動物細(xi)胞培(pei)養(yang)方(fang)案(an)

動(dong)物細(xi)胞培(pei)養(yang)技術(shu)是生命科(ke)學研(yan)究(jiu)中(zhong)的(de)重(zhong)要工(gong)具，它為(wei)科學(xue)家(jia)們(men)提供(gong)了(le)壹(yi)個體外模擬生物體內細胞生長和分(fen)裂的(de)環(huan)境(jing)。通(tong)過動(dong)物細(xi)胞培(pei)養(yang)，研(yan)究(jiu)人(ren)員(yuan)可(ke)以(yi)深(shen)入(ru)研(yan)究(jiu)細(xi)胞(bao)的(de)生理(li)功(gong)能、代謝(xie)途徑以(yi)及疾(ji)病的(de)發(fa)生機(ji)制(zhi)，為(wei)人類的(de)健(jian)康(kang)和(he)福祉做出(chu)貢獻(xian)。本文將(jiang)介紹動物細(xi)胞培(pei)養(yang)的(de)程(cheng)序和(he)方(fang)案(an)。

1. 生長條件

動物細(xi)胞培(pei)養(yang)需(xu)要使(shi)用(yong)比(bi)微生物生長所用(yong)的(de)基本培(pei)養(yang)基更(geng)復雜、更(geng)具體的(de)特(te)定培(pei)養(yang)基。培(pei)養(yang)基中(zhong)重要的(de)基本成(cheng)分包(bao)括(kuo)無(wu)機鹽(yan)、氮源(yuan)、能量源(yuan)、維(wei)生素、脂肪及脂(zhi)溶性維(wei)生素、生長因(yin)子、激(ji)素等，有時(shi)還(hai)會(hui)添(tian)加(jia)pH緩(huan)沖(chong)系統、抗生素等。生長的(de)溫(wen)度(du)取決(jue)於(yu)細胞(bao)的(de)來(lai)源(yuan)，因(yin)為(wei)不同(tong)的(de)生物體需要不(bu)同(tong)的(de)溫(wen)度(du)來(lai)生長和分(fen)裂。溫(wen)血動物細(xi)胞培(pei)養(yang)的(de)最(zui)適溫(wen)度(du)為(wei)37℃，冷(leng)血動物的(de)生長溫(wen)度(du)為(wei)15℃-25℃。

2. 原(yuan)代細胞(bao)培(pei)養(yang)

原(yuan)代細胞(bao)培(pei)養(yang)物是(shi)利用(yong)無(wu)菌(jun)剃刀從(cong)器官(guan)中(zhong)取出(chu)的(de)新(xin)鮮(xian)組(zu)織(zhi)獲(huo)得的(de)。在(zai)某(mou)些(xie)情(qing)況(kuang)下(xia)，使(shi)用(yong)化學(xue)分解劑(ji)或(huo)蛋白(bai)水(shui)解(jie)酶去除細胞間(jian)質(zhi)。用(yong)緩沖(chong)液(ye)清洗(xi)獲得(de)的(de)細(xi)胞(bao)懸(xuan)浮(fu)液(ye)以去除蛋白水解(jie)酶(mei)。將(jiang)細胞(bao)懸浮(fu)液(ye)倒(dao)入(ru)平(ping)坦的(de)表面(mian)上(shang)，可(ke)以(yi)是培(pei)養(yang)容(rong)器或(huo)無(wu)菌(jun)培(pei)養(yang)皿(min)。將(jiang)能夠(gou)粘(zhan)附(fu)在(zai)容器底部的(de)細(xi)胞(bao)覆(fu)蓋(gai)在(zai)適當(dang)的(de)培(pei)養(yang)基中(zhong)並在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)孵育(yu)。

