技(ji)術文(wen)章
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全(quan)自(zi)動(dong)離(li)心(xin)機(ji)轉速(su)與(yu)離(li)心(xin)力(li)如(ru)何(he)精準(zhun)匹配細(xi)胞(bao)蛋白等樣(yang)品實(shi)驗需求?
更(geng)新時(shi)間:2025-06-06
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在生(sheng)物(wu)實(shi)驗中(zhong),全(quan)自(zi)動(dong)離(li)心(xin)機(ji)的(de)轉速(su)與(yu)離(li)心(xin)力(li)(RCF,相(xiang)對(dui)離(li)心(xin)力(li))需(xu)根(gen)據樣(yang)品特(te)性(xing)(如(ru)顆粒(li)大(da)小、密度、黏度)匹配,以確(que)保(bao)分離(li)效(xiao)果(guo)和(he)樣(yang)品活(huo)性(xing)。以下是(shi)具(ju)體匹配原(yuan)則(ze)和(he)應用(yong)場(chang)景:
離(li)心(xin)力(li)(RCF)與(yu)轉速(su)(RPM,每(mei)分(fen)鐘(zhong)轉數)、離(li)心(xin)機(ji)半(ban)徑(r,旋轉軸(zhou)到(dao)離(li)心(xin)管(guan)底(di)部(bu)的距離(li),單(dan)位(wei)為 cm)的(de)關(guan)系(xi)公(gong)式(shi):
關(guan)鍵(jian)影響(xiang)因(yin)素:
· 轉速(su)相(xiang)同時,離(li)心(xin)機(ji)半(ban)徑越(yue)大(da),RCF 越大(da)(如(ru)落(luo)地(di)式(shi)離(li)心(xin)機(ji)通常比臺式(shi)離(li)心(xin)機(ji)半(ban)徑大(da))。
· 樣(yang)品特(te)性(xing):大(da)顆粒(li)(如(ru)細(xi)胞(bao))需較(jiao)低(di) RCF,小顆粒(li)(如(ru)蛋白)需較高 RCF。

· 特點(dian):顆粒(li)較(jiao)大(da)(直徑 1-100 μm),密度接近培(pei)養(yang)基(ji),易(yi)受高剪(jian)切力(li)損傷(shang)。
· 離(li)心(xin)目(mu)的:收(shou)集細(xi)胞(bao)、去(qu)除培(pei)養(yang)基(ji)或(huo)分(fen)離(li)細(xi)胞(bao)組分(如(ru)細(xi)胞(bao)器)。
· 推薦參(can)數:
· 轉速(su):500-3000 RPM(對(dui)應 RCF 約(yue) 50-1000×g)。
· 比如(ru):
· 哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)細(xi)胞(bao)(如(ru) HEK293、CHO 細(xi)胞(bao)):通常 1000-2000 RPM(約(yue) 100-300×g),離(li)心(xin) 5-10 分(fen)鐘(zhong),避免細(xi)胞(bao)破裂。
· 細菌(jun)(如(ru)大(da)腸桿(gan)菌(jun)):需更(geng)高轉速(su)(2000-3000 RPM,約(yue) 300-1000×g),因(yin)菌(jun)體密度較高,離(li)心(xin)時(shi)間可延長至(zhi) 10-15 分(fen)鐘(zhong)。
· 註意(yi)事項(xiang):
· 低(di)溫(wen)離(li)心(xin)(4℃)可維持(chi)細胞(bao)活性(xing),減(jian)少(shao)酶(mei)解(jie)。
· 避免使(shi)用(yong)過高 RCF,防(fang)止(zhi)細(xi)胞(bao)結塊(kuai)或(huo)損傷(shang)(如(ru)酵母細胞(bao)在 > 1500×g 時易(yi)破裂)。
· 特(te)點:顆粒(li)小(分(fen)子量(liang) 10-100 kDa,直徑約(yue) 2-10 nm),需(xu)根(gen)據純(chun)化(hua)階段(duan)調(tiao)整(zheng)分(fen)離(li)條(tiao)件。
· 離(li)心(xin)目(mu)的:
