Q2000C 型 qPCR 儀(yi)光(guang)通道偏移故障排查(zha)：ROX 模(mo)式(shi)下綠色(se)光(guang)異(yi)常的調整(zheng)方(fang)法

針(zhen)對 Q2000C qPCR 設(she)備光通(tong)道(dao)偏移的問題（如 ROX 模(mo)式(shi)下出現(xian)綠色(se)光(guang)而非預期(qi)的黃色(se) / 橙(cheng)色(se)），結(jie)合(he)設(she)備特性(xing)和行業通用(yong)解(jie)決方(fang)案，以下是(shi)具(ju)體(ti)的排查(zha)步(bu)驟(zhou)和建議：

壹、硬件故(gu)障排查(zha)與(yu)處理

1. 光(guang)學系統校準

Q2000C 采(cai)用(yong) SSLP™短(duan)光(guang)程(cheng)靜態(tai)熒光(guang) CCD 成(cheng)像技(ji)術，其(qi)光學系統通過(guo)固定(ding)濾光(guang)片(pian)和 LED 光源(yuan)實現(xian)多通(tong)道(dao)檢測。若出現(xian)光(guang)通道(dao)偏移，需重(zhong)點檢查以下環(huan)節(jie)：

l濾光(guang)片(pian)狀(zhuang)態：ROX 通(tong)道的濾光(guang)片(pian)（通(tong)常對(dui)應(ying) 570-600nm 波(bo)長(chang)）可(ke)能(neng)因(yin)長(chang)期(qi)使(shi)用(yong)或(huo)外力沖擊發(fa)生物(wu)理偏移。需聯系(xi)廠商工(gong)程(cheng)師打(da)開(kai)設(she)備，檢查濾光(guang)片(pian)支架(jia)是否松(song)動或(huo)移位。

l光(guang)源老化：設(she)備采(cai)用(yong)長(chang)壽命(ming) LED 光(guang)源，若使用(yong)超過(guo) 5 年(nian)或(huo)頻(pin)繁高(gao)溫運行，可(ke)能(neng)導致(zhi)發(fa)光波(bo)長(chang)漂(piao)移。可(ke)通過(guo)以下方(fang)法驗證(zheng)：

l光(guang)源自檢：進入設(she)備軟(ruan)件的 “系(xi)統設(she)置(zhi)" 或(huo) “診(zhen)斷" 菜(cai)單，執行 LED 光(guang)源(yuan)強(qiang)度(du)測試(shi)。若 ROX 通道的 LED 強(qiang)度(du)顯著(zhu)低(di)於(yu)其他通道，可(ke)能(neng)需(xu)更換(huan)光源(yuan)模(mo)塊(kuai)。

l光(guang)譜(pu)驗證(zheng)：使用(yong)光譜(pu)儀(yi)直(zhi)接測量 ROX 通(tong)道的激發(fa) / 發(fa)射波(bo)長(chang)，確(que)認(ren)是(shi)否與(yu)標稱值(zhi)（如(ru) 570nm 激發(fa)，585nm 發(fa)射）壹致(zhi)。

2. 光(guang)路(lu)汙染(ran)或(huo)遮擋

光(guang)路(lu)清(qing)潔：光學(xue)鏡片、CCD 探測器表面(mian)可(ke)能(neng)積(ji)累(lei)灰(hui)塵或(huo)冷凝(ning)水(shui)，導致(zhi)信號(hao)衰(shuai)減(jian)或(huo)顏(yan)色(se)偏差(cha)。需(xu)用(yong)無(wu)塵(chen)布蘸(zhan)取(qu)異丙醇(chun)輕輕擦拭(shi)光路(lu)組件（註(zhu)意：非專業人員(yuan)切勿自(zi)行拆(chai)卸）。

樣品臺遮擋：檢查樣品臺是否閉(bi)合(he)，避免環(huan)境(jing)光(guang)幹(gan)擾。若使用(yong)白(bai)色(se) PCR 管(guan)，需確(que)認(ren)管(guan)蓋(gai)無(wu)劃(hua)痕(hen)或(huo)變形。

二、軟(ruan)件與(yu)參(can)數(shu)調整

1. 通(tong)道配置檢查

波(bo)長(chang)設(she)置(zhi)：進入設(she)備軟(ruan)件的 “通(tong)道管理" 界(jie)面(mian)，確(que)認(ren) ROX 通(tong)道(dao)的激發(fa) / 發(fa)射波(bo)長(chang)參(can)數(shu)是否正確(que)（通(tong)常為(wei) 570nm/585nm）。若參數(shu)被意外修改，需(xu)恢(hui)復(fu)默認(ren)值(zhi)。

