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人(ren)骨(gu)髓(sui)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao)用什麽(me)培養基培(pei)養?
更新(xin)時間:2024-07-09
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人(ren)骨(gu)髓(sui)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao)(Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,簡(jian)稱 HBMSCs)是壹種(zhong)具(ju)有(you)自我(wo)更新(xin)和(he)多(duo)向分化潛(qian)能的成(cheng)體(ti)幹(gan)細胞(bao),可(ke)以(yi)分化成(cheng)多種(zhong)類(lei)型(xing)的細胞(bao),如(ru)骨(gu)細(xi)胞(bao)、軟骨(gu)細(xi)胞(bao)、脂肪細(xi)胞(bao)等。在組(zu)織工(gong)程(cheng)、再(zai)生(sheng)醫(yi)學以(yi)及(ji)Cell Therapy等領域(yu)具有(you)廣泛的應用(yong)前(qian)景。為了獲得高(gao)質(zhi)量的人(ren)骨(gu)髓(sui)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao),選擇合(he)適的培養基至關重(zhong)要(yao)。人(ren)骨(gu)髓(sui)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao)用什麽(me)培養基培(pei)養?

壹(yi)、人(ren)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao)培養基的選擇
1. 無(wu)血(xue)清(qing)培養基
無(wu)血(xue)清(qing)培養基是(shi)指(zhi)不含有(you)血(xue)清(qing)的培養基,通(tong)過添(tian)加適量的生長(chang)因子(zi)、激(ji)素和(he)營養物質(zhi)等,模擬生(sheng)物體(ti)內(nei)的生長(chang)環境,從(cong)而實(shi)現(xian)細(xi)胞(bao)的生長(chang)和(he)繁(fan)殖(zhi)。無血(xue)清(qing)培養基具(ju)有(you)以(yi)下(xia)優點:
(1)避(bi)免(mian)血(xue)清(qing)中(zhong)病原微生物的傳播(bo),降(jiang)低(di)細胞培(pei)養過程(cheng)中(zhong)的汙染風險(xian)。
(2)避(bi)免(mian)血(xue)清(qing)中(zhong)不同批次(ci)間(jian)的差異,提高(gao)實(shi)驗的可(ke)重(zhong)復性。
(3)有(you)利於(yu)細胞(bao)產品(pin)的臨床(chuang)應用(yong),減(jian)少血(xue)清(qing)中(zhong)潛(qian)在過敏(min)原的攝入(ru)。
2. 含血(xue)清(qing)培養基
含(han)血(xue)清(qing)培養基是(shi)指(zhi)含有(you)血(xue)清(qing)的培養基,血(xue)清(qing)中(zhong)含有(you)豐富(fu)的生長(chang)因子(zi)、激(ji)素和(he)營養物質(zhi),可(ke)以(yi)滿(man)足細胞生長(chang)的需求(qiu)。含血(xue)清(qing)培養基具(ju)有(you)以(yi)下(xia)優點:
(1)細胞生長(chang)速度快(kuai),易於(yu)獲得大量(liang)細(xi)胞。
(2)細胞(bao)生長(chang)狀態穩定,易於(yu)培養。
但含血(xue)清(qing)培養基也存在壹(yi)定的缺(que)點,如(ru)血(xue)清(qing)來(lai)源(yuan)不穩定、病(bing)原微生物汙(wu)染風險(xian)、不同批次(ci)間(jian)差異較大(da)等。因此(ci),在選擇培(pei)養基時,可(ke)根據(ju)實(shi)驗需(xu)求(qiu)和(he)細(xi)胞(bao)特(te)性進(jin)行綜(zong)合(he)考慮。

