重(zhong)組(zu)蛋(dan)白(bai)復(fu)性(xing)的(de)方(fang)法

重(zhong)組(zu)蛋(dan)白(bai)的(de)復(fu)性(xing)是(shi)壹(yi)個(ge)復雜的(de)過程，以下(xia)是壹(yi)些(xie)常(chang)見的(de)復(fu)性(xing)方(fang)法：

壹、稀(xi)釋復(fu)性(xing)法

1. 原理：將(jiang)變性(xing)的(de)重(zhong)組(zu)蛋(dan)白(bai)緩慢(man)加入(ru)到復性(xing)緩沖液(ye)中，降低蛋白(bai)濃(nong)度(du)，從(cong)而(er)減(jian)少(shao)分(fen)子間的(de)相(xiang)互(hu)作(zuo)用，促(cu)進正確折(zhe)疊(die)。

2. 操作(zuo)步(bu)驟：

   - 準(zhun)備(bei)合(he)適(shi)的(de)復(fu)性(xing)緩沖液(ye)，通常(chang)包含壹定(ding)濃(nong)度(du)的(de)鹽(yan)、緩沖劑(ji)、氧(yang)化還原對（如(ru)谷(gu)胱甘(gan)肽(tai)）等。

   - 將(jiang)變性(xing)的(de)蛋(dan)白(bai)溶(rong)液以緩慢(man)的(de)速(su)度(du)滴(di)加(jia)到(dao)復(fu)性(xing)緩沖液(ye)中，同(tong)時輕(qing)輕(qing)攪拌(ban)。

   - 在特定的(de)溫(wen)度(du)下(xia)（通常(chang)為(wei) 4℃或(huo)室(shi)溫）進行(xing)壹段(duan)時間(jian)的(de)孵(fu)育，讓(rang)蛋(dan)白(bai)逐(zhu)步(bu)復(fu)性(xing)。

3. 優點(dian)：操作(zuo)相(xiang)對簡(jian)單，成本較低。

4. 缺點(dian)：需(xu)要較大(da)體(ti)積的(de)復(fu)性(xing)緩沖液(ye)，可能(neng)導(dao)致(zhi)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)過低，不利於(yu)後(hou)續的(de)純(chun)化(hua)和(he)處理(li)。

二(er)、透(tou)析(xi)復性(xing)法

1. 原理：利用半(ban)透(tou)膜的(de)特性(xing)，通過逐漸降低透析(xi)液中變性(xing)劑(ji)的(de)濃(nong)度(du)，使蛋(dan)白(bai)在(zai)相(xiang)對溫(wen)和的(de)環境中實(shi)現復(fu)性(xing)。

2. 操作(zuo)步(bu)驟：

   - 將(jiang)變性(xing)的(de)蛋(dan)白(bai)溶(rong)液裝入(ru)透析(xi)袋中，選擇(ze)合(he)適(shi)孔徑(jing)的(de)透(tou)析(xi)袋，確保(bao)蛋(dan)白(bai)分(fen)子不能(neng)透過而變性(xing)劑(ji)等(deng)小(xiao)分子可以透過。

   - 將(jiang)透(tou)析(xi)袋放入(ru)復性(xing)緩沖液(ye)中進行(xing)透析(xi)，每(mei)隔(ge)壹(yi)段(duan)時間(jian)更(geng)換壹(yi)次復性(xing)緩沖液(ye)，以逐漸降低變性(xing)劑(ji)的(de)濃(nong)度(du)。

   - 透析(xi)過程通常(chang)在低(di)溫(wen)下(xia)進行(xing)，以減少(shao)蛋(dan)白(bai)的(de)聚(ju)集和錯誤(wu)折疊(die)。

3. 優點(dian)：可以較好地控制復性(xing)過程中變性(xing)劑(ji)的(de)去(qu)除速度(du)，減(jian)少(shao)蛋(dan)白(bai)聚(ju)集。

4. 缺點(dian)：透析(xi)時間(jian)較長，操(cao)作(zuo)相(xiang)對繁(fan)瑣(suo)，且可能(neng)存(cun)在蛋(dan)白(bai)泄(xie)漏的(de)風險(xian)。

三、超(chao)濾(lv)復(fu)性(xing)法

1. 原理：通過超濾膜對蛋(dan)白(bai)溶(rong)液進(jin)行(xing)濃縮(suo)和(he)換液(ye)，在(zai)去(qu)除變性(xing)劑(ji)的(de)同(tong)時保(bao)持(chi)蛋白(bai)濃(nong)度(du)在(zai)壹(yi)定(ding)範圍(wei)內，促(cu)進復(fu)性(xing)。

