(shu)於(yu)所有(you)細(xi)胞(bao)的非(fei)細(xi)胞(bao)成(cheng)分，在(zai)細(xi)胞(bao)功(gong)能中是重要(yao)的。ECM 的彈(dan)性(xing)調節細(xi)胞(bao)的許(xu)多(duo)生物學(xue)功(gong)能，例如間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)的分(fen)化、粘(zhan)附(fu)和(he)遷移。

細(xi)胞(bao)生(sheng)物學(xue)中(zhong)常(chang)常通(tong)過(guo)水凝(ning)膠(jiao)來模(mo)擬ECM。共聚焦顯微鏡(jing)的應用(yong)主(zhu)要(yao)在(zai)於(yu)可與(yu)聚丙烯酰胺(an)凝(ning)膠(jiao)的壓(ya)痕法(fa)結合使(shi)用(yong)。共聚焦自動(dong)圖像(xiang)成(cheng)像(xiang)可(ke)以有(you)效(xiao)測量(liang) ECM 模(mo)擬中的壓(ya)痕和(he)穿(chuan)孔(kong)。比(bi)如，共聚焦激光顯微鏡(jing)可(ke)以測量(liang)出(chu) PAAM 凝(ning)膠(jiao)組(zu)合物的深(shen)度和(he)剛度。這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)可以替代(dai) AFM 納米(mi)壓(ya)痕法(fa)和(he)微針法(fa)。
由(you)於(yu)共焦成(cheng)像(xiang)可(ke)以可靠(kao)地探測大多(duo)數(shu)樣(yang)品表(biao)面(mian)下方(fang) 0-200 µm 之(zhi)間的任何位(wei)置。然(ran)而，重要(yao)的是(shi)要(yao)註意，每個(ge)樣(yang)本都(dou)有(you)自己的深(shen)度，在(zai)該深(shen)度處(chu)散射、光漂白和(he)噪(zao)聲(sheng)太高(gao)。據(ju)說(shuo)有(you)些(xie)標(biao)本應該*避免使(shi)用(yong)共聚焦顯微鏡(jing)。

替(ti)代雙光子顯微鏡(jing)功(gong)能 
雙光子顯微鏡(jing)或(huo)多(duo)光子顯微鏡(jing)產(chan)生兩(liang)個(ge)光子來完成(cheng)壹個(ge)光子的工(gong)作。當(dang)獲取(qu)兩(liang)個(ge)光子，每個(ge)光子具有(you)壹(yi)半(ban)的能量(liang)，快(kuai)速(su)連(lian)續退出時(shi)，這(zhe)個(ge)過(guo)程(cheng)將取決於(yu)撞擊(ji)樣(yang)品的光強度的平(ping)方(fang)。

以(yi)大約(yue) 100 MHz 脈沖的紅(hong)外激(ji)光器將(jiang)使(shi)失(shi)焦光比聚焦光暗(an)得多(duo)。

雙光子顯微鏡(jing)的散射光不會激發(fa)熒光，因為(wei)它(ta)使(shi)用(yong)的紅(hong)外波比高(gao)強度激(ji)光散射的少(shao)。這將(jiang)較大程(cheng)度地減(jian)少(shao)信(xin)號損(sun)失(shi)並可以穿(chuan)透(tou)大約(yue) 1 mm 的組(zu)織，超過(guo)共聚焦顯微鏡(jing)穿(chuan)透 200 μm 組(zu)織的能力。較低能量(liang)的紅(hong)外光對細(xi)胞(bao)造(zao)成(cheng)的損(sun)害也會降低。

根(gen)據(ju)電(dian)子顯微鏡(jing)的成(cheng)像(xiang)規則(ze)，我(wo)們可以知(zhi)道(dao)共聚焦顯微鏡(jing)的分(fen)辨率遠高(gao)於(yu)雙光子顯微鏡(jing)。雖(sui)然(ran)，共焦顯微鏡(jing)比(bi)傳(chuan)統的熒(ying)光顯微鏡(jing)要(yao)強大得(de)多(duo)，但(dan)雙光子顯微鏡(jing)和(he)透(tou)射電(dian)子顯微鏡(jing)的市(shi)場應用(yong)更為普(pu)遍(bian)。 

   蘇(su)州阿爾(er)法生物實驗器材(cai)有(you)限公司十三(san)年(nian)專(zhuan)註於(yu)生物反應器，壹(yi)次性(xing)生(sheng)物反應器、發(fa)酵(jiao)罐(guan)、PCR儀(yi)、顯微鏡(jing)、電(dian)子顯微鏡(jing)、共聚焦顯微鏡(jing)、掃(sao)描電(dian)鏡(jing)移(yi)液器等(deng)實驗室儀(yi)器設(she)備(bei)，生物反應器采用(yong)進口零(ling)部件，三重防汙(wu)染(ran)密封設計工藝，有(you)2L/5L/15L/75L/150L/200L等(deng)多(duo)種(zhong)規格可(ke)以(yi)供選(xuan)擇(ze)，另外支(zhi)持特殊(shu)定制(zhi)已(yi)適應不同類(lei)型的客戶(hu)，具有(you)價廉(lian)質優、售(shou)後(hou)有(you)保(bao)障(zhang)基(ji)本實現(xian)了(le)進口生(sheng)物反應的國(guo)產(chan)化替(ti)代(dai)。