蛋(dan)白(bai)免(mian)疫印(yin)跡(ji)實(shi)驗(yan)常(chang)見問題原因分(fen)析(xi)匯總(zong)

蛋(dan)白(bai)免(mian)疫印(yin)跡(ji)實(shi)驗(yan)常(chang)見問題原因分(fen)析(xi)匯總(zong)如下(xia)：

壹(yi)、檢測無(wu)信號

主(zhu)要(yao)可(ke)能由(you)於(yu)以(yi)下(xia)原因導致(zhi)：

1. 用(yong)於(yu)檢測的二(er)抗不(bu)匹配。解決辦法(fa)：需要(yao)確(que)定壹(yi)抗的宿主(zhu)。

2. 壹(yi)抗二(er)抗的濃度(du)過低(di)：需要(yao)耐(nai)心地(di)重新實驗(yan)。

3.壹(yi)抗不(bu)識別(bie)被(bei)檢測物種(zhong)中的蛋(dan)白(bai)質(zhi)：可(ke)以(yi)再檢(jian)查以(yi)下(xia)壹(yi)抗的特(te)異(yi)性。

4.凝膠上上樣的蛋(dan)白(bai)量(liang)太少：凝膠上樣品(pin)過(guo)少也(ye)會導致(zhi)信號弱，所以(yi)適當(dang)增(zeng)加(jia)樣(yang)本(ben)量(liang)也(ye)可(ke)以(yi)防(fang)止此(ci)現(xian)象(xiang)發(fa)生。

5.傳(chuan)輸(shu)效率(lv)相當(dang)低(di)：出(chu)現這(zhe)種(zhong)情況可(ke)以(yi)嘗試(shi)修改(gai)轉(zhuan)移程(cheng)序的操作(zuo)，確(que)保 PVDF 與(yu)甲醇預孵(fu)育。轉(zhuan)移後(hou)幹燥 PVDF 以(yi)確(que)保蛋(dan)白(bai)質(zhi)與(yu)疏水膜(mo)的結合。

6.壹(yi)抗使用(yong)次數(shu)過(guo)多：億(yi)康如果(guo)過(guo)度(du)稀(xi)釋(shi)對(dui)信號檢(jian)測也(ye)會有壹(yi)定的影(ying)響(xiang)，所以(yi)盡量(liang)使用(yong)新稀(xi)釋(shi)的壹(yi)抗。

7.阻塞(sai)時(shi)間過(guo)長(chang)或洗滌(di)次數(shu)過(guo)多：盡量(liang)減少阻塞(sai)時(shi)間和洗滌(di)時(shi)間。

8. 檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒不(bu)起作(zuo)用(yong)：這(zhe)種(zhong)情況出(chu)現的較少，實驗(yan)中註意(yi)試(shi)劑盒的有效(xiao)期(qi)是否正常(chang)，也(ye)可(ke)使用(yong)陽(yang)性對(dui)照(zhao)並(bing)確(que)保檢測(ce)試(shi)劑盒正(zheng)常(chang)工作(zuo)。

9.NaN可(ke)能會(hui)抑(yi)制二(er)抗：盡量(liang)避免(mian)在稀(xi)釋(shi)緩(huan)沖(chong)液(ye)中使用(yong)NaN。

10.壹(yi)抗或二(er)抗的孵(fu)育時(shi)間太(tai)短(duan)：可(ke)適當(dang)延(yan)長孵(fu)化時(shi)間

11. SDS 上(shang)樣(yang)緩(huan)沖(chong)液(ye)和樣品(pin)裂(lie)解液(ye)沒(mei)有充分(fen)混合或者混合不(bu)均勻： SDS 上樣緩(huan)沖(chong)液(ye)需要(yao)隨(sui)用(yong)隨(sui)配，以(yi)保證其新鮮(xian)度(du)，另(ling)外緩(huan)沖(chong)液(ye)與(yu)裂(lie)解液(ye)可(ke)以(yi)使用(yong)渦(wo)旋混合器進行(xing)充分(fen)混合。

二(er)、無蛋(dan)白(bai)質(zhi)的區域具有(you)高背(bei)景

蛋(dan)白(bai)免(mian)疫印(yin)跡(ji)常(chang)見問題中出(chu)現這(zhe)種(zhong)現(xian)象(xiang)，可(ke)能由(you)於(yu)以(yi)下(xia)幾(ji)種(zhong)情況所導(dao)致(zhi)。

