在基因克(ke)隆、載(zai)體(ti)構(gou)建等(deng)實(shi)驗中(zhong)，限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)是(shi)核心工具，但(dan)傳統(tong)酶(mei)存在(zai)三(san)大(da)瓶頸(jing)：

1. 耗(hao)時(shi)低效：需 30 分鐘(zhong) - 2 小(xiao)時(shi)酶切(qie)，且(qie)需提(ti)前(qian)孵(fu)育緩(huan)沖液；

2. 多(duo)步(bu)換液：酶(mei)切(qie)後(hou)需純(chun)化(hua)或(huo)更(geng)換 Buffer 才能進行(xing)去磷(lin)酸(suan)化(hua) / 連接，增(zeng)加(jia)汙染(ran)風(feng)險；

3. 兼(jian)容(rong)性(xing)差(cha)：不(bu)同(tong)品(pin)牌(pai)試(shi)劑(ji)緩(huan)沖體系不(bu)統(tong)壹(yi)，常(chang)導致反應效率(lv)下(xia)降（如(ru)連接效率(lv)降低(di) 40%）。

LightNing® 快速(su)內(nei)切(qie)酶(mei)通(tong)過基因(yin)工(gong)程改(gai)造(zao)酶(mei)蛋(dan)白 + 優化緩沖(chong)體(ti)系，系統(tong)性(xing)解決上(shang)述(shu)問題，尤其適合(he)高(gao)通(tong)量克(ke)隆（如(ru)載(zai)體(ti)庫(ku)構(gou)建、基因(yin)突(tu)變(bian)分析(xi)）。

二、LightNing® 核心技術優(you)勢(shi)：三(san)大(da)革(ge)新(xin)提(ti)升(sheng)實(shi)驗效率(lv)

1. 超速(su)酶(mei)切(qie)：5 分鐘(zhong)完(wan)成質粒(li)酶(mei)切(qie)（傳統(tong)酶(mei)需 30 分鐘(zhong)）

· 工(gong)程化(hua)改(gai)造(zao)：通(tong)過定(ding)向(xiang)進化技(ji)術優(you)化(hua)酶(mei) - 底物(wu)結(jie)合(he)位(wei)點，催(cui)化(hua)效率(lv)提(ti)升(sheng) 5 倍，5 分鐘(zhong)內(nei)酶切(qie)效率(lv)≥95%（SDS-PAGE 驗證(zheng)）；

· 適(shi)用(yong)範圍(wei)廣：兼(jian)容(rong)質粒(li) DNA（1μg）、PCR 產(chan)物(wu)（500bp-10kb）、基(ji)因(yin)組 DNA（哺乳(ru)動(dong)物(wu) / 植物(wu)源(yuan)），推薦酶用(yong)量僅 0.5μL / 反應。

2. 單(dan) Buffer 通(tong)吃：CutOne® 體(ti)系支(zhi)持(chi) “酶切(qie) - 修(xiu)飾(shi) - 連接" 壹(yi)管化(hua)

· 緩沖(chong)液：CutOne®/CutOne® Color Buffer（含(han)可視(shi)化染(ran)料(liao)）含(han) Mg²+/ATP 等(deng)多酶協(xie)同(tong)因子，確保：
✅ 內(nei)切(qie)酶(mei)活(huo)性(xing)：37℃下(xia) 15 分鐘(zhong)完(wan)成難切(qie)位(wei)點（如(ru) GC-rich 區域(yu)）酶(mei)切(qie)；
✅ 去(qu)磷(lin)酸(suan)化(hua)活性：CIAP / 蝦堿性磷(lin)酸(suan)酶(mei)在 CutOne® 中活性(xing)達(da) 100%（傳統(tong) Buffer 僅 70%）；
✅ 連接效率(lv)：T4 DNA 連接酶(mei)在(zai) CutOne® 中 25℃ 10 分鐘(zhong)完(wan)成黏性(xing)末(mo)端連接，效率(lv)比(bi)傳統(tong)體(ti)系提(ti)升(sheng) 20%。

3. 高性(xing)價(jia)比(bi)：50 + 常(chang)用(yong)酶覆(fu)蓋(gai) 95% 分子(zi)克(ke)隆需求

三(san)、標準化(hua)實(shi)驗流(liu)程：從酶切(qie)到(dao)連接只需 3 步(bu)

Step 1：體系配置（5 分鐘(zhong)）

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DNA模(mo)板（1μg） 5μL

CutOne® Buffer 2μL

LightNing®酶(mei) 0.5μL

ddH2O補(bu)至(zhi) 20μL

· 無(wu)需預混 Buffer，直接按(an)體(ti)積比(bi)添(tian)加(jia)（酶體(ti)積≤反應體系 5%）；

· CutOne® Color Buffer 含藍(lan)色染料(liao)，可直接上(shang)樣(yang)電泳(yong)觀察(cha)酶切(qie)進度。

Step 2：酶(mei)切(qie)反(fan)應（5-15 分鐘(zhong)）

· 37℃孵(fu)育 5 分鐘(zhong)（普通(tong)位點）或(huo) 15 分鐘(zhong)（難(nan)切(qie)位(wei)點），無需熱啟動；

· 支(zhi)持(chi)室(shi)溫（25℃）酶切(qie)（如(ru) NotI 等(deng)冷敏感酶），適合(he)野(ye)外(wai)或(huo)無溫(wen)控(kong)場景(jing)。

