細胞培(pei)養(yang)中(zhong)常(chang)見的問題(ti)解(jie)答(da)

標(biao)簽(qian)：細胞 細胞培(pei)養(yang) 液氮(dan) 培(pei)養(yang)基 

細胞培(pei)養(yang)是(shi)生命科學實(shi)驗(yan)中(zhong)的(de)基礎實驗(yan)，在細胞生長過程(cheng)中(zhong)，很(hen)多因素都(dou)會(hui)造(zao)成細胞生長不良(liang)。下(xia)面簡(jian)單歸納壹下(xia)細胞生長不良(liang)的原(yuan)因及(ji)對應(ying)的(de)解(jie)決(jue)方案(an)。 

常見(jian)問題(ti)壹：為什麽(me)細胞解(jie)凍(dong)後缺(que)少活力(li)，活細胞占比(bi)較低？

這(zhe)種(zhong)現象可能主(zhu)要由(you)以(yi)下(xia)幾(ji)種(zhong)原(yuan)因(yin)所導(dao)致(zhi)：

1.培(pei)養(yang)物凍存(cun)液等(deng)質(zhi)量(liang)欠缺(que)。

解(jie)決(jue)方案(an)：

a.確保用來制備(bei)儲存(cun)物（凍(dong)存(cun)液）的起始培(pei)養(yang)物需要保證其(qi)健康(kang)、無(wu)微(wei)生物汙染、處於生長對數(shu)期(qi)後期狀態(tai)。

b.收(shou)獲(huo)細胞時需要小(xiao)心(xin)翼(yi)翼(yi)，避免細胞損傷。 

2.儲存(cun)物凍(dong)存(cun)方法(fa)不當

解(jie)決(jue)方案(an)：

a.在液氮(dan)冷凍細胞時，確保細胞、培(pei)養(yang)基和其(qi)他試(shi)劑(ji)的(de)濃(nong)度，以(yi)及凍存(cun)實驗(yan)步驟(zhou)依(yi)照(zhao)供(gong)應(ying)商(shang)的建(jian)議(yi)。壹般來說(shuo)，凍(dong)存(cun)應該(gai)緩(huan)慢，大(da)約(yue)1-3° C/min以減少(shao)冰(bing)晶形(xing)成(cheng)。

b.使用電子(zi)可(ke)編程(cheng)或(huo)機(ji)械冷(leng)凍裝(zhuang)置以確(que)保壹致(zhi)的、適當(dang)速(su)率的冷(leng)凍(dong)。

c.選擇(ze)最(zui)合(he)適的(de)細胞冷凍(dong)保護劑。如果使用甘油(you)，不要將(jiang)其(qi)存(cun)儲在光(guang)照(zhao)下(xia)，因為(wei)曝(pu)光(guang)會(hui)使甘(gan)油(you)轉化(hua)為有(you)對細胞毒性(xing)的(de)物質。

3.儲存(cun)物保存(cun)不當(dang) 

解(jie)決(jue)方案(an)：

a.儲存(cun)物應(ying)時刻(ke)保持(chi)在-130℃，理想(xiang)情(qing)況是(shi)置(zhi)於液氮(dan)中(zhong)，以(yi)確保較大(da)的(de)細胞活性(xing)。

b.如果將(jiang)細胞直接(jie)浸(jin)入液氮(dan)中(zhong)，容(rong)易(yi)造(zao)成液氮(dan)泄(xie)露到(dao)凍存(cun)管內(nei)，解(jie)凍(dong)時會(hui)有凍(dong)存(cun)管爆(bao)炸(zha)的風險。所以壹般儲存(cun)在液氮(dan)上方的(de)氣相(xiang)環(huan)境中(zhong)。 

4.細胞解(jie)凍(dong)方法(fa)不當 

解(jie)決(jue)方案(an)：

a.壹般來說(shuo)，細胞應該(gai)快(kuai)速解(jie)凍(dong)、使用預(yu)熱(re)的(de)培(pei)養(yang)基、盡快移除含(han)有(you)冷(leng)凍保護劑的(de)培(pei)養(yang)基防止細胞活力(li)下(xia)降。

b.確保小(xiao)心(xin)操(cao)作細胞。不要渦(wo)旋或(huo)高(gao)速離(li)心(xin)，因(yin)為低溫保存(cun)後的特(te)別(bie)容(rong)易(yi)受(shou)到(dao)損傷。

常見問題二(er)：細胞進行解(jie)凍(dong)或(huo)傳(chuan)代(dai)後細胞的附(fu)著力(li)偏(pian)低?