· 粗提階段(duan):分(fen)離(li)細(xi)胞(bao)碎片與(yu)上(shang)清液(ye)(含(han)可溶(rong)性(xing)蛋白)。
· 純化(hua)階段(duan):通過超速(su)離(li)心(xin)分(fen)離(li)亞(ya)細(xi)胞(bao)結構或蛋白復(fu)合物(wu)。
· 推薦參(can)數:
· 低(di)速(su)離(li)心(xin)(粗提):
· 轉速(su):3000-10,000 RPM(約(yue) 1000-15,000×g),離(li)心(xin) 10-30 分(fen)鐘(zhong)。
· 用(yong)途(tu):破碎細胞(bao)後去(qu)除細(xi)胞(bao)壁、膜(mo)碎片等(deng)大(da)顆粒(li),收(shou)集含(han)蛋白的上清(qing)液(ye)。
· 高速(su) / 超(chao)速(su)離(li)心(xin)(純(chun)化(hua)):
· 轉速(su):10,000-100,000 RPM(對(dui)應 RCF 約(yue) 15,000-1,000,000×g),需(xu)使(shi)用(yong)超(chao)速(su)離(li)心(xin)機(ji)。
· 用(yong)途(tu):
· 密度梯度離(li)心(xin)(如(ru)蔗(zhe)糖(tang) / 氯化(hua)銫梯(ti)度):分離(li)不同密度的蛋白(如(ru)病(bing)毒(du)樣(yang)顆粒(li)、脂(zhi)蛋白),RCF 可達 100,000×g 以上(shang),離(li)心(xin)數小時(shi)至(zhi)過夜。
· 差速(su)離(li)心(xin):分(fen)步(bu)分(fen)離(li)細(xi)胞(bao)器(如(ru)線(xian)粒(li)體、溶(rong)酶體),通過逐步提(ti)高 RCF(如(ru)先(xian) 10,000×g 沈澱(dian)細胞(bao)核(he),再 50,000×g 沈(chen)澱(dian)線粒(li)體)。
· 註(zhu)意事項(xiang):
· 高速(su)離(li)心(xin)時(shi)需(xu)平(ping)衡(heng)離(li)心(xin)管(guan),避免轉頭(tou)磨(mo)損或(huo)樣(yang)品飛(fei)濺。
· 蛋白樣(yang)品需(xu)保(bao)持(chi)在合適(shi) pH 和鹽(yan)濃度中(zhong),防(fang)止(zhi)變(bian)性(xing)(如(ru)添(tian)加(jia)蛋白酶抑制劑、使(shi)用(yong) Tris 緩(huan)沖液(ye))。
· 核(he)酸(DNA/RNA):
· 常規提取(如(ru)質(zhi)粒(li) DNA):轉速(su) 12,000-16,000 RPM(約(yue) 15,000-20,000×g),離(li)心(xin) 5-10 分(fen)鐘(zhong),用(yong)於(yu)沈澱(dian)菌(jun)體或(huo)分離(li)有(you)機(ji)相(xiang)。
· 超(chao)螺旋 DNA 純化(hua):超速(su)離(li)心(xin)(>50,000 RPM,RCF>100,000×g)結合氯化(hua)銫梯(ti)度,分離(li)不同構象(xiang)的 DNA。
· 病(bing)毒(du)顆粒(li):
· 分(fen)離(li)病(bing)毒(du)(如(ru)腺病毒(du)、慢(man)病(bing)毒(du)):超(chao)速(su)離(li)心(xin)(100,000×g 以上(shang)),通過密度梯度(如(ru)碘(dian)克沙(sha)醇)純(chun)化(hua),離(li)心(xin)時(shi)間通常 > 2 小時(shi)。
1. 預(yu)實驗優化(hua):
· 初次使(shi)用(yong)新樣(yang)品時(shi),建議從低(di) RCF 開始(shi)(如(ru) 500×g),逐步提(ti)高轉速(su),觀(guan)察(cha)沈(chen)澱(dian)效果(guo)和(he)樣(yang)品完(wan)整性(xing)。
· 例(li):分(fen)離(li)貼壁(bi)細胞(bao)時,先(xian) 1000 RPM 試離(li)心(xin),若(ruo)沈(chen)澱(dian)量(liang)不足(zu),再增(zeng)至(zhi) 1500 RPM。
2. 離(li)心(xin)條(tiao)件記(ji)錄:
