HEI-OC1細胞培(pei)養方(fang)法(fa)

壹(yi)、HEI-OC1細胞來(lai)源

HEI-OC1細胞是壹(yi)種(zhong)由(you)美國國家(jia)生(sheng)物技術信息(xi)中心(xin)（NCBI）創建(jian)的(de)內(nei)耳(er)研究細胞系(xi)。該(gai)細胞系(xi)源(yuan)自壹(yi)位成(cheng)年女性(xing)的(de)耳蝸(wo)組織，經過(guo)原代(dai)培(pei)養和(he)傳代，形成(cheng)了(le)具(ju)有(you)穩定生(sheng)長特性(xing)的(de)細胞系(xi)。

二(er)、培(pei)養基(ji)和(he)添(tian)加物(wu)

1. 培(pei)養基(ji)：建(jian)議(yi)使(shi)用DMEM/F12培(pei)養基(ji)，該(gai)培(pei)養基(ji)含有(you)多種(zhong)氨基(ji)酸、維生(sheng)素(su)和(he)生(sheng)長因(yin)子(zi)，能夠支持HEI-OC1細胞的(de)生(sheng)長。

2. 添(tian)加物(wu)：為(wei)了(le)維(wei)持細胞的(de)健康生(sheng)長，需(xu)要添(tian)加適(shi)量的(de)生(sheng)長因(yin)子(zi)和(he)抗生(sheng)素(su)。例如，轉鐵蛋(dan)白、胰島素(su)、地塞(sai)米松和(he)青(qing)黴素(su)等(deng)。

三、培(pei)養條(tiao)件(jian)

1. 溫度(du)：適(shi)宜(yi)的(de)培(pei)養溫度(du)為(wei)37℃，在此溫度(du)下(xia)細胞能夠正常(chang)生(sheng)長。

2. 濕(shi)度(du)：維(wei)持培(pei)養基(ji)濕(shi)度(du)在95%左右(you)，以保(bao)證(zheng)細胞的(de)正常(chang)生(sheng)長。

3. 氣(qi)體環境：使用5% CO2和(he)95%空(kong)氣(qi)的(de)培(pei)養箱(xiang)，以維(wei)持培(pei)養基(ji)的(de)pH值。

四(si)、傳代和(he)凍存

1. 傳代：當(dang)HEI-OC1細胞生(sheng)長到(dao)80%-90%匯(hui)合(he)度(du)時(shi)，可(ke)以(yi)使(shi)用胰蛋(dan)白酶(mei)進行傳代。將(jiang)細胞從培(pei)養瓶(ping)中取出，用胰蛋(dan)白酶(mei)消化(hua)後進行離(li)心(xin)，再(zai)加入(ru)新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養基(ji)進行接種(zhong)。

2. 凍存：為(wei)了(le)長期(qi)保(bao)存HEI-OC1細胞，可(ke)以采(cai)用凍存技術。將細胞接(jie)種(zhong)到(dao)凍存管(guan)中(zhong)，加入(ru)適(shi)量的(de)保(bao)護(hu)劑(ji)（如二(er)甲基(ji)亞碸），然後(hou)置(zhi)於-80℃冰(bing)箱(xiang)中(zhong)冷(leng)凍保(bao)存。

五(wu)、HEI-OC1細胞培(pei)養方(fang)法(fa)

培(pei)養基(ji)配(pei)制(zhi)：

使用DMEM/F12培(pei)養基(ji)，添(tian)加10%胎(tai)牛血(xue)清（FBS），1% L-谷氨酰(xian)胺和(he)1%青(qing)黴素(su)/鏈(lian)黴素(su)（或抗生(sheng)素(su)）。根據需(xu)要可添(tian)加其(qi)他的(de)生(sheng)長因(yin)子(zi)或化合(he)物(wu)。

1. 培(pei)養皿(min)處(chu)理(li)：

使用(yong)70%酒精或其它(ta)消(xiao)毒液對培(pei)養皿(min)進行消毒處(chu)理(li)。將消(xiao)毒液均勻(yun)塗(tu)抹(mo)於(yu)培(pei)養皿(min)表面(mian)並(bing)靜置(zhi)片(pian)刻(ke)，然後將(jiang)液體倒(dao)掉(diao)，培(pei)養皿(min)繼續(xu)放(fang)置(zhi)在無(wu)菌通(tong)風櫃中(zhong)。在培(pei)養皿(min)上(shang)均(jun)勻塗(tu)抹(mo)培(pei)養基(ji)並(bing)使(shi)其(qi)整個表面(mian)均(jun)勻分(fen)布，接(jie)下(xia)來置(zhi)於37℃的(de)培(pei)養箱(xiang)中至少30分(fen)鐘，確(que)保(bao)培(pei)養皿(min)內(nei)的(de)溫度(du)均(jun)勻(yun)。

2. 細胞解凍和(he)接(jie)種(zhong)：

將(jiang)HEI-OC1細胞迅(xun)速(su)從液氮中(zhong)取(qu)出，立即(ji)放(fang)到37℃預(yu)熱(re)的(de)水(shui)浴中，快(kuai)速(su)震(zhen)蕩(dang)使(shi)其解凍，然後立即(ji)將細胞離(li)心(xin)並(bing)重(zhong)新懸浮(fu)於(yu)預(yu)先加(jia)熱(re)的(de)培(pei)養基(ji)中(zhong)。計算細胞濃(nong)度(du)，並(bing)按所需(xu)細胞數(shu)接種(zhong)到(dao)培(pei)養皿(min)中(zhong)。細胞接(jie)種(zhong)後(hou)放(fang)置(zhi)在37℃的(de)恒溫培(pei)養箱(xiang)中。