2. 操作(zuo)步(bu)驟：

   - 使用超(chao)濾裝置(zhi)，將(jiang)變性(xing)的(de)蛋(dan)白(bai)溶(rong)液加(jia)入(ru)到超濾(lv)池(chi)中。

   - 在壹(yi)定壓力下(xia)，通過超濾膜過濾，去除部分(fen)變性(xing)劑(ji)，同(tong)時加(jia)入(ru)復性(xing)緩沖液(ye)進行(xing)置換(huan)。

   - 重(zhong)復上(shang)述過程，逐漸降低變性(xing)劑(ji)濃(nong)度(du)，實(shi)現蛋(dan)白(bai)復(fu)性(xing)。

3. 優點(dian)：可以快(kuai)速(su)地進行(xing)濃縮(suo)和(he)換液(ye)操(cao)作(zuo)，減(jian)少(shao)復(fu)性(xing)時間(jian)。

4. 缺點(dian)：需(xu)要特定的(de)超(chao)濾(lv)設(she)備，操(cao)作(zuo)技(ji)術要求較高(gao)，且(qie)可能(neng)對蛋(dan)白(bai)造成(cheng)壹(yi)定的(de)壓力損傷。

四(si)、色(se)譜復性(xing)法

1. 凝(ning)膠過濾色(se)譜復性(xing)：

   - 原理：利用凝(ning)膠過濾色(se)譜柱根(gen)據(ju)分(fen)子大(da)小(xiao)進行(xing)分離(li)的(de)特性(xing)，讓(rang)變性(xing)的(de)蛋(dan)白(bai)在(zai)通過色(se)譜柱的(de)過程中逐步(bu)去(qu)除變性(xing)劑(ji)，同(tong)時避(bi)免(mian)分子間的(de)相(xiang)互(hu)作(zuo)用，實(shi)現復(fu)性(xing)。

   - 操作(zuo)步(bu)驟：將(jiang)變性(xing)的(de)蛋(dan)白(bai)溶(rong)液上(shang)樣到凝(ning)膠過濾色(se)譜柱上(shang)，用復(fu)性(xing)緩沖液(ye)進行(xing)洗脫(tuo)，收集蛋白(bai)峰(feng)。

   - 優點(dian)：可以在復(fu)性(xing)的(de)同(tong)時進(jin)行(xing)純化(hua)，減少(shao)後(hou)續的(de)操(cao)作(zuo)步(bu)驟。

   - 缺點(dian)：色(se)譜柱的(de)容(rong)量(liang)有限(xian)，不適(shi)合(he)處理(li)大(da)量(liang)的(de)蛋(dan)白(bai)樣品。

2. 離(li)子交(jiao)換(huan)色(se)譜復性(xing)：

   - 原理：通過離(li)子交(jiao)換(huan)色(se)譜柱與蛋白(bai)之(zhi)間(jian)的(de)靜(jing)電(dian)相互(hu)作(zuo)用，在(zai)特定的(de)離(li)子強度(du)和(he) pH 條(tiao)件(jian)下(xia)促(cu)進蛋(dan)白(bai)復(fu)性(xing)。

   - 操作(zuo)步(bu)驟：根(gen)據(ju)蛋(dan)白(bai)的(de)性(xing)質(zhi)選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)離(li)子交(jiao)換(huan)色(se)譜柱，調整上(shang)樣條(tiao)件(jian)和洗脫(tuo)條(tiao)件(jian)，使蛋(dan)白(bai)在(zai)色(se)譜柱上(shang)實(shi)現復(fu)性(xing)。

   - 優點(dian)：可以利用不(bu)同(tong)的(de)離(li)子交(jiao)換(huan)條(tiao)件(jian)來(lai)優化復(fu)性(xing)效果(guo)。

   - 缺點(dian)：需(xu)要對蛋(dan)白(bai)的(de)離(li)子性(xing)質(zhi)有(you)壹(yi)定的(de)了(le)解(jie)，操(cao)作(zuo)相(xiang)對復(fu)雜。

