不(bu)同組(zu)織(zhi)來源(yuan)的間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)在(zai)分(fen)離方(fang)法上(shang)有(you)哪(na)些(xie)具(ju)體(ti)差(cha)異(yi)？

間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)可以從(cong)多(duo)種(zhong)組(zu)織(zhi)中分(fen)離出(chu)來，不(bu)同組(zu)織(zhi)來源(yuan)的間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)在(zai)分(fen)離方(fang)法上(shang)存在(zai)壹定的(de)差異(yi)。以下是(shi)對不(bu)同組(zu)織(zhi)來源(yuan)間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)分(fen)離方(fang)法差(cha)異(yi)的詳(xiang)細(xi)介(jie)紹：

壹、人(ren)臍(qi)帶(dai)間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)

傳統分(fen)離方(fang)法與新(xin)方(fang)法對(dui)比：目(mu)前(qian)利用(yong)傳統分(fen)離提(ti)取(qu)細(xi)胞(bao)的(de)方(fang)法所獲(huo)取(qu)的人(ren)臍(qi)帶(dai)來(lai)源(yuan)的間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)與臍(qi)帶(dai)組(zu)織(zhi)中所含人(ren)臍(qi)帶(dai)來(lai)源(yuan)的間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)的(de)理論值相(xiang)差(cha)甚遠，造(zao)成(cheng)臍(qi)帶(dai)組(zu)織(zhi)的極(ji)大浪(lang)費，阻礙了間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)的(de)規模化制備(bei)培養。因(yin)此，需(xu)要建(jian)立壹套高(gao)效(xiao)分(fen)離人(ren)臍(qi)帶(dai)間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)的(de)方(fang)法。

膠(jiao)原(yuan)酶(mei)和胰(yi)蛋白(bai)酶(mei) - EDTA 消(xiao)化法：收(shou)集的(de)臍(qi)帶(dai)組(zu)織(zhi)可通(tong)過膠(jiao)原(yuan)酶(mei) type-I 和胰(yi)蛋白(bai)酶(mei) - EDTA 消(xiao)化進(jin)行(xing)間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)的(de)分(fen)離。將處(chu)理後的(de)分(fen)離細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)接(jie)種(zhong)在(zai)含有(you) DMEM Nutrient Mix F12、10% FBS 和 1% 抗生素抗(kang)真(zhen)菌(jun)溶液的六(liu)孔(kong)板(ban)中，在 37°C、5% CO₂的濕潤(run)培養箱中培養至 70 - 80% 融合(he)度。然(ran)後(hou)使(shi)用(yong) Neubauer 計數板在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)通(tong)過臺盼藍(lan)染色(se)進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)定量(liang)和活力(li)評估(gu)。研究發(fa)現，胰(yi)蛋白(bai)酶(mei)消(xiao)化兩種(zhong)組(zu)織(zhi)產生的細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)少(shao)於膠(jiao)原(yuan)酶(mei)處(chu)理，但胰(yi)蛋白(bai)酶(mei)處理提(ti)供的活細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)高(gao)於膠(jiao)原(yuan)酶(mei)處(chu)理。因(yin)此，胰(yi)蛋白(bai)酶(mei) - EDTA 可用(yong)於分(fen)析(xi)研究，在這種(zhong)情(qing)況下細(xi)胞(bao)產(chan)量(liang)的(de)重(zhong)要性較(jiao)低(di)。

二(er)、小鼠(shu)臍(qi)帶(dai)和脂(zhi)肪來源(yuan)間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)

組織(zhi)采集(ji)：對(dui)於瑞(rui)士白(bai)化(hua)小鼠(shu)，臍(qi)帶(dai)間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)從(cong)胎(tai)兒的(de)臍(qi)帶(dai)收(shou)集(ji)，脂(zhi)肪來源(yuan)間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)從(cong)小鼠(shu)的腹部(bu)脂(zhi)肪組織(zhi)收集(ji)。

分(fen)離方(fang)法：同(tong)樣采用(yong)膠(jiao)原(yuan)酶(mei) type-I 和胰(yi)蛋白(bai)酶(mei) - EDTA 消(xiao)化從(cong)收(shou)集(ji)的組織(zhi)中分(fen)離 AD-MSCs 和 UC-MSCs，分(fen)離後(hou)的細(xi)胞(bao)處(chu)理和培養方(fang)法與人(ren)臍(qi)帶(dai)間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)類(lei)似(si)。

三、奶牛脂(zhi)肪間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)

組織(zhi)采集(ji)與消(xiao)化：采集不(bu)同部(bu)位(wei)奶(nai)牛脂(zhi)肪，選用(yong) 0.25％胰(yi)蛋白(bai)酶(mei)消(xiao)化，並(bing)進(jin)行(xing)貼(tie)壁培養，獲(huo)取(qu)原(yuan)代(dai)奶(nai)牛 AD-MSCs。

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)與生長特(te)征：通(tong)過傳代(dai)培養進(jin)壹步(bu)純(chun)化(hua)擴增(zeng)。顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)及(ji)生長特(te)征，兩種(zhong)不(bu)同部(bu)位(wei)的(de) AD-MSCs 均呈(cheng)長(chang)梭(suo)形(xing)、紡錘形或(huo)多(duo)角(jiao)形(xing)貼(tie)壁生長，且(qie)兩個(ge)部(bu)位(wei)來(lai)源(yuan)的 AD-MSCs 的生長曲(qu)線差異(yi)較(jiao)小。

