使(shi)用CD4磁(ci)珠進(jin)行細(xi)胞(bao)磁(ci)珠分(fen)選的方(fang)法

CD4 磁(ci)珠是(shi)壹種(zhong)用於對(dui)細胞(bao)進行磁(ci)性(xing)標記的工具，可以(yi)有效地(di)分(fen)離(li)和(he)純(chun)化CD4+細(xi)胞(bao)。該(gai)方(fang)法具有(you)高磁(ci)珠結合(he)力，操(cao)作(zuo)簡(jian)便(bian)快(kuai)捷，能夠(gou)獲(huo)得高純(chun)度(du)、高得率(lv)和(he)高活率(lv)的CD4+細胞。 使(shi)用CD4磁(ci)珠進(jin)行磁(ci)珠分(fen)選的方(fang)法如(ru)下(xia)：

壹、樣本準備

1. 處理(li)抗凝的外周血(xue)液(ye): 使(shi)用密(mi)度(du)梯度(du)離(li)心(xin)法(fa)分(fen)離(li)外周血(xue)單核細胞(bao)(PBMC)。將外周血(xue)液(ye)樣本緩慢均勻(yun)地(di)加入離(li)心(xin)管中，疊加上相同體積(ji)的離(li)心(xin)液(ye)。以1000g的速度離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)。將上清液(ye)去除(chu)，並輕輕(qing)將PBMC層轉(zhuan)移(yi)至(zhi)新的離(li)心(xin)管中。添加適量(liang)的緩沖液(ye)使(shi)得體(ti)積增(zeng)加至(zhi)所(suo)需的體積。

2. 處(chu)理(li)組織: 使(shi)用標準的方(fang)法制(zhi)備組織的單細胞(bao)懸(xuan)浮液(ye)。先(xian)將組織切碎並轉(zhuan)移(yi)到含(han)有(you)蛋白(bai)酶等消(xiao)化酶(mei)的緩沖液(ye)中。根據實(shi)驗(yan)需求(qiu)，選(xuan)擇合(he)適的消化時(shi)間和溫度(du)。消(xiao)化完(wan)畢後(hou)，將組織塊過(guo)濾(lv)去(qu)除(chu)，並用緩沖液(ye)洗(xi)滌(di)細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

二(er)、磁(ci)珠標記

1. 細胞計數(shu): 使(shi)用細胞計數(shu)儀準(zhun)確計算細(xi)胞數(shu)量。

2. 離(li)心(xin): 將細胞離(li)心(xin)300g，離(li)心(xin)時(shi)間為10分(fen)鐘(zhong)，以(yi)去(qu)除(chu)上清液(ye)。

3. 重(zhong)懸: 對(dui)於每1億細(xi)胞，使(shi)用80μL緩沖液(ye)將細胞重(zhong)懸。

4. 磁(ci)珠添加: 對(dui)於每1億細(xi)胞，使(shi)用20μL的CD4磁(ci)珠將其加入細胞懸(xuan)液(ye)中。輕輕混合(he)使(shi)磁(ci)珠均勻(yun)分(fen)散(san)。

5. 孵育: 將細胞懸(xuan)液(ye)和磁(ci)珠混合(he)物(wu)在(zai)2-8℃的環境(jing)中冰上或冰箱(xiang)中孵育15分(fen)鐘(zhong)。如(ru)果在(zai)冰上孵育，需要(yao)延長孵育時間。這壹步(bu)驟(zhou)是(shi)為了讓(rang)CD4磁(ci)珠與(yu)目標細胞結合(he)。

6. (可選(xuan))染(ran)色抗體(ti): 如(ru)果需要(yao)，可以(yi)加入熒(ying)光(guang)偶聯的CD4抗體(ti)。在(zai)2-8℃的環境(jing)中避(bi)光(guang)孵育5分(fen)鐘(zhong)。

7. 洗(xi)滌(di): 對(dui)於每1億細(xi)胞，加入1-2mL緩沖液(ye)，並使(shi)用300g的速度離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)。去(qu)除(chu)上清液(ye)。

8. 細胞(bao)重(zhong)懸: 使(shi)用500μL緩沖液(ye)將細胞沈(chen)澱(dian)重(zhong)懸，並輕輕(qing)混合(he)，使(shi)細(xi)胞(bao)均勻(yun)懸(xuan)浮。