五、添加(jia)小(xiao)分子促(cu)進劑(ji)復(fu)性(xing)法

1. 原理：在復性(xing)緩沖液(ye)中添加(jia)壹(yi)些(xie)小(xiao)分子物質(zhi)，如(ru)精(jing)氨(an)酸(suan)、甘(gan)油(you)、聚(ju)乙二(er)醇等，這(zhe)些(xie)小(xiao)分子可以穩定(ding)蛋白(bai)的(de)結(jie)構(gou)，促(cu)進正確折(zhe)疊(die)，減少(shao)聚(ju)集。

2. 操作(zuo)步(bu)驟：

   - 根(gen)據(ju)蛋(dan)白(bai)的(de)特性(xing)選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)小(xiao)分子促(cu)進劑(ji)。

   - 將(jiang)小(xiao)分子促(cu)進劑(ji)加(jia)入(ru)到復性(xing)緩沖液(ye)中，調整其濃(nong)度(du)至合(he)適(shi)範圍(wei)。

   - 將(jiang)變性(xing)的(de)蛋(dan)白(bai)加(jia)入(ru)到含有小(xiao)分子促(cu)進劑(ji)的(de)復(fu)性(xing)緩沖液(ye)中進行(xing)復性(xing)。

3. 優點(dian)：可以提(ti)高(gao)復(fu)性(xing)效率(lv)，減少(shao)蛋(dan)白(bai)聚(ju)集。

4. 缺點(dian)：不同(tong)的(de)蛋(dan)白(bai)對小(xiao)分子促(cu)進劑(ji)的(de)響(xiang)應(ying)不(bu)同(tong)，需(xu)要進行(xing)優化篩選(xuan)。

六(liu)、分子伴(ban)侶輔助(zhu)復(fu)性(xing)法

1. 原理：利用分(fen)子伴(ban)侶蛋(dan)白(bai)與變性(xing)蛋(dan)白(bai)結(jie)合(he)，幫助(zhu)其正確折(zhe)疊(die)，防止聚(ju)集，在復性(xing)過程中起到(dao)輔助(zhu)作(zuo)用。

2. 操作(zuo)步(bu)驟：

   - 選擇(ze)合(he)適(shi)的(de)分(fen)子伴(ban)侶蛋(dan)白(bai)，如(ru)熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)（Hsp）等。

   - 將(jiang)分(fen)子伴(ban)侶蛋(dan)白(bai)與變性(xing)的(de)重(zhong)組(zu)蛋(dan)白(bai)共同(tong)孵(fu)育，在(zai)壹(yi)定(ding)條(tiao)件(jian)下(xia)促(cu)進蛋(dan)白(bai)復(fu)性(xing)。

   - 復性(xing)完成後(hou)，通過特定的(de)方(fang)法去除分子伴(ban)侶蛋(dan)白(bai)。

3. 優點(dian)：可以顯著(zhu)提(ti)高(gao)復(fu)性(xing)效率(lv)，尤其是(shi)對於(yu)壹(yi)些(xie)難(nan)以復性(xing)的(de)蛋(dan)白(bai)。

4. 缺點(dian)：分子伴(ban)侶蛋(dan)白(bai)的(de)制備和(he)去(qu)除過程相對復(fu)雜，成(cheng)本較高(gao)。

    天能-轉(zhuan)移電(dian)泳(yong)槽(cao)-VE-586 用來(lai)對少(shao)量(liang)核酸(suan)及(ji)蛋(dan)白(bai)質(zhi)樣品進行(xing)轉(zhuan)印的(de)裝置(zhi)，可(ke)同(tong)時轉(zhuan)印四(si)塊凝(ning)膠性(xing)能(neng)特點(dian)專用開(kai)啟(qi)式轉(zhuan)移膠(jiao)架(jia)，操作(zuo)方(fang)便創新設(she)計，可同(tong)時轉(zhuan)印四(si)塊凝(ning)膠電(dian)極架(jia)開(kai)孔設(she)計，電(dian)泳(yong)產(chan)熱(re)少(shao)，條(tiao)帶銳(rui)利(li)，應(ying)用用於(yu)Weterlot、Northerlot、Southerlot等(deng)，包(bao)括(kuo)配套儀(yi)器(qi)EPS-200/EPS-300/EPS-600電(dian)泳(yong)儀(yi)電(dian)源等。更(geng)多(duo)實(shi)驗室(shi)儀器(qi)、實(shi)驗耗材(cai)請(qing)進(jin)入(ru)蘇州阿爾法生物網站(zhan)進(jin)行(xing)了(le)解(jie)。