3. 細胞(bao)解凍

在(zai)隨(sui)後的(de)傳代培(pei)養(yang)中(zhong)，可(ke)能必(bi)須(xu)使(shi)用(yong)保存(cun)的(de)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)物。將(jiang)水浴(yu)加熱至(zhi) 37°C 的(de)溫(wen)度(du)，並對要接(jie)種細(xi)胞的(de)生長培(pei)養(yang)基進(jin)行加熱(re)。將(jiang)溫(wen)熱的(de)培(pei)養(yang)基加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)容(rong)器中(zhong)，然後將(jiang)裝有冷(leng)凍細(xi)胞(bao)的(de)瓶(ping)子放(fang)入(ru)水(shui)浴中(zhong)直(zhi)至解(jie)凍。解(jie)凍後，用(yong) 70% 酒精清洗(xi)孔的(de)外部(bu)。將(jiang)細胞(bao)懸浮(fu)液(ye)移(yi)入(ru)細(xi)胞培(pei)養(yang)容(rong)器中(zhong)，輕輕旋轉(zhuan)以(yi)混(hun)合(he)所有物質(zhi)。然後將(jiang)培(pei)養(yang)基在(zai)通(tong)常(chang)的(de)生長條件下(xia)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)。第(di)二天(tian)更(geng)換生長培(pei)養(yang)基。

4. 胰蛋白酶化(hua)細(xi)胞(bao)

胰蛋白酶消(xiao)化(hua)是(shi)利用(yong)蛋白(bai)水解酶(mei)將(jiang)粘(zhan)附(fu)細(xi)胞(bao)從(cong)培(pei)養(yang)容(rong)器表面(mian)分離(li)的(de)方(fang)法(fa)。當(dang)細(xi)胞要用(yong)於(yu)傳代、計(ji)數(shu)或(huo)其(qi)他(ta)目(mu)的(de)時(shi)，就會進(jin)行此(ci)操(cao)作(zuo)。除去培(pei)養(yang)基，回(hui)收(shou)細胞，然後用(yong)磷酸鹽(yan)緩(huan)沖(chong)液(ye)清洗(xi)細胞(bao)。將(jiang)溫(wen)熱的(de)胰蛋白酶-EDTA加(jia)入(ru)到(dao)容(rong)器中(zhong)，以覆(fu)蓋(gai)單(dan)層(ceng)細(xi)胞(bao)。可(ke)以(yi)搖動容器以確保單(dan)層(ceng)細(xi)胞(bao)被(bei)覆(fu)蓋(gai)。將(jiang)容器放入(ru) 37°C 的(de) CO2 培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)孵育(yu)1-3分鐘(zhong)。將(jiang)容器從(cong)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)取出(chu)，用(yong)手掌用(yong)力(li)敲(qiao)擊(ji)燒瓶的(de)側面(mian)，以幫(bang)助分(fen)離(li)。壹(yi)旦細(xi)胞被(bei)移(yi)除，它們就會被(bei)重新(xin)懸(xuan)浮(fu)在(zai)含有壹(yi)定量血清的(de)適當(dang)生長培(pei)養(yang)基中(zhong)。然後借(jie)助註(zhu)射(she)器針頭(tou)，通(tong)過破(po)壞細胞團(tuan)塊來(lai)分(fen)離(li)細(xi)胞(bao)，並進(jin)行相(xiang)應(ying)使(shi)用(yong)。

 5. 傳代培(pei)養(yang)

傳代培(pei)養(yang)是(shi)指將(jiang)原(yuan)代培(pei)養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)從(cong)培(pei)養(yang)容(rong)器表面(mian)分離(li)下(xia)來(lai)，重(zhong)新(xin)接(jie)種在(zai)新的(de)培(pei)養(yang)基中(zhong)，使(shi)其(qi)繼(ji)續生長和分(fen)裂的(de)過(guo)程(cheng)。傳代培(pei)養(yang)是(shi)動(dong)物細(xi)胞培(pei)養(yang)中(zhong)非常(chang)重要的(de)壹(yi)步(bu)，它(ta)使(shi)得研(yan)究(jiu)人(ren)員(yuan)能夠(gou)獲(huo)得大量的(de)細(xi)胞(bao)用(yong)於(yu)後續的(de)實(shi)驗(yan)研(yan)究(jiu)。

6. 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)

