生物制(zhi)藥(yao)實驗中的註(zhu)意事(shi)項(xiang)和實驗技(ji)巧分享(xiang)

在(zai)生物制(zhi)藥(yao)實驗中，準確(que)和可(ke)靠地測定藥(yao)物的含(han)量是(shi)非(fei)常(chang)重要的(de)。為了保(bao)證實驗結(jie)果(guo)的(de)準確性，以(yi)下是(shi)壹些(xie)實驗技(ji)巧和註意事(shi)項(xiang)：

  1. 過(guo)濾溶(rong)液(ye)：當乙(yi)醇溶(rong)解主成(cheng)分後，輔料(liao)不能溶(rong)解，並需(xu)要過(guo)濾。離心方法(fa)是(shi)壹種(zhong)常(chang)用的(de)過(guo)濾方法(fa)，通(tong)過(guo)離心使(shi)輔料(liao)沈(chen)澱(dian)，並取上清液(ye)。註意(yi)，在離心過(guo)程中，部(bu)分離心管沒有塞子，可(ke)以(yi)使(shi)用(yong)柔軟(ruan)的(de)塑料(liao)薄(bo)膜(mo)袋和(he)橡皮筋(jin)代替。與薄(bo)膜(mo)過(guo)濾法(fa)相比(bi)，離心過(guo)濾法(fa)不會對(dui)測定結(jie)果(guo)產(chan)生影(ying)響。此(ci)外(wai)，如(ru)果(guo)過(guo)濾操作(zuo)不(bu)夠快(kuai)速(su)，乙(yi)醇易(yi)揮(hui)發(fa)，可能會影(ying)響測定結(jie)果(guo)。

  2. 超(chao)聲(sheng)波(bo)分散(san)：在(zai)檢(jian)驗(yan)吲(yin)噠帕胺(an)片的(de)含(han)量時(shi)，使(shi)用(yong)超聲(sheng)波(bo)超(chao)聲(sheng)可(ke)以(yi)使(shi)片劑(ji)更(geng)易分散(san)，可(ke)以(yi)溶(rong)解主成(cheng)分，並且(qie)沒有浪費。與研(yan)磨轉(zhuan)移方法(fa)相比(bi)，超(chao)聲(sheng)波(bo)分散(san)對(dui)含(han)量(liang)均(jun)勻度(du)測定沒有影(ying)響，且(qie)更(geng)簡單(dan)方便(bian)。

 3. 控(kong)制(zhi)溶(rong)劑(ji)濃(nong)度(du)：在(zai)檢測中藥(yao)材的浸(jin)出(chu)物時(shi)，壹定要按(an)照標(biao)準控(kong)制(zhi)好(hao)溶(rong)劑(ji)的濃(nong)度(du)（如(ru)乙(yi)醇等），否則(ze)檢驗(yan)結果(guo)可(ke)能會有很大(da)的差異(yi)。

 4. 對(dui)照(zhao)品與供(gong)試(shi)品混合(he)：在(zai)液(ye)相鑒別(bie)中，當供(gong)試(shi)品與對(dui)照品(pin)出峰(feng)時(shi)間不壹(yi)致時(shi)，無法(fa)判斷(duan)是(shi)否合格。可以將對(dui)照(zhao)品(pin)與供(gong)試(shi)品各(ge)半配(pei)成混合(he)溶(rong)液(ye)後進(jin)行進樣(yang)，如(ru)果(guo)峰(feng)寬(kuan)未變(bian)寬(kuan)，未出(chu)現(xian)駝(tuo)峰(feng)，則(ze)可判(pan)斷為合格。

5. 考慮理化(hua)性質(zhi)分離雜質(zhi)：在進(jin)行原料(liao)殘留物(wu)檢(jian)測時(shi)，如(ru)果(guo)主藥(yao)對雜質(zhi)有幹擾，現有方法(fa)無法(fa)檢出(chu)。在自建(jian)方法(fa)時，要優(you)先考慮利用理化(hua)性質(zhi)將雜質(zhi)分離出(chu)來，然(ran)後(hou)再進行測定，往(wang)往會取得意(yi)想不到的(de)效(xiao)果(guo)。

