幾種(zhong)蛋白質測定方法比(bi)較

 蛋白質是生命(ming)體(ti)中(zhong)基本的分子(zi)之(zhi)壹(yi)。它(ta)們在(zai)細胞結構和(he)功(gong)能的構建(jian)中(zhong)起著關鍵(jian)的作(zuo)用，同(tong)時(shi)還(hai)參與(yu)調節代謝(xie)、傳遞(di)信(xin)息(xi)和(he)維持生(sheng)理(li)功能等(deng)重(zhong)要過程。因(yin)此，了解(jie)蛋白質的含(han)量對(dui)於(yu)研(yan)究(jiu)細胞生物(wu)學(xue)、生理(li)學(xue)和醫(yi)學(xue)研(yan)究(jiu)等(deng)方面(mian)具有(you)重大意義(yi)。蛋白質測定是實驗室中(zhong)常(chang)見的分析(xi)任(ren)務(wu)之(zhi)壹(yi)，下(xia)文列舉壹些常(chang)用的蛋白質測定方法如(ru)紫(zi)外(wai)線(xian)吸(xi)收法、顯色(se)法和(he)比(bi)色(se)法等(deng)蛋白質測定方法比(bi)較。

壹、紫(zi)外(wai)線(xian)吸(xi)收法

紫(zi)外(wai)線(xian)吸(xi)收法是(shi)壹種(zhong)常(chang)用的蛋白質測定方法。其(qi)原理(li)是蛋白質分子(zi)中(zhong)的芳香族(zu)氨(an)基酸(suan)（如(ru)酪(lao)氨(an)酸(suan)和苯(ben)丙氨(an)酸(suan)）在紫(zi)外(wai)線(xian)區域(yu)具(ju)有(you)特征吸(xi)收峰(feng)（通(tong)常(chang)是(shi)280nm波(bo)長(chang)）。通(tong)過(guo)測量(liang)樣(yang)品(pin)在(zai)該波(bo)長(chang)處(chu)的吸(xi)光度(du)，可以估計蛋白質的含(han)量。這個(ge)方法不(bu)僅快(kuai)速(su)、簡(jian)單，而(er)且準(zhun)確度(du)較高。

為了執(zhi)行(xing)紫(zi)外(wai)線(xian)吸(xi)收法的分析(xi)，實(shi)驗(yan)室通(tong)常(chang)使(shi)用分光(guang)光度(du)計。分光(guang)光度(du)計能(neng)夠在不(bu)同(tong)波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)量樣(yang)品(pin)的吸(xi)光度(du)，通過(guo)設定波(bo)長(chang)為280nm，分析(xi)樣(yang)品(pin)在(zai)該波(bo)長(chang)下(xia)的吸(xi)光度(du)，以計算蛋白質濃度(du)。然(ran)而(er)，紫外(wai)線(xian)吸(xi)收法不(bu)適用於(yu)含有(you)顯著(zhu)幹(gan)擾物(wu)的樣(yang)品(pin)，比(bi)如(ru)含(han)有(you)膽紅素(su)、DNA和RNA等(deng)的樣(yang)品(pin)。

二、顯色(se)法

顯色(se)法是(shi)常(chang)用的蛋白質測定方法之(zhi)壹(yi)。其(qi)中(zhong)，布(bu)拉德福(fu)德法和(he)低裏(li)德法是(shi)顯色(se)法中(zhong)常(chang)用的方法。布(bu)拉德福(fu)德法利用蛋白質與(yu)某些試(shi)劑發生(sheng)反(fan)應後(hou)形(xing)成(cheng)染色(se)物(wu)質(zhi)，通(tong)過(guo)測(ce)量染色(se)物(wu)質(zhi)的吸(xi)光度(du)來(lai)測(ce)定蛋白質的含(han)量。低(di)裏(li)德法則是(shi)利用蛋白質與(yu)低裏(li)德試(shi)劑發生(sheng)特異(yi)性(xing)反(fan)應，產(chan)生(sheng)顯色(se)反應，根據顯色(se)反應的強(qiang)度(du)來(lai)測(ce)定蛋白質的含(han)量。