· 同時記(ji)錄 RPM 和(he) RCF,因(yin)不同離(li)心(xin)機(ji)半(ban)徑可能導致相(xiang)同 RPM 下 RCF 差異(yi)顯著(zhu)。
· 例:兩臺離(li)心(xin)機(ji)均設為 3000 RPM,半(ban)徑 10 cm 的(de)機(ji)器 RCF 為約(yue) 1000×g,而(er)半(ban)徑 20 cm 的(de)機(ji)器 RCF 可達 2000×g。
3. 樣(yang)品保(bao)護(hu)措(cuo)施:
· 低(di)溫(wen)離(li)心(xin)(4℃)適(shi)用(yong)於(yu)酶、抗體等(deng)熱(re)敏(min)性(xing)樣(yang)品,減(jian)少(shao)降(jiang)解(jie)。
· 使(shi)用(yong)帶(dai)軟墊(dian)的(de)離(li)心(xin)管(guan)或(huo)降(jiang)低(di)轉速(su),避免剪(jian)切力(li)破壞(huai)脆弱樣(yang)品(如(ru)血(xue)小板(ban)、外泌(mi)體)。
樣(yang)品類型(xing) | 實(shi)驗目(mu)的 | 離(li)心(xin)機(ji)類型(xing) | 轉速(su)(RPM) | RCF(×g) | 離(li)心(xin)時(shi)間 | 關(guan)鍵(jian)註意(yi)事項(xiang) |
哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)細(xi)胞(bao)收(shou)集 | 傳代(dai)培(pei)養(yang) / 換液(ye) | 臺式(shi)離(li)心(xin)機(ji) | 1000-1500 | 100-200 | 5-8 分(fen)鐘(zhong) | 離(li)心(xin)後(hou)輕(qing)柔(rou)重懸,避免細(xi)胞(bao)損傷(shang) |
細(xi)菌(jun)裂解(jie)上清獲取 | 重組蛋白粗提 | 臺式(shi)高速(su)離(li)心(xin)機(ji) | 8000-10,000 | 8000-15,000 | 20 分(fen)鐘(zhong) | 離(li)心(xin)前充(chong)分(fen)超(chao)聲破碎,冰浴(yu)操(cao)作(zuo) |
外泌(mi)體分(fen)離(li) | 體液(ye)中(zhong)外泌(mi)體富(fu)集 | 超(chao)速(su)離(li)心(xin)機(ji) | 100,000 | 100,000+ | 70 分(fen)鐘(zhong) | 先(xian)低(di)速(su)去(qu)除細(xi)胞(bao)碎片,再(zai)高速(su)沈(chen)澱(dian) |
病(bing)毒(du)純(chun)化(hua) | 慢(man)病(bing)毒(du)載(zai)體生(sheng)產 | 超(chao)速(su)離(li)心(xin)機(ji) | 25,000-30,000 | 100,000+ | 2 小時(shi) | 密度梯度離(li)心(xin),避免反(fan)復(fu)凍融 |
· 低(di) RCF(<5000×g):適(shi)用(yong)於(yu)大(da)顆粒(li)樣(yang)品(細(xi)胞(bao)、組織碎片),以溫(wen)和(he)分(fen)離(li)為原(yuan)則(ze)。
· 中(zhong)高 RCF(5000-50,000×g):適(shi)用(yong)於(yu)蛋白粗提、細胞(bao)器分(fen)離(li),需(xu)平(ping)衡(heng)效(xiao)率(lv)與樣(yang)品活(huo)性(xing)。
· 超(chao)高 RCF(>50,000×g):僅(jin)用(yong)於(yu)病毒(du)、核(he)酸等(deng)超微顆粒(li)的(de)純(chun)化(hua),需專(zhuan)業超速(su)離(li)心(xin)機(ji)和(he)嚴(yan)格操(cao)作(zuo)規(gui)範(fan)。
通過精確(que)計算 RCF、優化(hua)轉速(su)和(he)時(shi)間,並結合樣(yang)品特(te)性(xing)調(tiao)整(zheng)條(tiao)件,提(ti)升實(shi)驗成功率(lv)和樣(yang)品質(zhi)量(liang)。

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