關於(yu)蛋(dan)白電(dian)泳中的(de)SDS聚丙烯酰(xian)胺(an)凝膠(jiao)

蛋(dan)白電(dian)泳是研究(jiu)蛋白質性質的(de)壹種(zhong)相(xiang)對(dui)簡(jian)單、快速和(he)高靈(ling)敏(min)度的(de)工(gong)具(ju)。它(ta)是分析化(hua)學(xue)、生物(wu)化(hua)學(xue)和分子(zi)生物(wu)學的(de)主要工(gong)具(ju)。通(tong)過(guo)電(dian)泳分離蛋白質是基於(yu)這樣壹個事(shi)實，即(ji)帶電(dian)分(fen)子(zi)將在施(shi)加(jia)電(dian)場(chang)時(shi)通(tong)過(guo)基質遷移(yi)。蛋白質電(dian)泳分離的(de)基質是聚丙烯酰(xian)胺(an)。 用(yong)於(yu)形(xing)成(cheng)聚丙烯酰(xian)胺(an)的(de)化(hua)學(xue)試劑是單體(ti)丙烯酰(xian)胺(an)和(he)N，N'-雙(shuang)丙烯酰(xian)胺(an)（雙(shuang)-丙烯酰(xian)胺(an)）。聚(ju)合(he)丙烯酰(xian)胺(an)和(he)雙(shuang)丙烯酰(xian)的(de)方(fang)法是使用 TEMED（四*基乙二(er)胺(an)）和過(guo)硫酸銨(an)。聚(ju)丙烯酰(xian)胺(an)凝膠(jiao)內部的(de)聚合(he)形(xing)成(cheng)了壹個交聯(lian)的(de)微孔(kong)網(wang)絡。這種(zhong)孔(kong)隙(xi)網絡允(yun)許(xu)小蛋白質分子快 速通(tong)過(guo)，同時減(jian)緩(huan)較大蛋白質的(de)遷移(yi)。這導(dao)致(zhi)基(ji)於其(qi)分子(zi)大小的(de)蛋白質分離。

聚丙烯酰(xian)胺(an)凝膠(jiao)基(ji)質中孔(kong)的(de)大小由每(mei)單位(wei)體積(ji)使用的(de)總(zong)丙烯酰(xian)胺(an)的(de)量和(he)使用的(de)雙(shuang)丙烯酰(xian)胺(an)的(de)相(xiang)對(dui)百分比(bi)確(que)定。聚丙烯酰(xian)胺(an)凝膠(jiao)的(de)有效(xiao)範圍在(zai)3-30%之(zhi)間(jian)。

SDS PAGE（SDS聚(ju)丙烯酰(xian)胺(an)凝膠(jiao)電(dian)泳）存在兩(liang)種(zhong)根(gen)本(ben)不(bu)同類型(xing)的(de)凝膠(jiao)系(xi)統(tong)，非(fei)解(jie)離(li)（非(fei)變性）和解(jie)離(li)（變性）。非(fei)解(jie)離(li)（非(fei)變性）系(xi)統(tong)旨(zhi)在(zai)在(zai)保留(liu)蛋白質功能(neng)和(he)活(huo)性的(de)條件(jian)下分離(li)天(tian)然(ran)蛋(dan)白質。相(xiang)比(bi)之(zhi)下，解離(li)系(xi)統(tong)旨(zhi)在(zai)將蛋白質變性為(wei)其(qi)成分的(de)多肽(tai)，從而檢查樣品(pin)的(de)多肽(tai)組成。變性系(xi)統(tong)可能(neng)經(jing)常(chang)用(yong)的(de)，被(bei)稱(cheng)為(wei) SDS-PAGE。

SDS-PAGE 蛋(dan)白質鑒定過(guo)程中(zhong)使用的(de) SDS 代表十二烷(wan)基硫酸鈉(na)，壹種(zhong)陰(yin)離(li)子(zi)去(qu)汙劑，可使蛋白質變性並將每(mei)個多肽(tai)鏈展(zhan)開成線性方(fang)向(xiang)。SDS 還(hai)根據其(qi)質量對(dui)每(mei)種(zhong)蛋(dan)白質施加(jia)均(jun)勻分布的(de)負電(dian)荷。

在 SDS-PAGE 中(zhong)，蛋(dan)白質混(hun)合物(wu)通過(guo)在 100°C 下在過(guo)量 SDS 存(cun)在下加(jia)熱而(er)變性，並使用還(hai)原劑（β-巰(qiu)基乙醇(chun)、TCEP、DTT）來破壞二硫鍵(jian)。在(zai)這些(xie)條件(jian)下，所有(you)還(hai)原的(de)多肽(tai)結(jie)合(he)相(xiang)同量的(de) SDS（1.4g SDS/g 多肽(tai)），與蛋白質的(de)氨(an)基酸組(zu)成和序(xu)列無(wu)關。SDS-蛋(dan)白質復合物(wu)形成(cheng)壹個桿，其長度與蛋(dan)白質的(de)分子(zi)量成(cheng)正比(bi)。所有(you)蛋(dan)白質現在都帶負(fu)電(dian)荷，電(dian)荷密(mi)度相(xiang)似(si)，因(yin)此(ci)可以僅(jin)根據它(ta)們(men)的(de)大小進行(xing)分離(li)。

SDS-PAGE 主要用於(yu)以下目的(de)：

1. 蛋白質大小的(de)估計(ji)。

2. 蛋白質亞基(ji)或(huo)聚(ju)集(ji)結(jie)構的(de)測定。

3. 蛋白質純度的(de)估計(ji)。

4. 蛋白質定量。

5. 監(jian)測蛋白質完整(zheng)性。

6. 比(bi)較不(bu)同樣品(pin)的(de)多肽(tai)組成。

7. 分析多肽(tai)亞基(ji)的(de)數量和(he)大小。

8. 蛋白電(dian)泳後應(ying)用，例如(ru)蛋白質印(yin)跡。

    實(shi)驗中的(de)SDS-PAGE使用DIY自(zi)行(xing)配(pei)置的(de)話需(xu)要1個小時左右(you)，比(bi)較耗(hao)時(shi)費(fei)力(li)，目前(qian)很多實(shi)驗室(shi)為(wei)了提升(sheng)實驗效率(lv)壹般(ban)選用(yong)提前(qian)配(pei)置好(hao)的(de)預(yu)制膠(jiao)，比(bi)如(ru)天能(neng)的(de)Biofuraw Precast Bis-Tris Gel 系(xi)列(lie)預(yu)制膠(jiao)，在(zai)電(dian)泳過(guo)程中(zhong)有(you)效(xiao)避免了Tris-甘(gan)氨(an)酸SDS-PAGE凝膠(jiao)所出現的(de)“外八(ba)"現(xian)象(xiang)，跑(pao)膠(jiao)效(xiao)果穩(wen)定均壹。在節(jie)約(yue)用戶(hu)時(shi)間的(de)同時，也(ye)保證(zheng)了實驗(yan)的(de)質量。

    蘇(su)州阿爾(er)法生物(wu)所提供的(de)SDS蛋白電(dian)泳預(yu)制膠(jiao)、梯度預(yu)制膠(jiao)、電(dian)泳儀、電(dian)泳槽、核酸電(dian)泳預(yu)制膠(jiao)、核(he)酸電(dian)泳儀、電(dian)泳儀電(dian)源(yuan)、電(dian)泳槽等實驗室(shi)設備(bei)。