6. 生物制(zhi)藥(yao)實驗中要考慮展開(kai)劑(ji)的溫(wen)度(du)與配(pei)制(zhi)順(shun)序(xu)：在(zai)進(jin)行藥(yao)材薄(bo)層色譜鑒別(bie)時，應該(gai)考慮展開(kai)劑(ji)的溫(wen)度(du)與配(pei)制(zhi)順(shun)序(xu)。有時，這(zhe)可能會對(dui)色譜的結(jie)果(guo)產(chan)生影(ying)響。

7. 非(fei)規(gui)定色(se)譜柱和調(tiao)整標準(zhun)溶(rong)液(ye)濃(nong)度(du)：在(zai)進行有機溶(rong)劑(ji)殘留量(liang)檢(jian)查時(shi)，不(bu)壹定要堅(jian)持(chi)使(shi)用(yong)規(gui)定的(de)色譜柱。通(tong)常(chang)情況下，DB-624色譜柱可以(yi)滿足(zu)要求(qiu)。此外，取樣(yang)量(liang)也可(ke)以靈(ling)活調(tiao)整，標(biao)準(zhun)溶(rong)液(ye)濃(nong)度(du)根(gen)據(ju)限度(du)進(jin)行相應調(tiao)整(zheng)即可(ke)。

8. 飽和時間要夠(gou)：在進(jin)行薄(bo)層色譜鑒別(bie)時，飽(bao)和(he)時(shi)間壹定要夠(gou)長。

9. 控(kong)制(zhi)流動相pH值：在使(shi)用(yong)HPLC測定物(wu)質含量(liang)時(shi)，如(ru)果(guo)流動相中使(shi)用(yong)了緩沖鹽，壹(yi)定要註(zhu)意其(qi)pH值。因為在放置過(guo)程中，流動相的pH值可能會發(fa)生變化(hua)，而(er)某(mou)些(xie)藥(yao)物對這(zhe)種(zhong)變化(hua)非(fei)常(chang)敏感。

10. 控(kong)制(zhi)溫(wen)度(du)：在(zai)使(shi)用(yong)HPLC測定物(wu)質含量(liang)時(shi)，溫(wen)度(du)的(de)控(kong)制(zhi)極其重要。最(zui)好(hao)使(shi)用(yong)帶有柱溫(wen)箱的(de)設(she)備，如(ru)果(guo)沒有，則(ze)需在(zai)裝(zhuang)置中保(bao)持恒(heng)溫(wen)後再進行測定，否則(ze)可能出現基線(xian)飄(piao)移，結果(guo)不(bu)準確。

11. 特定品(pin)種(zhong)對溫(wen)度(du)敏感：某(mou)些(xie)藥(yao)物對溫(wen)度(du)的(de)影(ying)響非(fei)常(chang)大。例(li)如(ru)，有些品(pin)種(zhong)的對照(zhao)品(pin)溶(rong)液(ye)不能放在冰箱中，甚至(zhi)需要在(zai)液(ye)相室內開(kai)空(kong)調(tiao)，並在(zai)第(di)二天(tian)才能使(shi)用(yong)。

12. 使(shi)用(yong)微量(liang)移液(ye)槍要註(zhu)意"重(zhong)壓輕(qing)打"：在(zai)使(shi)用(yong)微量(liang)移液(ye)槍時(shi)，要註(zhu)意正確施加力量，以(yi)確保(bao)加液(ye)的準(zhun)確性。

13. 分液(ye)加速(su)：在進行壹些(xie)乳膏(gao)的(de)含(han)量(liang)測定時(shi)，常(chang)使(shi)用(yong)提取分液(ye)。在分液(ye)時，如(ru)果(guo)兩(liang)相的分界不清晰，可以加入(ru)少量的飽和(he)氯(lv)化(hua)鈉溶(rong)液(ye)。這樣(yang)可(ke)以使(shi)分層更(geng)加明(ming)顯(xian)。

14. 強(qiang)調溶(rong)解時(shi)間：呋(fu)喃(nan)唑(zuo)酮溶(rong)解較慢，溶(rong)解時(shi)間壹定要足(zu)夠長(chang)。

