抗原(yuan)修(xiu)復(fu)技術(shu)概述

抗(kang)原(yuan)修(xiu)復(fu)技術(shu)主要用於(yu)增強(qiang)免(mian)疫(yi)組(zu)織化(hua)學(xue)檢(jian)測(ce)中的(de)信(xin)號(hao)。下面介(jie)紹壹下抗原(yuan)修(xiu)復(fu)方(fang)法(fa)和(he)修(xiu)復(fu)技巧。
壹、抗原(yuan)修(xiu)復(fu)方(fang)法(fa)
固(gu)定(ding)是在免疫組(zu)織化(hua)學(xue)過程(cheng)中進(jin)行的壹(yi)個(ge)關鍵(jian)步(bu)驟，以(yi)保(bao)持組(zu)織形態(tai)。然(ran)而，這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)也(ye)可(ke)能對(dui)免(mian)疫組(zu)織化(hua)學(xue)產生不(bu)利(li)影響(xiang)，因(yin)為它(ta)經常改變(bian)蛋(dan)白(bai)質生物化(hua)學(xue)並掩(yan)蓋(gai)感興趣蛋(dan)白(bai)質的(de)表位(wei)。因此(ci)，壹抗(kang)無法(fa)與(yu)蛋(dan)白(bai)質結(jie)合，導(dao)致(zhi)信(xin)號(hao)強度(du)低(di)。這(zhe)種(zhong)掩(yan)蔽效(xiao)應可(ke)能是由(you)表位(wei)中氨(an)基酸的(de)交(jiao)聯或無關但(dan)存(cun)在於(yu)表位(wei)附(fu)近的(de)肽(tai)的交(jiao)聯引起(qi)的。這(zhe)會改變(bian)抗(kang)原(yuan)的構(gou)象(xiang)或靜(jing)電(dian)荷(he)。在抗原(yuan)修(xiu)復(fu)過程中，這(zhe)種(zhong)掩(yan)蔽被逆轉(zhuan)，從而(er)可能發生抗(kang)原(yuan)與表位(wei)之間(jian)的結(jie)合。
二、抗(kang)原(yuan)修(xiu)復(fu)技巧
抗原(yuan)修(xiu)復(fu)基於幾個變量(liang)，例(li)如目標(biao)抗原(yuan)、抗體(ti)、組(zu)織類型(xing)以(yi)及(ji)固(gu)定(ding)的持續時(shi)間(jian)和(he)方(fang)法(fa)。通常，多克(ke)隆抗體(ti)在(zai)不(bu)使(shi)用抗原(yuan)修(xiu)復(fu)方(fang)法(fa)的(de)情(qing)況(kuang)下可能會更好(hao)地(di)工作，因為它(ta)們識別多個表位(wei)。然(ran)而，單(dan)克(ke)隆抗體(ti)依(yi)賴(lai)於對(dui)單(dan)個特(te)定(ding)表位(wei)的識別才能發揮作用。正(zheng)在使(shi)用多種(zhong)策略(lve)來檢(jian)索(suo)抗原(yuan)。有(you)些(xie)方(fang)法(fa)就(jiu)像(xiang)改變(bian)抗(kang)體(ti)稀釋(shi)劑中陽離(li)子的pH值(zhi)或濃(nong)度(du)壹(yi)樣簡單(dan)，這(zhe)也(ye)可以(yi)改變(bian)抗(kang)體(ti)及(ji)其(qi)表位(wei)的親和力(li)。


在(zai)表位(wei)被部分(fen)掩(yan)蓋(gai)的情況(kuang)下，可以(yi)在(zai)嘗(chang)試其(qi)他抗原(yuan)修(xiu)復(fu)方(fang)法(fa)之(zhi)前(qian)增(zeng)加壹抗(kang)孵(fu)育(yu)。然(ran)而，必(bi)須(xu)首先(xian)優(you)化(hua)孵育(yu)時(shi)間、溫度(du)和(he)濃(nong)度(du)的(de)這些(xie)參(can)數(shu)。目前使(shi)用兩種(zhong)主要方(fang)法(fa)來(lai)檢(jian)索(suo)抗原(yuan)。
1.蛋(dan)白(bai)酶誘(you)導(dao)表位(wei)修(xiu)復(fu) (PIER)
在這種(zhong)方(fang)法(fa)中，不(bu)同的酶(mei)用(yong)於恢(hui)復(fu)抗(kang)原(yuan)和表位(wei)之間(jian)的結(jie)合。這個(ge)過程(cheng)應該通過切割形成表位(wei)的肽(tai)來工作。然(ran)而，PIER成功率低(di)，在(zai)此過程中可(ke)能會破壞組(zu)織形態(tai)和抗(kang)原(yuan)。
2.熱(re)誘(you)導(dao)表位(wei)修(xiu)復(fu) (HIER)
        在該技術(shu)中，熱(re)量(liang)用(yong)於(yu)逆(ni)轉(zhuan)交聯並恢(hui)復(fu)原(yuan)始(shi)和三(san)級表位(wei)結構(gou)。該方(fang)法(fa)針對(dui)每(mei)種(zhong)組(zu)織、固定(ding)方(fang)法(fa)和(he)感(gan)興趣的抗(kang)原(yuan)進行(xing)了(le)優(you)化(hua)。
在這種(zhong)情況(kuang)下，使(shi)用微波爐、壓力鍋(guo)、蒸(zheng)鍋(guo)、高(gao)壓釜(fu)或水(shui)浴(yu)提(ti)供(gong)熱(re)量(liang)。這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)比PIER方(fang)法(fa)有(you)更高(gao)的(de)成功率。在此過(guo)程中，樣品在(zai)更換(huan)緩(huan)沖(chong)液(ye)之(zhi)前會短時間加熱(re)。
某(mou)些(xie)實驗室(shi)使(shi)用溫度(du)設(she)置為 60°C 的(de)水(shui)浴(yu)，然(ran)後將(jiang)載玻(bo)片(pian)在修(xiu)復(fu)溶液中孵(fu)育(yu)過(guo)夜。
      如果(guo)切片(pian)在高(gao)溫(wen)下從載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)脫落(luo)（可能用於(yu)骨(gu)骼、軟骨(gu)和皮膚），此類技術(shu)可能很有(you)用。在(zai)這種(zhong)方(fang)法(fa)中，載(zai)玻(bo)片(pian)在加熱(re)之(zhi)前(qian)先(xian)冷(leng)卻。HIER 受(shou)時間(jian)、溫度(du)、緩(huan)沖(chong)液(ye)和(he) pH 值(zhi)的(de)影響(xiang)，該方(fang)案(an)是(shi)通過反復試驗確(que)定(ding)的。
三、抗原(yuan)修(xiu)復(fu)的局限性是(shi)什(shen)麽(me)？
抗(kang)原(yuan)修(xiu)復(fu)過程通常需要(yao)將樣品牢(lao)固地粘附(fu)在載(zai)玻(bo)片(pian)上(shang)。此外(wai)，這種(zhong)方(fang)法(fa)對(dui)於(yu)某(mou)些(xie)樣品通常過於(yu)苛(ke)刻(ke)，例(li)如低(di)溫(wen)恒溫器組(zu)織和酒精(jing)固(gu)定(ding)組(zu)織。還(hai)需要(yao)優(you)化(hua)每個樣品的(de)溫(wen)度(du)、時(shi)間和 pH 值(zhi)；在(zai)決定(ding)每個樣品的(de)最(zui)佳(jia)條件之前(qian)，需(xu)要測(ce)試這些(xie)條件。

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