3. 細胞傳代：

壹(yi)般情(qing)況(kuang)下，當(dang)細胞密(mi)度(du)達(da)到80-90%時(shi)需(xu)要傳代。傳代的(de)時間(jian)不(bu)宜(yi)過長，否(fou)則細胞易(yi)失(shi)去生(sheng)長特性(xing)。以(yi)下是HEI-OC1細胞的(de)傳代步驟(zhou)：

   a. 倒(dao)掉(diao)培(pei)養皿(min)中(zhong)的(de)舊(jiu)培(pei)養基(ji)，用(yong)PBS或無(wu)菌的(de)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)洗(xi)滌(di)細胞。

   b. 加(jia)入壹(yi)定體積的(de)胰酶(mei)/EDTA溶液（如0.05% trypsin/EDTA），對細胞進行消化。消化時(shi)間壹(yi)般不(bu)超過(guo)5分(fen)鐘，觀察(cha)細胞的(de)形態(tai)變(bian)化，當(dang)細胞間(jian)出現較(jiao)大(da)的(de)縫隙(xi)時即(ji)表示消化(hua)完成。

   c. 停止(zhi)消化，加(jia)入相應(ying)體積的(de)培(pei)養基(ji)中(zhong)和(he)胎(tai)牛血清，輕(qing)輕(qing)拍打培(pei)養皿(min)使(shi)細胞充分(fen)懸浮(fu)。

   d. 計算細胞濃(nong)度(du)，並(bing)按所需(xu)細胞數(shu)接種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養皿(min)中(zhong)。

   e. 培(pei)養皿(min)放(fang)置(zhi)於培(pei)養箱(xiang)中，在37℃下培(pei)養。

五(wu)、細胞培(pei)養註意(yi)事項：

- HEI-OC1細胞對培(pei)養基(ji)的(de)組分(fen)和(he)濃(nong)度(du)比(bi)較(jiao)敏(min)感，建議使用DMEM/F12培(pei)養基(ji)，添(tian)加10%胎(tai)牛血(xue)清（FBS）等(deng)。

- 細胞密(mi)度(du)過(guo)高可(ke)能會(hui)影(ying)響細胞生(sheng)長和(he)附著性(xing)，需(xu)要根據細胞的(de)特點(dian)和(he)實(shi)驗(yan)的(de)需求(qiu)調(tiao)整細胞密(mi)度(du)。

- 細胞的(de)傳代時(shi)間(jian)要合(he)適(shi)，不(bu)能過長，否(fou)則細胞易(yi)失(shi)去生(sheng)長特性(xing)，建(jian)議根據細胞生(sheng)長情(qing)況(kuang)和(he)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)進行傳代。

- 註意(yi)細菌、真(zhen)菌汙染(ran)的(de)預防(fang)，進行細胞培(pei)養時(shi)保(bao)持無(wu)菌操(cao)作。

HEI-OC1細胞培(pei)養常(chang)見(jian)問題(ti)：

問(wen)：復蘇了(le)好(hao)幾次(ci)課(ke)題(ti)組之前(qian)凍存的(de)HEI-OC1細胞，每(mei)次(ci)都(dou)是要麽(me)染菌(jun)要麽(me)傳代後(hou)大(da)量漂(piao)浮，有(you)時候還(hai)會(hui)出現不(bu)生(sheng)長的(de)現象(xiang)，沒(mei)有(you)培(pei)養超過(guo)五(wu)代的(de)，大(da)概(gai)是什(shen)麽(me)原因(yin)？

答(da)：對於(yu)妳(ni)提(ti)到的(de)問題(ti)，可(ke)能有(you)以下(xia)幾個原因(yin)導(dao)致(zhi)這種(zhong)現(xian)象的(de)出現：

1. 培(pei)養皿(min)處(chu)理(li)不充分(fen)：培(pei)養皿(min)表面(mian)不(bu)幹凈(jing)或沒有(you)充分(fen)消毒(du)，這(zhe)可能導(dao)致(zhi)細胞附著不良或細菌汙(wu)染。

2. 細胞密(mi)度(du)過(guo)高：細胞密(mi)度(du)過(guo)高會(hui)導(dao)致(zhi)細胞互(hu)相附著，並形成(cheng)團塊，難以正常(chang)生(sheng)長和(he)分(fen)裂(lie)。

3. 培(pei)養基(ji)成(cheng)分(fen)不合(he)適(shi)：不(bu)同批次(ci)的(de)胎牛(niu)血(xue)清(qing)會(hui)有(you)差(cha)異，可(ke)能會(hui)影(ying)響細胞的(de)生(sheng)長和(he)附著性(xing)。

建(jian)議妳(ni)在進行細胞培(pei)養時(shi)註意(yi)以上(shang)問(wen)題的(de)排除(chu)。如果(guo)仍(reng)然存在問題(ti)，建議(yi)咨(zi)詢細胞培(pei)養專(zhuan)家或經驗(yan)豐(feng)富的(de)研究人員，以(yi)獲取更(geng)具(ju)體的(de)解決方案。

蘇州(zhou)阿爾(er)法(fa)生(sheng)物與(yu)海(hai)星(xing)生(sheng)物廠(chang)商合(he)作，除(chu)了提(ti)供500多種(zhong)腫(zhong)瘤(liu)細胞，200多(duo)種(zhong)基(ji)因(yin)編(bian)輯細胞外(wai)，還提供細胞培(pei)養試(shi)劑、實(shi)驗(yan)耗(hao)材(cai)、細胞培(pei)養耗(hao)材(cai)和(he) 實(shi)驗(yan)室(shi)儀器(qi)設(she)備(bei)采(cai)購 。