Step 3：壹(yi)管化(hua)修飾(shi) / 連接（10 分鐘(zhong)）

· 去(qu)磷(lin)酸(suan)化(hua)：直接添(tian)加(jia) CIAP（1U），37℃ 5 分鐘(zhong)滅活內(nei)切(qie)酶(mei)同(tong)時(shi)去磷(lin)酸(suan)化(hua)；

· 連接反(fan)應：添加(jia) T4 連接酶(mei)（1μL）及(ji) ATP（終濃度 1mM），25℃ 10 分鐘(zhong)完(wan)成連接。

對(dui)比(bi)傳統(tong)流(liu)程：總(zong)耗(hao)時(shi)從≥60 分鐘(zhong)縮短至≤30 分鐘(zhong)，減少(shao) 2 次離心換液步(bu)驟(zhou)，汙染(ran)風(feng)險降(jiang)低(di) 70%。

四(si)、目標客(ke)戶(hu)與(yu)場景(jing)適配

1. 科研實(shi)驗室(shi)（高校 / 研究所(suo)）

· 痛點：碩士(shi) / 博(bo)士(shi)需同(tong)時(shi)處理(li)多(duo)個克(ke)隆項目，時(shi)間成本高(gao)；

· 解決方案(an)：LightNing® 50μL 小(xiao)規格包(bao)裝(zhuang)（適(shi)合(he)少(shao)量(liang)多(duo)次實(shi)驗），搭配免費 Protocol（含 CRISPR 載(zai)體(ti)構(gou)建案例(li)）。

2. 生物(wu)制(zhi)藥企業(ye)（工(gong)藝開(kai)發(fa)）

· 需求：GMP 級(ji)酶(mei)需批(pi)次穩(wen)定(ding)性(xing)高(gao)、兼(jian)容(rong)性(xing)強(qiang)；

· 產品(pin)優(you)勢(shi)：提(ti)供(gong) 1mL/5mL 工業(ye)級(ji)包(bao)裝(zhuang)，每(mei)批(pi)次通(tong)過 STR 基因(yin)分型(xing)及(ji)酶(mei)活(huo)壹(yi)致性檢(jian)測（變(bian)異系數(shu)＜5%）。

3. 分子(zi)診斷公(gong)司（試劑(ji)盒(he)開發）

· 核心訴求：試(shi)劑(ji)需適配自動化平臺(tai)（如(ru)移(yi)液工(gong)作(zuo)站）；

· 技(ji)術優(you)勢(shi)：CutOne® Buffer 黏(nian)度低(di)（2.3cP），適合(he)機械臂(bi)精(jing)準(zhun)加(jia)樣(yang)，已通(tong)過 Beckman Coulter 平臺(tai)兼(jian)容(rong)性(xing)測(ce)試。

五、選購與(yu)技術支(zhi)持(chi)

1. 產品(pin)參(can)數(shu)

· 保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian)：-20℃避光(guang)保(bao)存(cun)，避免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)（建議(yi)分裝(zhuang) 5μL / 管）；

· 運(yun)輸(shu)條(tiao)件(jian)：冰(bing)袋(dai)冷(leng)藏運(yun)輸(shu)（4℃可穩(wen)定(ding) 72 小(xiao)時(shi)）；

· 質檢(jian)報(bao)告(gao)：每批(pi)次提(ti)供(gong)酶切(qie)效率(lv)（≥95%）、內(nei)毒素（＜10EU/mL）、支(zhi)原體(ti)檢(jian)測(ce)報(bao)告(gao)。

2. 增值(zhi)服務(wu)

· 免費酶切(qie)位(wei)點分析(xi)：提(ti)供(gong)載(zai)體(ti)序(xu)列，技(ji)術團(tuan)隊(dui) 24 小(xiao)時(shi)內(nei)反饋(kui)最(zui)佳(jia)酶(mei)切(qie)方(fang)案(an)；

· 定(ding)制(zhi)化開(kai)發：支(zhi)持(chi)稀(xi)有酶（如(ru) I-SceI、AscI）工(gong)程化(hua)改(gai)造(zao)，周(zhou)期(qi) 4-6 周(zhou)。

六(liu)、數(shu)據(ju)驗證(zheng)：第(di)三(san)方實(shi)驗室(shi)效果對比(bi)

LightNing®   快速(su)內(nei)切(qie)酶(mei)通(tong)過 “超速(su)酶(mei)切(qie) + 單(dan) Buffer 兼(jian)容(rong)" 技(ji)術，重(zhong)新(xin)定(ding)義(yi)分子(zi)克(ke)隆效率(lv)標準，尤(you)其適(shi)合(he)需要(yao)高(gao)頻(pin)酶(mei)切(qie)連接的(de)實(shi)驗（如(ru)載(zai)體(ti)構(gou)建、基因(yin)突(tu)變(bian)篩(shai)選）。蘇州(zhou)阿爾法生物(wu)提(ti)供(gong)的(de)試劑(ji)從常(chang)用(yong)酶到(dao)稀(xi)有酶的(de)全產品(pin)線(xian)，搭配 CutOne® Buffer 壹(yi)站式(shi)解決方案(an)，助(zhu)力科研與(yu)工業(ye)用(yong)戶突(tu)破(po)傳統(tong)酶(mei)切(qie)瓶(ping)頸(jing)。