蛋白(bai)純(chun)化(hua)親和層(ceng)析(xi)原理

下圖(tu)中圓(yuan)球表示(shi)載體(ti),球上黑色(se)箭(jian)頭表示(shi)配基。當(dang)各(ge)種(zhong)不同(tong)功(gong)能(neng)的高分(fen)子(zi)物質(zhi)(分別以方(fang)塊、半(ban)圓(yuan)和(he)三角(jiao)缺(que)口(kou)來表示(shi)配基結合(he)部(bu)位)通(tong)過(guo)時,只(zhi)有帶三(san)角(jiao)缺(que)口(kou)的高(gao)分於(yu)物質能(neng)與(yu)固(gu)相(xiang)上的(de)配基專壹(yi)結(jie)合(he)，其(qi)它高(gao)分子(zi)物質(zhi)則不受(shou)阻(zu)礙(ai)地流(liu)出，然後改變(bian)洗(xi)脫(tuo)條(tiao)件使分離(li)目(mu)的物解離(li)而(er)洗脫下來。

(6)對(dui)酶(mei)及微(wei)生物侵蝕穩(wen)定(ding)，價格合理。

2，蛋白(bai)純(chun)化(hua)親和層(ceng)析(xi)載體(ti)簡介(jie)

三，親和吸(xi)附(fu)和洗(xi)脫(tuo)

   純(chun)化(hua)蛋白(bai)質(zhi)的親和層(ceng)析(xi)基本(ben)用(yong)柱法。在上柱時應選(xuan)擇配基和目(mu)的(de)物(wu)之(zhi)間作用(yong)的離(li)子(zi)強度(du)和pH組(zu)成(cheng),使最(zui)有利(li)於(yu)形成(cheng)親和絡(luo)合物(wu)，壹(yi)般(ban)則選(xuan)取(qu)中(zhong)性(xing)pH作(zuo)為吸(xi)附(fu)條(tiao)件。樣品應溶於(yu)親和層(ceng)析(xi)柱的(de)平(ping)衡緩(huan)沖液中(zhong),或(huo)用(yong)平(ping)衡緩(huan)沖液進(jin)行透析(xi)。上柱速度盡(jin)可(ke)能(neng)慢(man)，對(dui)溫(wen)度(du)不敏(min)感(gan)的物(wu)質(zhi)，室溫(wen)純(chun)化(hua)即(ji)可(ke)；對(dui)溫(wen)度(du)敏(min)感(gan)的物(wu)質(zhi)，可以采(cai)用(yong)在4℃下(xia)純(chun)化(hua)，通(tong)常的親和層(ceng)析(xi)圖(tu)譜(pu)如下圖(tu)。

     樣品上柱後分離(li)目(mu)的物先(xian)緊密(mi)地吸(xi)附(fu)在親和柱上,用(yong)平(ping)衡緩(huan)沖液洗(xi)滌時層(ceng)析(xi)譜(pu)上出現第壹(yi)個(ge)雜蛋白(bai)的(de)峰(feng)。繼(ji)續(xu)用(yong)大(da)量(liang)平(ping)衡緩(huan)沖液充分洗(xi)滌，必要(yao)時用(yong)不同(tong)緩(huan)沖液洗(xi)滌以除去(qu)非專壹(yi)吸(xi)附(fu)的雜質,使(shi)柱上只(zhi)留下(xia)專壹(yi)吸(xi)附(fu)的目(mu)的(de)物(wu)。然後改變(bian)緩(huan)沖液，要(yao)求(qiu)選(xuan)擇能(neng)減弱(ruo)純(chun)化(hua)目的(de)物(wu)與(yu)親和吸(xi)附(fu)劑之(zhi)間吸(xi)附(fu)力(li)的(de)條(tiao)件,使絡(luo)合物(wu)解離(li)洗(xi)出，圖(tu)譜(pu)上出現第二(er)個(ge)峰(feng)。壹(yi)般(ban)洗脫(tuo)方(fang)法是改(gai)變(bian)緩(huan)沖液的(de)pH，改變(bian)離(li)子(zi)強度(du)或(huo)同時改(gai)變(bian)兩者(zhe)。洗脫(tuo)蛋白(bai)質(zhi)大(da)多數用(yong)0.1mol/L稀(xi)醋酸或(huo)0.01mol/L稀(xi)鹽酸，如果(guo)目的(de)物(wu)會(hui)被酸破(po)壞(huai)，可使(shi)用(yong)0.1mol/L氫氧(yang)化(hua)銨洗(xi)脫(tuo)。蛋白(bai)質(zhi)洗出後應立刻中和(he)、稀(xi)釋(shi)透(tou)析(xi)、重折疊(die)為(wei)天然結構(gou)恢(hui)復蛋白(bai)質(zhi)活(huo)性。

      除(chu)改(gai)變(bian)緩(huan)沖液pH作(zuo)為洗(xi)脫(tuo)方(fang)法以外，尚(shang)有用(yong)可溶(rong)性配基作競(jing)爭(zheng)性(xing)洗(xi)脫。例如(ru)用(yong)較(jiao)高(gao)濃度的(de)抑(yi)制(zhi)劑、輔(fu)酶(mei)或(huo)底物(wu),競爭(zheng)洗(xi)脫(tuo)酶(mei)。用(yong)各種(zhong)糖(tang)或(huo)低(di)聚(ju)糖(tang)苷(gan)從固(gu)定(ding)化(hua)的植(zhi)物(wu)凝(ning)集(ji)素親和吸(xi)附(fu)系(xi)統(tong)上洗(xi)脫專壹(yi)吸(xi)附(fu)的糖(tang)蛋白(bai)目(mu)的物。用(yong)這類(lei)洗(xi)脫劑的(de)優(you)點還(hai)在於它又(you)壹(yi)次地利(li)用(yong)了(le)生物專壹(yi)性(xing)。但這種(zhong)洗脫(tuo)方(fang)法所得(de)蛋白(bai)質(zhi)溶液往(wang)往(wang)較(jiao)稀(xi)，並含(han)有可溶(rong)性(xing)洗(xi)脫(tuo)劑，這可(ke)以用(yong)透析(xi)和凝(ning)膠(jiao)過(guo)濾(lv)法除去(qu)。有些(xie)抗原(yuan)和(he)抗體(ti)結(jie)合力(li)特(te)別強(qiang)，上述(shu)方(fang)法有時尚(shang)不能(neng)洗脫則可試用(yong)鹽酸胍(gua)、尿素等(deng)蛋白(bai)促溶(rong)劑(ji)作(zuo)為洗(xi)脫(tuo)劑，洗(xi)脫(tuo)的(de)蛋白(bai)在(zai)適當(dang)處(chu)理後能(neng)恢(hui)復活(huo)力(li)者(zhe)才適(shi)用(yong)。當(dang)分(fen)離(li)目(mu)的物洗脫下(xia)來後可連(lian)續(xu)使用(yong)大(da)量(liang)洗脫(tuo)液洗滌親和柱，再(zai)用(yong)平(ping)衡緩(huan)沖液使(shi)親和柱充分平(ping)衡，經過(guo)這樣(yang)處(chu)理，親和柱就(jiu)可以重復使用(yong)。

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