增(zeng)益與(yu)偏移校準：

手動校準：使用(yong)標準熒光(guang)染(ran)料(liao)（如羅(luo)丹明(ming) B）配(pei)制(zhi)梯度濃(nong)度溶液(ye)，執行 “光(guang)信號(hao)校準" 程(cheng)序，調整(zheng)通(tong)道(dao)增(zeng)益和偏移值(zhi)。

自(zi)動校準：部分(fen)型號(hao)支持(chi) “自(zi)動增(zeng)益控(kong)制(zhi)"（AGC），可(ke)嘗試(shi)啟用(yong)該功能(neng)優(you)化信號(hao)強(qiang)度(du)。

2. ROX 校正設(she)置(zhi)

參(can)比染料選擇(ze)：若 ROX 信號(hao)異(yi)常，可(ke)嘗試(shi)在(zai)軟(ruan)件中將(jiang)參比染料從 ROX 切換(huan)為 NONE，觀(guan)察(cha)熒光(guang)信號(hao)是(shi)否恢(hui)復(fu)正常。若切換(huan)後信號(hao)正常，可(ke)能(neng)是(shi) ROX 染料(liao)濃(nong)度與(yu)儀(yi)器不(bu)匹(pi)配。

基線調整(zheng)：在(zai)數(shu)據分(fen)析(xi)界(jie)面(mian)，手動調(tiao)整基線範(fan)圍（如(ru)設(she)置(zhi)為 Ct 值(zhi) - 4），避免背景(jing)噪(zao)音幹(gan)擾。

三(san)、行業通用(yong)解(jie)決方(fang)案參(can)考(kao)

1. 光(guang)信號(hao)校準流程(cheng)

標準品準備：使用(yong)已(yi)知濃(nong)度的 ROX 染(ran)料（如 10nM）配制(zhi)系列稀釋(shi)液(ye)（10nM、1nM、0.1nM）。

校準程(cheng)序：

1) 在(zai)設(she)備軟(ruan)件中選擇(ze) “校準" 模(mo)式(shi)，選擇(ze) ROX 通(tong)道(dao)。

2) 依(yi)次加載不(bu)同濃(nong)度的 ROX 標準品，記(ji)錄熒光(guang)強(qiang)度(du)值(zhi)。

3) 生成標準曲線，驗證(zheng)線性(xing)範(fan)圍（理(li)論斜率應(ying)為 1.0）。

4) 根據曲線調整(zheng)通(tong)道(dao)增(zeng)益，使(shi)信號(hao)強(qiang)度(du)與(yu)濃(nong)度呈線性(xing)關(guan)系。

2. 常見(jian)故(gu)障對(dui)比表

四(si)、操(cao)作(zuo)註(zhu)意事(shi)

l環(huan)境(jing)控(kong)制(zhi)：設(she)備應(ying)放置(zhi)在(zai)溫度(du)穩(wen)定(ding)（20-25℃）、無(wu)振(zhen)動(dong)的環(huan)境(jing)中，避免頻(pin)繁開(kai)關(guan)機。

l耗材兼(jian)容性(xing)：優(you)先使用(yong)朗基推薦的白(bai)色(se) PCR 管(guan)和光學(xue)封板膜(mo)，避免使(shi)用(yong)劣(lie)質(zhi)耗材導致(zhi)信號(hao)衰(shuai)減(jian)。

l定(ding)期(qi)維護：每(mei)季(ji)度(du)執行壹次(ci)光路(lu)清(qing)潔和溫度(du)校準，每年進行全(quan)面(mian)性(xing)能(neng)驗證(zheng)（如溫(wen)度均(jun)勻(yun)性(xing)、熒光(guang)線性(xing)度(du)）。

蘇(su)州(zhou)阿(e)爾(er)法生物(wu)為科(ke)研(yan)機(ji)構(gou)、生物(wu)醫藥(yao)企業及(ji)第(di)三(san)方(fang)檢測中心提(ti)供 Q2000C 熒光(guang)定(ding)量 PCR 儀(yi) 分(fen)子生物(wu)學設(she)備，生物(wu)試劑和實驗耗材。除 Q2000C 外，朗基 Q1000 型熒光(guang)定(ding)量 PCR 儀(yi)（支持(chi)雙通道(dao)同步檢測，無(wu)需(xu) ROX 校正）、梯度(du) PCR 儀(yi)及(ji)快(kuai)速 PCR 儀(yi)，滿(man)足從基礎(chu)研(yan)究到(dao)高(gao)通量檢測的多樣化需(xu)求(qiu)。如(ru)果(guo)您(nin)在 Q2000C 使用(yong)過(guo)程(cheng)中遇(yu)到(dao)光(guang)通道偏移、熒光(guang)信號(hao)異(yi)常等問題，或(huo)需要(yao)設(she)備采(cai)購、技(ji)術咨(zi)詢(xun)及(ji)維(wei)修報價請直(zhi)接聯系(xi)我(wo)們(men)。