如(ru)何通(tong)過(guo)多(duo)層細(xi)胞工(gong)廠進(jin)行(xing)人多(duo)能(neng)幹細(xi)胞hPSC的(de)2D培(pei)養(yang)

人多(duo)能(neng)幹細(xi)胞（hPSC）具(ju)有自(zi)我(wo)更(geng)新和分化(hua)為(wei)各(ge)種細(xi)胞類(lei)型的(de)潛(qian)能(neng)，為(wei)醫(yi)學、藥物研發和生(sheng)命(ming)科(ke)學研究提(ti)供了(le)不(bu)少(shao)貢獻(xian)。近(jin)年來，隨(sui)著(zhe)生(sheng)物技術的(de)發展，hPSC的(de)培(pei)養(yang)技術不(bu)斷(duan)優(you)化(hua)，其中(zhong)多(duo)層細(xi)胞工(gong)廠作為(wei)壹(yi)種高(gao)效(xiao)的(de)2D培(pei)養(yang)方(fang)法(fa)，逐漸(jian)受(shou)到研究者的(de)關(guan)註(zhu)。本文將(jiang)為(wei)您揭秘如(ru)何通(tong)過(guo)多(duo)層細(xi)胞工(gong)廠進(jin)行(xing)hPSC的(de)2D培(pei)養(yang)。

壹、多(duo)層細(xi)胞工(gong)廠的(de)優(you)勢

1. 高(gao)密(mi)度培(pei)養(yang)：多(duo)層細(xi)胞工(gong)廠采用層疊(die)式(shi)設(she)計(ji)，可(ke)充分利(li)用(yong)空間，實(shi)現細(xi)胞的(de)高(gao)密(mi)度培(pei)養(yang)，提(ti)高(gao)產(chan)量。

2. 易於(yu)操作：細(xi)胞工(gong)廠的(de)操作簡便，便(bian)於(yu)規(gui)模(mo)化(hua)生(sheng)產(chan)。

3. 條件(jian)均(jun)壹：細(xi)胞工(gong)廠內環(huan)境(jing)穩(wen)定，有利(li)於(yu)細(xi)胞生(sheng)長(chang)和分化(hua)。

4. 產(chan)量可(ke)控(kong)：通(tong)過(guo)調整細(xi)胞工(gong)廠的(de)層數(shu)，可(ke)輕(qing)松(song)實(shi)現產(chan)量的(de)調控。

二、如(ru)何通(tong)過(guo)多(duo)層細(xi)胞工(gong)廠進(jin)行(xing)hPSC的(de)2D培(pei)養(yang)

1. 細(xi)胞接(jie)種

將(jiang)hPSC接(jie)種到預先處理(li)過的(de)細(xi)胞工(gong)廠中(zhong)，確(que)保細(xi)胞均(jun)勻(yun)分布(bu)。接(jie)種密(mi)度可(ke)根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需求(qiu)進(jin)行(xing)調整。

2. 日(ri)常培(pei)養(yang)

接(jie)種後(hou)第(di)1、3和4/5天進(jin)行(xing)補料，監(jian)測配(pei)套(tao)燒(shao)瓶(ping)以(yi)確(que)定最佳收(shou)獲日(ri)期(qi)（≥ 90%匯合(he)度）。具(ju)體(ti)操作如(ru)下(xia)：

（1）將(jiang)廢培(pei)養(yang)基(ji)倒(dao)入(ru)廢(fei)液(ye)瓶(ping)中(zhong)，更(geng)換新鮮培(pei)養(yang)基(ji)。

（2）更(geng)換培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)放回(hui)培(pei)養(yang)箱(xiang)。

3. 收獲細(xi)胞

當(dang)配(pei)套(tao)燒(shao)瓶(ping)匯合(he)度達(da)到90 - 95％時（接(jie)種後(hou)第(di)5 - 6天）收(shou)獲細(xi)胞工(gong)廠的(de)hPSC。具體(ti)步驟(zhou)如(ru)下(xia)：