為(wei)了長期保(bao)存(cun)細(xi)胞(bao)，研(yan)究(jiu)人(ren)員(yuan)需(xu)要將(jiang)細胞(bao)進(jin)行凍存(cun)。細(xi)胞(bao)凍存(cun)是(shi)將(jiang)細胞(bao)置(zhi)於(yu)特定的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)中(zhong)，然後通(tong)過降(jiang)溫(wen)的(de)方(fang)式(shi)使(shi)細胞(bao)進(jin)入(ru)休(xiu)眠(mian)狀態，從(cong)而(er)在(zai)低(di)溫(wen)條件下(xia)長期保(bao)存(cun)細(xi)胞(bao)。凍存(cun)後的(de)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)在(zai)需要時(shi)進(jin)行解凍(dong)和(he)復蘇(su)，繼續進(jin)行培(pei)養(yang)和(he)實(shi)驗(yan)研(yan)究(jiu)。

 7. 細(xi)胞(bao)分(fen)選和(he)純化

在(zai)動物細(xi)胞培(pei)養(yang)過(guo)程(cheng)中(zhong)，為(wei)了獲(huo)得具(ju)有特(te)定表型的(de)細(xi)胞(bao)群(qun)體，研(yan)究(jiu)人(ren)員(yuan)需(xu)要進(jin)行細胞(bao)分(fen)選和(he)純化。細(xi)胞(bao)分選是(shi)通(tong)過特(te)定的(de)方(fang)法(fa)將(jiang)細胞(bao)按照(zhao)其(qi)表型或(huo)功能進(jin)行分離(li)的(de)過(guo)程(cheng)。而(er)細胞純化則(ze)是(shi)將(jiang)細胞(bao)分選後得(de)到(dao)的(de)細(xi)胞(bao)群(qun)體進(jin)壹(yi)步(bu)純(chun)化(hua)，以(yi)獲(huo)得(de)更(geng)純凈的(de)細(xi)胞(bao)亞(ya)群(qun)。

           蘇(su)州阿爾(er)法(fa)生物作(zuo)為(wei)楚(chu)怡(yi)發酵罐制(zhi)造(zao)聯盟(meng)供(gong)應(ying)商(shang)持(chi)續為(wei)客戶(hu)提供(gong)微生物發(fa)酵罐 、細胞(bao)生物反(fan)應(ying)器、玻(bo)璃生物反(fan)應(ying)器、壹(yi)次(ci)性生物反(fan)應(ying)器、細胞貼壁培(pei)養(yang)生物反(fan)應(ying)器、不銹(xiu)鋼發酵罐等中(zhong)小型發(fa)酵設備，這些(xie)實(shi)驗(yan)室(shi)儀(yi)器 廣(guang)泛(fan)應(ying)用(yong)於(yu)細胞(bao)規模擴增，疫(yi)苗生產(chan)、新藥(yao)開發(fa)、生物合(he)成(cheng)、發酵工(gong)程等領域(yu)。

    同(tong)時公(gong)司可(ke)承(cheng)接(jie)定制(zhi)200L以(yi)上(shang)發酵工(gong)程所用(yong)的(de)發(fa)酵罐及發(fa)酵設備，目(mu)前(qian)華(hua)東(dong)地區(qu)市場累計(ji)用(yong)戶(hu)超530+，行業滿(man)意(yi)率達 96.5%以上(shang)。

   蘇(su)州阿爾(er)法(fa)生物還(hai)同時(shi)提(ti)供(gong)以(yi)下(xia)產品(pin)與(yu)服(fu)務(wu)：

    HyCyte™ 幹細胞、原(yuan)代細胞(bao)、CHO細胞(bao)、HEK29細胞(bao)，細(xi)胞(bao)生長因(yin)子,基質(zhi)膠(jiao)，三系誘(you)導培(pei)養(yang)試(shi)劑(ji)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基、基因(yin)編(bian)輯試(shi)劑(ji)盒、基因(yin)編(bian)輯細(xi)胞(bao)，細胞(bao)株現(xian)貨、細(xi)胞專用(yong)血清等(deng)細(xi)胞生物學(xue)試劑(ji)。

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