1.可(ke)能由(you)於(yu)封閉(bi)時(shi)間過(guo)短(duan)或封閉(bi)緩(huan)沖(chong)液(ye)使用(yong)不(bu)當(dang)。大(da)多數(shu)壹(yi)抗基(ji)本(ben)不(bu)會和白(bai)蛋(dan)白(bai)或酪蛋(dan)白(bai)發(fa)生交叉(cha)反(fan)應。如(ru)果(guo)任(ren)何(he)沒(mei)有蛋(dan)白(bai)質(zhi)的區域具有(you)高背(bei)景，則(ze)封閉(bi)步驟(zhou)可(ke)能無(wu)法(fa)正常(chang)工作(zuo)。

2.壹(yi)抗或二(er)抗的濃度(du)過高所(suo)致(zhi)：適當(dang)降(jiang)低抗(kang)體(ti)濃度(du)。

3.洗滌(di)不(bu)夠(gou)充分(fen)：可(ke)以(yi)增加洗滌(di)的次數(shu)。

4.孵(fu)化溫(wen)度(du)過高：壹(yi)抗的孵(fu)育溫(wen)度(du)以(yi)4°C左右為(wei)宜(yi)。

5.轉(zhuan)印(yin)膜(mo)選用(yong)不(bu)當(dang)，或者轉(zhuan)印(yin)膜(mo)幹(gan)燥(zao)：壹(yi)般(ban)情況下(xia)選用(yong)PVDF膜(mo)具有(you)較好的轉(zhuan)印(yin)效果(guo)，同(tong)時(shi)防(fang)止膜(mo)幹(gan)燥(zao)。

6.較高分(fen)子(zi)量(liang)的高背(bei)景也(ye)有可(ke)能是由於還(hai)原試(shi)劑、SDS或樣(yang)品(pin)加(jia)熱(re)方(fang)式(shi)時(shi)長不(bu)正確(que)。

三、出(chu)現白(bai)帶或信號迅(xun)速減弱

1.壹(yi)抗或二(er)抗過(guo)高：適(shi)當(dang)降(jiang)低抗(kang)體(ti)濃度(du)

2.ECL 溶(rong)液(ye)被(bei)汙(wu)染：註(zhu)意(yi)保持(chi)ECL 溶(rong)液(ye)新鮮(xian)程(cheng)度(du)，或者使用(yong)新配制的 ECL 溶(rong)液(ye)。

3.混合後(hou)的 ECL 溶(rong)液(ye)壽命(ming)縮(suo)短(duan)：註意(yi)選擇合適的ECL 解決方(fang)案(an)。

四、斷帶、特(te)殊(shu)條(tiao)帶出(chu)現

凝(ning)膠電泳期間使用(yong)的電壓過高或緩(huan)沖(chong)液(ye)溫(wen)度(du)過高會(hui)出(chu)現這(zhe)種(zhong)情況。

五、出(chu)現漫(man)反(fan)射帶

1.抗(kang)體(ti)濃度(du)過高：適(shi)當(dang)降(jiang)低抗(kang)體(ti)濃度(du)。

2.凝膠上上樣的蛋(dan)白(bai)質(zhi)量(liang)太高：盡量(liang)減少上樣量(liang)。

六、出(chu)現空(kong)白(bai)區(qu)域

這(zhe)種(zhong)情況多數(shu)是由於轉(zhuan)移不(bu)均勻所造成(cheng)。轉(zhuan)移時(shi)需要(yao)確(que)保膜(mo)在(zai)凝(ning)膠上均勻無氣泡。

七、非(fei)特(te)異(yi)性信號

有(you)的時(shi)候高濃度(du)的抗體(ti)也(ye)導致(zhi)非(fei)特(te)異(yi)性信號出(chu)現。內(nei)源(yuan)性免疫(yi)球蛋(dan)白(bai)，尤(you)其是在組織(zhi)裂(lie)解物(wu)中 容易出(chu)現信號幹(gan)擾。可(ke)以(yi)通(tong)過預先清(qing)除(chu)內(nei)源(yuan)性免疫(yi)球蛋(dan)白(bai)來(lai)減少來自內源(yuan)性免疫(yi)球蛋(dan)白(bai)的非(fei)特(te)異(yi)性信號。

八、條帶模(mo)糊或者出(chu)現汙(wu)斑

這(zhe)多數(shu)由(you)於凝(ning)膠平衡(heng)時(shi)間不(bu)足或凝(ning)膠與(yu)膜(mo)接觸不(bu)均勻所致(zhi)。