（1）將(jiang)用過(guo)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)倒(dao)入(ru)廢(fei)液(ye)瓶(ping)中(zhong)。

（2）用(yong)200 mL PBS沖洗細(xi)胞工(gong)廠。

（3）添(tian)加(jia)200 mL TrypLE™ Express或(huo)0.25%胰蛋白酶(mei)-EDTA。

（4）37°C孵育8 - 10分鐘(zhong)。

（5）將(jiang)200 mL ACF酶(mei)抑制(zhi)溶液(ye)或(huo)TeSR™-AOF添(tian)加(jia)到燒(shao)瓶(ping)中(zhong)，混(hun)勻(yun)後(hou)倒(dao)入(ru)無菌1 L瓶中(zhong)。

（6）用(yong)400 mL無菌PBS沖洗細(xi)胞工(gong)廠，倒(dao)入(ru)同(tong)壹無菌收集(ji)瓶(ping)中(zhong)。

（7）將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)浮(fu)液分裝(zhuang)到離(li)心管(guan)中(zhong)，離(li)心後(hou)去除殘(can)留(liu)的(de)解(jie)離(li)試劑，重(zhong)新懸浮(fu)並(bing)匯集(ji)細(xi)胞。

三、實(shi)驗(yan)結果(guo)

1. 未(wei)分化(hua)狀(zhuang)態(tai)的(de)標(biao)誌物表達(da)

從(cong)細(xi)胞工(gong)廠收獲的(de)hPSC表達(da)了未(wei)分化(hua)狀(zhuang)態(tai)的(de)標(biao)誌物，如(ru)OCT-4和TRA-1-60，超過90%的(de)細(xi)胞均(jun)表達(da)這(zhe)兩(liang)種標(biao)記物。

2. 冷凍(dong)後(hou)仍保持(chi)高(gao)活(huo)力並(bing)有效(xiao)附著(zhe)

從細(xi)胞工(gong)廠收獲的(de)單(dan)細(xi)胞hPSC在(zai)-135°C的(de)FreSR™-S中(zhong)冷(leng)凍(dong)後(hou)，仍保持(chi)高(gao)活(huo)力並(bing)有效(xiao)附著(zhe)。

3. 三譜(pu)系(xi)分化(hua)

從(cong)細(xi)胞工(gong)廠收獲的(de)hPSC具有三(san)譜(pu)系(xi)分化(hua)能(neng)力，可(ke)分化(hua)為(wei)定(ding)形內胚(pei)層、早(zao)期(qi)中(zhong)胚(pei)層和神(shen)經祖細(xi)胞。

4. 保持(chi)正常核型

從(cong)細(xi)胞工(gong)廠收獲的(de)hPSC保持(chi)正常核型，擴(kuo)大(da)培(pei)養(yang)規(gui)模(mo)後(hou)，細(xi)胞未(wei)檢測(ce)到額外的(de)拷(kao)貝(bei)數(shu)變(bian)異。

通(tong)過(guo)本文的(de)介紹(shao)，相(xiang)信您已對(dui)如(ru)何通(tong)過(guo)多(duo)層細(xi)胞工(gong)廠進(jin)行(xing)hPSC的(de)2D培(pei)養(yang)有了(le)深(shen)入(ru)了(le)解(jie)。多(duo)層細(xi)胞工(gong)廠作為(wei)壹(yi)種高(gao)效(xiao)的(de)2D培(pei)養(yang)方(fang)法(fa)，為(wei)hPSC的(de)研究和應用提(ti)供了(le)有力支(zhi)持(chi)。在(zai)今(jin)後(hou)的(de)研究中(zhong)，多(duo)層細(xi)胞工(gong)廠將(jiang)繼(ji)續發揮其優(you)勢，助(zhu)力hPSC領(ling)域的(de)發展。

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