三(san)、磁(ci)性(xing)分(fen)選

1. 放(fang)置分(fen)選柱: 將分(fen)選柱放(fang)置在(zai)分(fen)選器的磁(ci)場中。

2. 分(fen)選柱濕潤: 將適量的緩沖液(ye)加入分(fen)選柱中，充分(fen)濕潤整(zheng)個(ge)分(fen)選柱的內(nei)部表(biao)面。對(dui)於xM規(gui)格的分(fen)選柱，加入500μL緩沖液(ye);對(dui)於xL規(gui)格的分(fen)選柱，加入3mL緩沖液(ye)。

3. 加入細胞懸(xuan)液(ye): 將細胞懸(xuan)液(ye)緩慢(man)地(di)加入分(fen)選柱中，確保(bao)細(xi)胞均勻(yun)分(fen)布在(zai)整(zheng)個(ge)分(fen)選柱中。

4. 分(fen)選: CD4+細胞與(yu)磁(ci)珠結合(he)，被(bei)吸(xi)附(fu)在(zai)分(fen)選柱上，未(wei)標記的細胞會順(shun)著(zhe)緩沖液(ye)流(liu)下(xia)來(lai)。加入適量的緩沖液(ye)，直(zhi)至(zhi)所(suo)有液(ye)體通(tong)過(guo)分(fen)選柱。三(san)次洗(xi)滌(di)，每次加入適量的緩沖液(ye)，等待(dai)液(ye)體全(quan)部(bu)流(liu)盡(jin)。

5. 收(shou)集(ji)未(wei)標記細胞: 洗(xi)滌(di)後(hou)的流(liu)出(chu)物(wu)中包含(han)未(wei)標記的細胞。收(shou)集(ji)這(zhe)部分(fen)細胞作(zuo)為未(wei)標記細胞。(對(dui)於xM規(gui)格分(fen)選柱，收(shou)集(ji)3次500μL的流(liu)出(chu)物(wu);對(dui)於xL規(gui)格分(fen)選柱，收(shou)集(ji)3次3mL的流(liu)出(chu)物(wu))

6. 收(shou)集(ji)目的細胞: 將分(fen)選柱從分(fen)選器中取出，並將其放(fang)在(zai)合(he)適的收(shou)集(ji)管上。加入適量的緩沖液(ye)到分(fen)選柱中，迅(xun)速用塞(sai)子推下(xia)，收(shou)集(ji)洗(xi)脫出(chu)的磁(ci)性(xing)標記的CD4+細胞。對(dui)於xM規(gui)格分(fen)選柱，加入1mL緩沖液(ye);對(dui)於xL規(gui)格分(fen)選柱，加入5mL緩沖液(ye)。

7. (可選(xuan))進壹步(bu)富集(ji): 為了提高標記細胞的純(chun)度(du)，可以(yi)將洗(xi)脫的部分(fen)再次進(jin)行磁(ci)性(xing)分(fen)選。使(shi)用新的分(fen)選柱，重(zhong)復步(bu)驟(zhou)1至(zhi)6中描述的磁(ci)性(xing)分(fen)選過(guo)程。

以上就(jiu)是(shi)使(shi)用CD4磁(ci)珠進(jin)行細(xi)胞(bao)磁(ci)性(xing)分(fen)選的詳細操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)。請註意在(zai)操(cao)作(zuo)過(guo)程中保(bao)持(chi)環境(jing)的清潔和(he)無(wu)菌，並避(bi)免(mian)磁(ci)珠暴(bao)露(lu)在(zai)強(qiang)磁(ci)場之(zhi)外。

 註意事項(xiang)：

1. 磁(ci)珠應(ying)在(zai)2-8℃的條件下(xia)避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)，不(bu)得冷凍。

2.  除(chu)了(le)CD4磁(ci)珠，我們(men)公司還提供(gong)SophMag®手(shou)動(dong)磁(ci)分(fen)選套(tao)裝(zhuang)，可以(yi)進壹步(bu)提(ti)高磁(ci)分(fen)選效果。搭配(pei)使(shi)用，可以(yi)獲得較(jiao)好(hao)的分(fen)選結果。

CD4磁(ci)珠是(shi)壹種(zhong)方(fang)便快(kuai)捷、高效純(chun)化CD4+細(xi)胞(bao)的工具，適(shi)用於細胞分(fen)選和純(chun)化等實(shi)驗(yan)。無論是(shi)在(zai)科研(yan)還是(shi)臨床(chuang)應用中，都具有(you)廣(guang)泛(fan)的應用。需要(yao)了解更多(duo)細胞(bao)分(fen)選儀、細(xi)胞(bao)分(fen)選磁(ci)珠等相(xiang)關(guan)產(chan)品(pin)請進(jin)入蘇州阿(e)爾法(fa)生物(wu)實(shi)驗(yan)器材(cai)進行了(le)解和咨詢(xun)。