SH-SY5Y細胞(bao)轉染(ran)步驟(zhou)

 材料與試(shi)劑:
- SH-SY5Y細胞(bao)系：可從(cong)Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences或(huo)其(qi)他來源獲(huo)得(de)。
- 細胞(bao)培養(yang)基：Dulbecco's Modified Eagle Medium（DMEM）/F12混(hun)合(he)培(pei)養基。
- 熱(re)穩定型胰酶(mei)：用於細胞(bao)的傳代與(yu)分離。
- 轉染(ran)試(shi)劑：例如(ru)，聚乙(yi)烯亞(ya)胺（PEI）、脂質(zhi)體(ti)等。
- 目標基(ji)因的質(zhi)粒(li)DNA或siRNA：用於轉染(ran)和(he)表達(da)。
- Opti-MEM：用於稀釋(shi)轉染(ran)試(shi)劑和(he)質(zhi)粒(li)。
 
優化(hua)方(fang)法:
壹、準(zhun)備(bei)SH-SY5Y細胞(bao)
1. 獲(huo)得(de)SH-SY5Y細胞(bao)系並進(jin)行培(pei)養(yang)。
2. 在T25細胞(bao)培養(yang)瓶中(zhong)分別加入10 ml完(wan)整(zheng)的DMEM/F12培(pei)養(yang)基及10%胎(tai)牛血清(qing)（FBS）。
3. 將(jiang)SH-SY5Y細胞(bao)從細胞(bao)凍存(cun)管(guan)中(zhong)復(fu)蘇(su)，並(bing)將(jiang)細胞(bao)傳遞至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)。

4. 在(zai)37℃、5% CO2的培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)細胞(bao)，直至(zhi)細胞(bao)達(da)到80-90%的密(mi)度(du)。

二、轉染前(qian)的預(yu)處(chu)理
1. 轉(zhuan)染前用DMEM/F12培養基(ji)含(han)10% FBS對SH-SY5Y細胞(bao)進(jin)行預(yu)處(chu)理。
2. 將(jiang)細胞(bao)培養(yang)至(zhi)80-90%的密(mi)度(du)。

3. 用1X PBS洗(xi)滌細胞(bao)2次(ci)，去除(chu)細胞(bao)內(nei)的殘(can)留培養(yang)基(ji)。

三、轉染(ran)操作
1. 根據(ju)轉染試(shi)劑的使(shi)用說明(ming)，將(jiang)轉染(ran)試(shi)劑稀釋(shi)至(zhi)合(he)適(shi)的濃(nong)度(du)，如(ru)使(shi)用PEI轉染，可(ke)在(zai)Opti-MEM中(zhong)稀釋(shi)PEI至(zhi)最(zui)終(zhong)濃(nong)度(du)。
2. 在(zai)另壹個(ge)離心管(guan)中(zhong)將(jiang)質(zhi)粒(li)DNA或siRNA按(an)照使(shi)用的量(liang)稀釋(shi)至(zhi)合(he)適(shi)體(ti)積(ji)，並(bing)在(zai)Opti-MEM中(zhong)混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。
四、轉(zhuan)染(ran)操作步驟
1. 向(xiang)細胞(bao)中(zhong)加入預(yu)先(xian)稀釋(shi)好的轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑，註(zhu)意(yi)不(bu)要形(xing)成氣(qi)泡並避(bi)免細胞(bao)過度(du)幹(gan)擾(rao)。
2. 輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)培(pei)養瓶，使(shi)轉染試(shi)劑均勻(yun)分布(bu)。
3. 將(jiang)稀釋(shi)好的質(zhi)粒(li)DNA或siRNA加入到培(pei)養(yang)基中(zhong)，與(yu)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑充(chong)分混(hun)合(he)，避(bi)免形(xing)成沈澱(dian)。
4. 震(zhen)蕩培(pei)養瓶並置於(yu)37℃的培(pei)養(yang)箱中(zhong)進(jin)行培(pei)養(yang)。
5. 根據(ju)研究(jiu)需求(qiu)，在(zai)48-72小(xiao)時(shi)後(hou)進(jin)行下(xia)壹(yi)步實(shi)驗(yan)（如(ru)蛋白(bai)表達(da)、基(ji)因敲(qiao)除(chu)等）。
    本(ben)文(wen)詳(xiang)細介(jie)紹(shao)了(le)壹(yi)種優化(hua)的SH-SY5Y細胞(bao)轉染(ran)方(fang)法。通(tong)過合(he)適(shi)的細胞(bao)預處(chu)理步(bu)驟，並使(shi)用適當(dang)的轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑和(he)質(zhi)粒(li)DNA/siRNA濃度(du)，可(ke)以(yi)實(shi)現高(gao)效且可(ke)重(zhong)復的SH-SY5Y細胞(bao)轉染(ran)。值(zhi)得(de)指(zhi)出的是(shi)，轉染(ran)條件可能因具(ju)體(ti)實(shi)驗(yan)目的而(er)略(lve)有不同，因此每(mei)位研究(jiu)者(zhe)都應(ying)根據(ju)實(shi)驗(yan)需求(qiu)進(jin)行適(shi)當(dang)的優(you)化(hua)。這(zhe)種優(you)化(hua)後(hou)的轉(zhuan)染(ran)方(fang)法將(jiang)有助(zhu)於(yu)更(geng)好(hao)地(di)理(li)解(jie)SH-SY5Y細胞(bao)中(zhong)的基(ji)因(yin)功能並推動(dong)神經(jing)科學(xue)研究(jiu)的發(fa)展(zhan)。