二、人(ren)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao)培養基的培養方法(fa)
1. 細(xi)胞接種(zhong)
將(jiang)凍存的HBMSCs從(cong)液氮中(zhong)取(qu)出(chu),迅速放(fang)入(ru)37℃水浴(yu)中(zhong)解凍(dong)。解凍(dong)後,將(jiang)細胞懸液(ye)離心(xin),去(qu)除(chu)凍(dong)存液(ye),用預(yu)熱的培養基洗滌(di)細胞(bao)兩次(ci)。最後,用(yong)適量的培養基重(zhong)懸細(xi)胞,調整(zheng)細胞(bao)密度,接種(zhong)到(dao)培養瓶中(zhong)。
2. 培養條件
將(jiang)接種(zhong)好(hao)的細胞(bao)放(fang)入(ru)37℃、5% CO2的培養箱中(zhong),靜(jing)置培(pei)養。根據細(xi)胞(bao)生長(chang)情況,每(mei)隔2-3天(tian)更換壹次(ci)培(pei)養基。
3. 細(xi)胞(bao)傳代
當(dang)細胞生長(chang)至80%-90%匯(hui)合(he)時,進(jin)行細胞傳代。首(shou)先(xian),用(yong)PBS洗滌(di)細胞(bao)兩次(ci),去(qu)除殘(can)留的培養基。然後,用(yong)胰酶(mei)消(xiao)化細(xi)胞,待細胞間隙(xi)增大、細胞變(bian)圓時,加入(ru)含血(xue)清(qing)的培養基終(zhong)止消(xiao)化。最後,將(jiang)細胞懸液(ye)離心(xin),去(qu)除(chu)胰酶(mei),用(yong)適量的培養基重(zhong)懸細(xi)胞,進(jin)行傳代培養。
4. 細胞凍(dong)存
將(jiang)生長(chang)狀態良(liang)好(hao)的細胞(bao)用(yong)胰酶(mei)消(xiao)化,離心(xin)後去(qu)除(chu)胰酶(mei),用(yong)凍(dong)存液(ye)重(zhong)懸細(xi)胞。將(jiang)細胞懸液(ye)分裝(zhuang)到(dao)凍存管中(zhong),放入(ru)-80℃冰箱過夜,次(ci)日(ri)轉移(yi)至液(ye)氮(dan)中(zhong)長(chang)期保(bao)存。

三、人(ren)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao)培養基的應用(yong)
1. 組(zu)織工(gong)程(cheng)
HBMSCs具有(you)多向分化潛(qian)能,可(ke)以(yi)分化為骨(gu)細(xi)胞(bao)、軟骨(gu)細(xi)胞(bao)、脂肪細(xi)胞(bao)等。在組(zu)織工(gong)程(cheng)中(zhong),將(jiang)HBMSCs與生物材(cai)料(liao)結合(he),可(ke)以(yi)構(gou)建(jian)具(ju)有(you)生物活(huo)性的組織,如(ru)骨(gu)組(zu)織、軟骨(gu)組(zu)織等(deng)。
2. 再(zai)生(sheng)醫(yi)學
HBMSCs可(ke)以(yi)參(can)與組織的損傷修復(fu),通過細胞移(yi)植(zhi)或局部(bu)註(zhu)射等方法(fa),將(jiang)HBMSCs應用(yong)於(yu)臨床(chuang)治療(liao),如(ru)骨(gu)損(sun)傷、軟骨(gu)損(sun)傷、心(xin)肌(ji)梗(geng)死等(deng)疾(ji)病(bing)。
3. Cell Therapy
4. HBMSCs具有(you)免(mian)疫調節(jie)作用,可(ke)以(yi)用(yong)於(yu)Cell Therapy,如(ru)移(yi)植(zhi)物抗(kang)宿(xiu)主病(GVHD)、系(xi)統性紅(hong)斑狼瘡(SLE)等(deng)。此外(wai),HBMSCs還可(ke)以(yi)用(yong)於(yu)治療(liao)神(shen)經系統(tong)疾(ji)病(bing)、肝臟(zang)疾(ji)病(bing)等。
人(ren)間(jian)充質(zhi)幹(gan)細胞(bao)培養基的選擇和(he)培(pei)養方法(fa)對(dui)HBMSCs的研(yan)究(jiu)和(he)應用(yong)具(ju)有(you)重(zhong)要(yao)意(yi)義。合(he)適的培養基可(ke)以(yi)保(bao)證細胞的高(gao)質(zhi)量生長(chang),為後續實(shi)驗和(he)應用(yong)提供(gong)可(ke)靠(kao)的基礎(chu)。
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