表面(mian)標誌(zhi)物及(ji)分(fen)化能力(li)：分(fen)離培養的 AD-MSCs 的表面(mian)標誌(zhi)物 CD44 和 CD73 呈(cheng)陽(yang)性表(biao)達，而(er) CD34 和 CD45 呈(cheng)陰(yin)性表(biao)達。在(zai)誘導分(fen)化培養試(shi)驗(yan)中(zhong)呈(cheng)現出較(jiao)強(qiang)的(de)成(cheng)脂(zhi)和成(cheng)骨(gu)分(fen)化能力(li)。

四、人(ren)肺癌(ai)組織(zhi)來源(yuan)間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)

分(fen)離方(fang)法：采(cai)用(yong)組織(zhi)塊分(fen)離法分(fen)離人(ren)肺癌(ai)組織(zhi)來源(yuan)的間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)。

細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)與生物學特(te)征：所分(fen)離的(de)細(xi)胞(bao)呈(cheng)成(cheng)纖(xian)維(wei)樣形態(tai)，並(bing)呈(cheng)漩(xuan)渦式生長；其(qi) CD73、CD90、CD105 和 CD166 呈(cheng)陽(yang)性表(biao)達，CD14、CD19、CD34、CD45 和 HLA-DR 均呈(cheng)陰(yin)性表(biao)達，且(qie)具(ju)有(you)向成(cheng)骨(gu)細(xi)胞(bao)、脂(zhi)肪細(xi)胞(bao)和成(cheng)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)分(fen)化的(de)能力(li)。

五、兔(tu)脂(zhi)肪間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)

組織(zhi)采集(ji)與消(xiao)化：體外分(fen)離兔(tu)腹股溝皮(pi)下(xia)脂(zhi)肪組織(zhi)，采用(yong) 0.1％I 型膠(jiao)原(yuan)酶(mei)消(xiao)化，用(yong)含 10％胎(tai)牛(niu)血(xue)清的(de)高(gao)糖培養基貼壁培養兔(tu) ADSCs。

細(xi)胞(bao)特(te)性分(fen)析(xi)：對(dui)其細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、體外(wai)增(zeng)殖(zhi)能力(li)、多向分(fen)化潛(qian)能及(ji)表面(mian)標記(ji)進(jin)行(xing)分(fen)析(xi)。體(ti)外分(fen)離培養的兔(tu) ADSCs 具(ju)有(you)良好(hao)的(de)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、較(jiao)強(qiang)的(de)增(zeng)殖(zhi)能力(li)，體外(wai)經二(er)向誘導，具(ju)有(you)成(cheng)脂(zhi)及(ji)成(cheng)骨(gu)分(fen)化潛(qian)能，兔(tu)第 2 代(dai) ADSCs 表面(mian)標記(ji) CD34、CD105 陽性，Sca-1 高(gao)表(biao)達，幾(ji)乎(hu)不(bu)表達 CD45 及(ji) SSEA-1。

六(liu)、人(ren)骨髓(sui)來(lai)源(yuan)間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)

分(fen)離方(fang)法：密(mi)度梯度離心從(cong)人(ren)骨髓(sui)分(fen)離單個(ge)核(he)細(xi)胞(bao)，接(jie)種(zhong)培養 3h 後頻(pin)繁(fan)換(huan)液(ye)，培養至第 14d 時用(yong) 0.25% 胰(yi)酶室(shi)溫(wen)作(zuo)用(yong) 2min 移種(zhong)後(hou)繼(ji)續(xu)培養至第 21d。

細(xi)胞(bao)鑒定：采(cai)用(yong)流式細(xi)胞(bao)術(shu)檢測收(shou)獲(huo)細(xi)胞(bao)的(de)表(biao)型分(fen)子。收(shou)獲(huo)細(xi)胞(bao)在(zai)特(te)定條(tiao)件下(xia)誘導培養至第 14d，分(fen)別采(cai)用(yong)茜(qian)素紅(hong)染色(se)、甲苯胺藍(lan)染色(se)和油(you)紅(hong)染色(se)進(jin)行(xing)鑒定。第 21d 時均壹的(de)長梭狀成(cheng)纖(xian)維(wei)樣細(xi)胞(bao)鋪(pu)滿(man)瓶(ping)底(di)，它們(men)高(gao)表(biao)達 CD105、CD73、CD90 並(bing)低(di)表(biao)達 CD45、CD34 和 CD14，能夠被(bei)誘導分(fen)化為(wei)骨細(xi)胞(bao)、軟(ruan)骨(gu)細(xi)胞(bao)和脂(zhi)肪細(xi)胞(bao)。

我們(men)還提(ti)供多種(zhong)常用(yong)的細(xi)胞(bao)和幹(gan)細(xi)胞(bao)產(chan)品，包(bao)括(kuo)人(ren)脂(zhi)肪間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)、人(ren)胚(pei)胎(tai)幹(gan)細(xi)胞(bao)、小鼠(shu)胚(pei)胎(tai)幹(gan)細(xi)胞(bao)、大鼠(shu)神經(jing)幹(gan)細(xi)胞(bao)、人(ren)誘導多能幹(gan)細(xi)胞(bao)（iPSCs）等(deng)。想(xiang)要(yao)了解(jie)更(geng)多(duo)關於骨(gu)髓間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)、人(ren)臍(qi)帶(dai)間(jian)充(chong)質幹(gan)細(xi)胞(bao)的(de)信(xin)息(xi)，請訪(fang)問(wen)蘇(su)州(zhou)阿(e)爾(er)法生物網站(zhan)。