這兩(liang)種(zhong)方法都(dou)使(shi)用分光(guang)光度(du)計來(lai)測(ce)量(liang)染色(se)物(wu)質(zhi)或(huo)顯色(se)物(wu)質(zhi)的吸(xi)光度(du)。布(bu)拉德福(fu)德法具(ju)有靈(ling)敏(min)度(du)高的優(you)點，可以測(ce)定低蛋白質濃度(du)。然(ran)而(er)，布(bu)拉德福(fu)試(shi)劑中(zhong)的某(mou)些成(cheng)分可能對特定樣品(pin)產(chan)生幹(gan)擾。低裏(li)德法適用於(yu)大多(duo)數樣(yang)品(pin)，且(qie)靈(ling)敏(min)度(du)較高。但(dan)是，壹(yi)些困(kun)擾低裏(li)德試(shi)劑的成(cheng)分可能引(yin)起幹(gan)擾。

三(san)、比(bi)色(se)法：

比(bi)色(se)法也(ye)是(shi)常(chang)用的蛋白質測定方法之(zhi)壹(yi)。其(qi)中(zhong)，比(bi)爾(er)斯(si)法是(shi)常(chang)見的比(bi)色(se)法，它(ta)的原理(li)是利用蛋白質與(yu)比(bi)爾(er)斯(si)試劑在(zai)堿(jian)性條(tiao)件(jian)下發生(sheng)反(fan)應，生(sheng)成(cheng)紫(zi)色化合(he)物(wu)，通(tong)過(guo)測(ce)量(liang)紫色化合(he)物(wu)的吸(xi)光度(du)來(lai)測(ce)定蛋白質的含(han)量。這種(zhong)方法同(tong)樣需要(yao)分光(guang)光度(du)計來(lai)測(ce)量(liang)染色(se)物(wu)質(zhi)的吸(xi)光度(du)。比(bi)爾(er)斯(si)法的優(you)點在(zai)於(yu)簡單易行(xing)，且(qie)具(ju)有(you)較高的靈(ling)敏(min)度(du)。然(ran)而(er)，比(bi)色(se)法對(dui)脂肪(fang)、糖(tang)和某(mou)些藥(yao)物(wu)有(you)幹(gan)擾。

四、BCA蛋白定量法：

除(chu)了(le)紫外(wai)線(xian)吸(xi)收法、顯色(se)法和(he)比(bi)色(se)法，還(hai)有其(qi)他(ta)常(chang)見的蛋白質測定方法，比(bi)如(ru)BCA法和(he)Lowry法等(deng)。BCA法是(shi)壹種(zhong)利用堿(jian)性條(tiao)件(jian)和BCA試劑與(yu)蛋白質發生(sheng)反(fan)應產(chan)生(sheng)染色(se)物(wu)質(zhi)的方法。

而(er)Lowry法則是(shi)通(tong)過利用堿(jian)性條(tiao)件(jian)蛋白質與(yu)試劑發生(sheng)反(fan)應，形(xing)成(cheng)復(fu)合(he)物(wu)，然(ran)後(hou)在酸(suan)性條(tiao)件下(xia)進(jin)壹步發生(sheng)反(fan)應產(chan)生(sheng)染色(se)物(wu)質(zhi)的方法。這些方法各有優(you)點和(he)缺點，如(ru)靈(ling)敏(min)度(du)、樣品(pin)影(ying)響(xiang)以及(ji)操(cao)作步驟復(fu)雜度(du)等(deng)方面(mian)有所(suo)不(bu)同(tong)。

在選(xuan)擇適當的蛋白質測定方法時(shi)，需(xu)要考(kao)慮(lv)樣(yang)品(pin)的特點和(he)實驗(yan)需求(qiu)。總的來(lai)說，通(tong)過(guo)蛋白質測定方法比(bi)較選(xuan)擇合(he)適的蛋白質測定方法對(dui)於(yu)準(zhun)確測定蛋白質的含(han)量至(zhi)關重要(yao)，可以為各種(zhong)生(sheng)物(wu)學(xue)研(yan)究(jiu)和(he)醫(yi)學(xue)研(yan)究(jiu)提(ti)供有(you)力支持。

值得壹(yi)提(ti)的是(shi)，蘇(su)州阿(e)爾(er)法生(sheng)物(wu)實(shi)驗(yan)室是(shi)壹(yi)家(jia)專(zhuan)門(men)提(ti)供實(shi)驗室儀(yi)器和試劑的供(gong)應商(shang)。作(zuo)為壹個(ge)專(zhuan)業的實(shi)驗室設(she)備(bei)供應商(shang)，我(wo)們提(ti)供各種(zhong)品(pin)牌(pai)的紫(zi)外(wai)分光(guang)光度(du)計，供(gong)科研(yan)機(ji)構、大學(xue)、醫學(xue)幾個(ge)和工業實(shi)驗(yan)室等(deng)廣泛(fan)使用。