15. 避免(mian)幹擾峰(feng)：在(zai)使(shi)用(yong)HPLC測定物(wu)質含量(liang)時(shi)，最(zui)好(hao)使(shi)用(yong)流動相溶(rong)解樣(yang)品(pin)。否則(ze)，容易產(chan)生幹擾峰(feng)，影(ying)響結(jie)果(guo)。特(te)別(bie)註意(yi)可(ke)能出現的倒峰(feng)情況。

16. 分層加速(su)：在低溫(wen)環(huan)境(jing)下進行中藥(yao)制(zhi)劑(ji)的萃(cui)取時，往(wang)往(wang)會出(chu)現乳(ru)化(hua)現象，即(ji)兩(liang)相不容易分層。這時可(ke)以加入少量的飽和(he)氯(lv)化(hua)鈉溶(rong)液(ye)，或者(zhe)使(shi)用(yong)電吹風對分液(ye)漏鬥進(jin)行加溫(wen)，或者用(yong)熱(re)抹(mo)布(bu)覆(fu)蓋，可以加速(su)分層過(guo)程。

17. 註意(yi)試(shi)劑(ji)的含(han)水量(liang)：在(zai)非(fei)水滴(di)定中，試(shi)劑(ji)的含(han)水量(liang)對(dui)結果(guo)有較大影(ying)響。例(li)如(ru)，更(geng)換不同(tong)廠(chang)家的(de)冰醋(cu)酸(suan)，實驗結(jie)果(guo)可(ke)能會有差異(yi)。 

18. 加(jia)快(kuai)過(guo)濾速(su)度(du)：對(dui)於(yu)比(bi)較稠或量(liang)少的中藥(yao)制(zhi)劑(ji)溶(rong)液(ye)，在濾紙過(guo)濾之前(qian)，可(ke)以(yi)先(xian)通(tong)過(guo)離心使(shi)其(qi)分層，然後再過(guo)濾。這樣(yang)可(ke)以加(jia)快(kuai)過(guo)濾速(su)度(du)，減(jian)少有機溶(rong)劑(ji)的揮(hui)發(fa)（尤其是(shi)在環(huan)境(jing)溫(wen)度(du)較高(gao)時）。

19. 清洗(xi)檢(jian)測器(qi)：在使(shi)用(yong)高(gao)效液(ye)相色譜儀(yi)測定人(ren)參(can)、麻(ma)黃(huang)的含量時，由(you)於(yu)檢測波(bo)長(chang)為邊緣(yuan)波(bo)長(chang)（如(ru)203nm、207nm），通(tong)常(chang)壹次檢(jian)測不(bu)能成功。尤其是(shi)在使(shi)用(yong)壹段時間後，檢(jian)測器(qi)效果(guo)可(ke)能會下降。可以卸(xie)掉(diao)色(se)譜柱，直(zhi)接連接檢(jian)測器(qi)，使(shi)用(yong)0.1%鹽酸(suan)清洗(xi)檢(jian)測池(chi)4小(xiao)時，效(xiao)果(guo)會有所改善。

20. 使(shi)用(yong)色譜純試(shi)劑(ji)處理：在使(shi)用(yong)高(gao)效液(ye)相色譜儀(yi)測定含(han)量時，可(ke)以(yi)使(shi)用(yong)色譜純試(shi)劑(ji)處理對照(zhao)品(pin)和樣(yang)品(pin)，以減(jian)少誤(wu)差。

 以(yi)上(shang)是(shi)壹些(xie)生物制(zhi)藥(yao)實驗中的實驗技(ji)巧和註意事(shi)項(xiang)，這些技巧和註意事(shi)項(xiang)的應用(yong)可(ke)以提高(gao)實驗結(jie)果(guo)的(de)準確性和(he)可靠性。正確的實驗操作(zuo)和(he)細致的註意事(shi)項(xiang)對於(yu)藥(yao)物研究(jiu)和開(kai)發(fa)較為重要。更(geng)多實驗室(shi)儀(yi)器(qi)、實驗設(she)備、實驗耗材、實驗試(shi)劑(ji)可以(yi)進入(ru)蘇州阿爾法(fa)生物實驗器(qi)材網站進(jin)行了解。