這(zhe)種(zhong)情(qing)況主要是(shi)因(yin)為濕(shi)度過(guo)低致(zhi)使培(pei)養(yang)容(rong)器上集聚靜電所(suo)致(zhi)。

可以通(tong)過(guo)適當(dang)增加房間濕(shi)度，使(shi)用防靜電裝(zhuang)置或(huo)者用消毒過(guo)的(de)濕(shi)毛巾擦(ca)拭(shi)培(pei)養(yang)容(rong)器外(wai)側(ce)，來減低靜電產生。另外(wai)試劑混合(he)不均勻，培(pei)養(yang)瓶轉速等(deng)因(yin)素(su)也可導(dao)致(zhi)此現象發(fa)生。所以在進(jin)行細胞培(pei)養(yang)時，要確(que)保細胞和所(suo)有(you)試劑的(de)溶(rong)液混合(he)充(chong)分。在使(shi)用振蕩(dang)培(pei)養(yang)箱(xiang)進(jin)行細胞培(pei)養(yang)時，註意設(she)置適宜(yi)的(de)轉(zhuan)速。

常見(jian)問(wen)題三：為什(shen)麽(me)細胞生長速度緩(huan)慢？

細胞生長過慢有很(hen)多原因，其(qi)主要原(yuan)因如下(xia)：

1.細胞的傳(chuan)代(dai)次數太多，所以獲(huo)得(de)壹個新的、亞培(pei)養(yang)次數較少的(de)細胞儲存(cun)液很(hen)有必(bi)要。

2.未選擇(ze)合(he)適的(de)細胞收(shou)獲(huo)時機(ji)。

在使(shi)用新的(de)細胞儲存(cun)液的(de)同時，也要把(ba)我好(hao)適宜(yi)的(de)細胞收(shou)獲(huo)時機(ji)，壹般在對數(shu)生長期的後期是(shi)細胞收(shou)獲(huo)時間當細胞達到(dao)100%融合(he)後，由(you)於生長過於擁擠(ji)，會(hui)逐漸(jian)進(jin)入(ru)緩(huan)慢生長階(jie)段(duan)，此時，細胞的活躍度也會(hui)隨之(zhi)下(xia)降。

培(pei)養(yang)基、血清、緩沖液等(deng)質(zhi)量(liang)差，或(huo)者配(pei)方不(bu)合(he)理。培(pei)養(yang)基、血清等(deng)培(pei)養(yang)物質是(shi)細胞生長的主要營(ying)養(yang)來源，所(suo)以其(qi)質量(liang)直接會(hui)影(ying)響到(dao)細胞的生長狀態(tai)。所(suo)以高(gao)質量(liang)的培(pei)養(yang)基及合(he)理的(de)試(shi)劑(ji)配(pei)方維(wei)持細胞的良(liang)好生長具有決(jue)定(ding)的作用。

3.CO2濃(nong)度與(yu)緩沖(chong)系統(tong)需求不(bu)匹配(pei)，導(dao)致(zhi)pH控制不(bu)足。

壹般來說(shuo)，細胞培(pei)養(yang)液中(zhong)緩(huan)沖液中(zhong)NaHCO3的(de)濃(nong)度與(yu)CO2濃(nong)度成(cheng)正比(bi)例(li)關(guan)系(xi)。緩沖液中(zhong)NaHCO3 的(de)濃(nong)度高(gao)，所需求的(de)CO2濃(nong)度也較高(gao)；這(zhe)樣(yang)才能(neng)達(da)到(dao)PH平衡。

