生(sheng)物反(fan)應器培(pei)養HEK293細胞的步驟(zhou)與(yu)方(fang)法(fa)

人(ren)類胚胎(tai)腎細胞（HEK293）是壹種(zhong)廣泛應用於(yu)生物醫學(xue)研(yan)究(jiu)的(de)重(zhong)要(yao)細胞系(xi)，尤其在重(zhong)組蛋白表達、病毒(du)包裝(zhuang)等領域(yu)具(ju)有顯(xian)著(zhu)優(you)勢。生物反(fan)應器作為壹種(zhong)模擬(ni)體(ti)內(nei)環境的體(ti)外培(pei)養系(xi)統(tong)，為HEK293細胞的規模化培養提供了有(you)力(li)支(zhi)持(chi)。本文將(jiang)詳細介紹(shao)生物反(fan)應器培(pei)養HEK293細胞的步驟(zhou)與(yu)方(fang)法(fa)。

二、生(sheng)物反(fan)應器培(pei)養HEK293細胞的步驟(zhou)

1. 準(zhun)備(bei)工作

（1）生物反(fan)應器選擇：根據實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選擇適合(he)的生(sheng)物反(fan)應器，如(ru)攪拌(ban)式(shi)生物反(fan)應器、氣(qi)升式(shi)生物反(fan)應器等。

（2）培養基配制(zhi)：選用適宜的HEK293細胞培養基，如DMEM、MEM等，添加適量(liang)的(de)血清(qing)、抗(kang)生素(su)等成分。

（3）細胞準(zhun)備(bei)：將(jiang)HEK293細胞從凍(dong)存管(guan)中(zhong)復(fu)蘇(su)，傳(chuan)代(dai)至(zhi)足夠(gou)的(de)數(shu)量(liang)，確(que)保(bao)細胞活(huo)力(li)在90%以上。

2. 種(zhong)子細胞接種(zhong)

（1）將生(sheng)物反(fan)應器內(nei)膽(dan)清(qing)洗(xi)幹凈，用70%酒精(jing)消毒，再用無(wu)菌(jun)水(shui)沖(chong)洗(xi)幹凈。

（2）將配制(zhi)好(hao)的(de)培養基加入(ru)生物反(fan)應器內(nei)膽(dan)，確(que)保(bao)無(wu)氣(qi)泡(pao)。

（3）將準(zhun)備(bei)好(hao)的(de)HEK293細胞懸液(ye)接種(zhong)至生(sheng)物反(fan)應器，接種(zhong)密度(du)壹般為2×10^6個(ge)/mL。

3. 生物反(fan)應器運(yun)行

（1）設置生(sheng)物反(fan)應器參(can)數(shu)：包括(kuo)溫(wen)度(du)（37℃）、pH（7.2-7.4）、溶(rong)氧(yang)（30-50%）、攪拌(ban)速(su)度（根(gen)據生物反(fan)應器型(xing)號和(he)細胞需(xu)求(qiu)調整(zheng)）等。

（2）實時監測：通(tong)過生(sheng)物反(fan)應器的(de)在線監測系(xi)統(tong)，實時觀察細胞生長狀(zhuang)況(kuang)、溶(rong)氧(yang)、pH等參(can)數(shu)，並(bing)根據(ju)實(shi)際(ji)情況(kuang)調(tiao)整(zheng)。

（3）補料(liao)：根(gen)據(ju)細胞生長情況(kuang)，定期補充新(xin)鮮培養基，以維持(chi)細胞生長所(suo)需(xu)的營(ying)養和(he)環境。

4. 細胞收獲

（1）當(dang)細胞密度達(da)到預(yu)期(qi)值（壹般為1-2×10^7個(ge)/mL）時，停止(zhi)攪拌(ban)，將細胞懸液(ye)從(cong)生(sheng)物反(fan)應器中(zhong)取出(chu)。

（2）使(shi)用離心機將細胞沈澱，去(qu)除(chu)上(shang)清(qing)液(ye)。

（3）根據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，對細胞進行凍(dong)存或進(jin)壹步處(chu)理。

三、生物反(fan)應器培(pei)養HEK293細胞的方法(fa)

1. 無(wu)血清(qing)培(pei)養法(fa)

無(wu)血清(qing)培(pei)養法(fa)是指在培養基中不添加血清(qing)，而(er)是使(shi)用替(ti)代(dai)物如血小(xiao)板(ban)裂(lie)解物、血清(qing)替(ti)代(dai)物等。這種(zhong)方法(fa)有(you)利(li)於(yu)提高(gao)重(zhong)組蛋白的純(chun)度(du)和(he)安全(quan)性(xing)。

2. 微載(zai)體(ti)培養法(fa)

微載(zai)體(ti)培養法(fa)是將細胞固(gu)定在微載體(ti)上，實(shi)現高密(mi)度(du)培養。這(zhe)種(zhong)方法(fa)有(you)利(li)於(yu)提高(gao)細胞生長密(mi)度(du)，降(jiang)低生產(chan)成本。

3. 氣升(sheng)式(shi)生物反(fan)應器培(pei)養法(fa)

氣升(sheng)式(shi)生物反(fan)應器通(tong)過氣(qi)體(ti)上升(sheng)帶(dai)動液(ye)體(ti)循(xun)環，實現細胞均(jun)勻(yun)生(sheng)長。這(zhe)種(zhong)方法(fa)具(ju)有較好(hao)的(de)氧(yang)氣(qi)傳(chuan)遞(di)效率和(he)剪(jian)切力小等優點。

4. 流加培養法(fa)

流加培養法(fa)是在生物反(fan)應器運(yun)行過程中(zhong)，根(gen)據(ju)細胞生長需(xu)求(qiu)，不斷(duan)補充新(xin)鮮培養基。這種(zhong)方法(fa)有(you)利(li)於(yu)維持(chi)細胞生長環境的穩(wen)定，提高(gao)細胞密度。

四(si)、總結

生物反(fan)應器培(pei)養HEK293細胞是實現細胞規模化生產(chan)的(de)關(guan)鍵技(ji)術。通(tong)過掌(zhang)握(wo)生物反(fan)應器培(pei)養HEK293細胞的步驟(zhou)和(he)方(fang)法(fa)，可(ke)以為生物醫學(xue)研(yan)究(jiu)和(he)生(sheng)物制(zhi)藥產(chan)業(ye)提供有力(li)支(zhi)持(chi)。在實際操作過程中(zhong)，應根據(ju)實驗(yan)需(xu)求(qiu)和(he)細胞特性(xing)，選擇合適的(de)培養方(fang)法(fa)，以實現高效(xiao)、穩(wen)定的細胞培養。

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