4.微(wei)生物汙染，尤(you)其(qi)是(shi)支(zhi)原(yuan)體

及時檢(jian)查汙染(ran)，防(fang)止(zhi)微(wei)生物汙染，做好(hao)支(zhi)原(yuan)體、器皿(min)、環(huan)境消毒、支(zhi)原(yuan)體清除等(deng)工(gong)作(zuo)。

5.培(pei)養(yang)物光(guang)敏(min)降(jiang)解(jie)產生細胞毒性(xing)物(wu)質。

如果培(pei)養(yang)基長時間暴露於熒光(guang)將(jiang)會(hui)導(dao)致(zhi)光(guang)敏(min)感(gan)培(pei)養(yang)基組(zu)分轉(zhuan)化(hua)成(cheng)細胞毒性(xing)自由(you)基(ji)和(he)H2O2，從而影(ying)響到(dao)細胞生長甚至細胞雕亡(wang)。所以(yi)平時要在暗(an)處保存(cun)細胞核培(pei)養(yang)基，避免熒光(guang)暴(bao)露。

6.不精(jing)確的(de)細胞計(ji)數方法(fa)將(jiang)導(dao)致(zhi)細胞生長不良(liang)

a.確保計(ji)數樣(yang)本充(chong)分混合(he)，避免局部細胞密度差(cha)異影(ying)響精(jing)確計(ji)數

b.再次檢(jian)查使用血球(qiu)計(ji)數板(ban)進行細胞計(ji)數的(de)所有運算(suan)  

常見問題四：為什(shen)麽(me)細胞生長會(hui)不均(jun)勻？

1.細胞或(huo)培(pei)養(yang)基的混合(he)不充(chong)分：在培(pei)養(yang)基中(zhong)接(jie)入細胞後應當(dang)輕(qing)搖混勻，在進(jin)入振蕩(dang)培(pei)養(yang)箱(xiang)後，保證持續(xu)穩定(ding)的振幅頻率，避免局部濃(nong)度差(cha)異。

2.在細胞培(pei)養(yang)過程(cheng)中(zhong)有(you)時候會(hui)出現同壹時期相同器(qi)皿(min)之(zhi)間細胞生長不平衡。

這(zhe)種(zhong)情(qing)況可能(neng)是(shi)由(you)於培(pei)養(yang)箱(xiang)內(nei)部的(de)溫度不(bu)均壹所導(dao)致(zhi)。註意做好(hao)以(yi)下(xia)兩點(dian)：

a.避免將(jiang)培(pei)養(yang)器皿(min)疊(die)放(fang)，因(yin)為底部(bu)的培(pei)養(yang)器皿(min)最(zui)靠(kao)近金屬架(jia)可(ke)能(neng)加熱最(zui)快。

b.如果放(fang)在培(pei)養(yang)箱(xiang)前部(bu)的(de)培(pei)養(yang)器皿(min)比(bi)後面的(de)生長慢，要註(zhu)意保持(chi)培(pei)養(yang)箱(xiang)的(de)門盡可能關嚴(yan)，並將(jiang)前面(mian)的(de)培(pei)養(yang)器皿(min)移到(dao)後面。

蘇(su)州(zhou)阿爾法(fa)生物12年專(zhuan)註於生物實驗(yan)室(shi)儀(yi)器(qi)設(she)備(bei)與實(shi)驗(yan)室(shi)試(shi)劑(ji)耗材的專(zhuan)業供(gong)應(ying)，實(shi)驗(yan)室(shi)儀(yi)器(qi)中(zhong)所(suo)供(gong)應(ying)的(de)生物反(fan)應(ying)器(qi)常(chang)用於MDCK 細胞 、 HEK293 細胞培(pei)養(yang),懸(xuan)浮細胞培(pei)養(yang)、貼壁細胞培(pei)養(yang)、微(wei)載(zai)體培(pei)養(yang)、微(wei)生物培(pei)養(yang)、生物制藥(yao)等(deng)，同時我們(men)還(hai)提(ti)供(gong)細胞培(pei)養(yang)基、血清、培(pei)養(yang)添加劑、細胞培(pei)養(yang)瓶、培(pei)養(yang)皿(min)、搖(yao)瓶(ping)等(deng) 細胞培(pei)養(yang) 類的試劑(ji)耗材 。