CRISPR-Cas9技(ji)術(shu)介(jie)紹

 在(zai)過(guo)去(qu)的(de)幾十(shi)年(nian)中(zhong)，科(ke)學家們(men)對(dui)基(ji)因編輯(ji)和(he)基(ji)因修復(fu)技(ji)術(shu)進(jin)行(xing)了大量的(de)研究(jiu)與(yu)實(shi)驗(yan)。這(zhe)些(xie)技(ji)術(shu)的(de)發展為人類(lei)帶(dai)來了巨大的(de)進步(bu)，使得(de)我(wo)們能夠(gou)更(geng)好(hao)地理(li)解基(ji)因組的(de)功能(neng)和(he)調控(kong)，以及開(kai)發新(xin)的(de)醫學(xue)研(yan)究(jiu)方(fang)法(fa)。而(er)其中壹(yi)項(xiang)成(cheng)為重(zhong)要和(he)引(yin)人關註的(de)技(ji)術(shu)就(jiu)是CRISPR-Cas9。

CRISPR-Cas9是壹種(zhong)革命(ming)性的(de)基(ji)因編輯(ji)工(gong)具(ju)，能(neng)夠(gou)通(tong)過(guo)精準地剪(jian)切(qie)DNA序(xu)列來(lai)實(shi)現基(ji)因編輯(ji)和(he)修復(fu)。CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) 是壹種(zhong)存(cun)在(zai)於(yu)細(xi)菌和(he)古菌中(zhong)的(de)天(tian)然防(fang)禦機(ji)制，用於識(shi)別(bie)和(he)摧毀入侵者(zhe)的(de)DNA。Cas9 (CRISPR associated protein 9) 是CRISPR 系統(tong)中的(de)核酸(suan)酶(mei)，負責剪(jian)切(qie)DNA。結(jie)合CRISPR和(he)Cas9，科學(xue)家(jia)們(men)成(cheng)功地將(jiang)這壹機制應(ying)用於基(ji)因編輯(ji)和(he)修復(fu)領域(yu)。

  CRISPR-Cas9技(ji)術(shu)的(de)工作原理(li)非常(chang)簡單(dan)。科學(xue)家們開(kai)始設計並(bing)合成(cheng)壹小段RNA引(yin)導(dao)序(xu)列，該序(xu)列能(neng)夠(gou)與(yu)目(mu)標(biao)基(ji)因的(de)特(te)定(ding)序(xu)列配(pei)對。然(ran)後，將(jiang)這(zhe)段 RNA引(yin)導(dao)序(xu)列與(yu)Cas9蛋白(bai)結合(he)，形成(cheng)可(ke)以(yi)識(shi)別(bie)和(he)剪(jian)切(qie)DNA的(de)復合(he)物。壹旦(dan)復(fu)合物與(yu)目(mu)標(biao) DNA配(pei)對，Cas9蛋(dan)白(bai)就(jiu)會剪(jian)切(qie)目(mu)標(biao)基(ji)因的(de)DNA鏈，從而(er)引(yin)發壹(yi)系列的(de)修復(fu)過(guo)程(cheng)。

  CRISPR-Cas9技(ji)術(shu)的(de)應(ying)用範(fan)圍(wei)比(bi)較(jiao)廣(guang)泛(fan)。它(ta)可(ke)以(yi)用於研(yan)究(jiu)基(ji)因功能(neng)和(he)調控(kong)機制。通過(guo)定(ding)點編輯(ji) DNA 序(xu)列，科(ke)學家(jia)們可(ke)以(yi)觀(guan)察和(he)分析基(ji)因在細(xi)胞(bao)或生(sheng)物體中(zhong)的(de)功能(neng)變化(hua)。這(zhe)種(zhong)精確操(cao)縱(zong)基(ji)因的(de)能力，使得(de)科(ke)學(xue)家們能(neng)夠(gou)更(geng)好(hao)地理(li)解生(sheng)物體的(de)發育、疾患發生(sheng)機制以及藥(yao)物開(kai)發。

   除了研究應(ying)用外，CRISPR-Cas9還(hai)具(ju)有(you)潛力在農業領(ling)域(yu)進(jin)行(xing)基(ji)因改(gai)良。科(ke)學家(jia)們利用CRISPR-Cas9技(ji)術(shu)，可(ke)以(yi)快(kuai)速(su)、精確地在(zai)作物基(ji)因組中(zhong)引(yin)入有益(yi)特(te)質(zhi)，如提高產(chan)量、抗蟲和(he)抗逆性(xing)。這種(zhong)基(ji)因編輯(ji)的(de)方(fang)法(fa)，相較(jiao)於(yu)傳(chuan)統(tong)基(ji)因改(gai)良，具(ju)有(you)更(geng)高的(de)效(xiao)率和(he)更短(duan)的(de)時(shi)間(jian)。

實(shi)驗(yan)案(an)例(li)：

在(zai)壹項實(shi)驗(yan)中(zhong)，科(ke)學(xue)家們使用CRISPR-Cas9技(ji)術(shu)成(cheng)功地修復(fu)了人類(lei)β-地中(zhong)海貧血(xue)病變體(ti)。他們(men)通過(guo)剪(jian)切(qie)和(he)修復(fu)患者的(de)異常(chang)基(ji)因，在細(xi)胞(bao)中實(shi)現了基(ji)因修復(fu)。此(ci)次實(shi)驗(yan)的(de)成(cheng)功證(zheng)明(ming)了 CRISPR-Cas9技(ji)術(shu)在(zai)基(ji)因醫學(xue)研(yan)究中的(de)潛力，開(kai)創了醫學研究(jiu)領(ling)域(yu)新高

    然(ran)而(er)，盡管(guan)CRISPR-Cas9技(ji)術(shu)具(ju)有(you)巨大的(de)潛力和(he)許多(duo)應(ying)用前景(jing)，但(dan)它(ta)也(ye)面臨(lin)壹(yi)些(xie)挑(tiao)戰。但(dan)是挑戰之壹(yi)是確保(bao)編輯的(de)準確性和(he)安全(quan)性(xing)，以避(bi)免不(bu)可(ke)預(yu)見的(de)副作用和(he)後果(guo)。此(ci)外，倫理(li)和(he)法律問題也(ye)需要認真(zhen)考慮(lv)和(he)解決(jue)，以(yi)確保(bao)技(ji)術(shu)的(de)適當(dang)應(ying)用。

Cas9基(ji)因編輯(ji)- 基(ji)因定(ding)點敲入技(ji)術(shu)服(fu)務(wu)
    超(chao)過(guo)百個(ge)成(cheng)功敲(qiao)入KI案例(li)，蘇州(zhou)阿(e)爾(er)法(fa)生(sheng)物攜手(shou)海(hai)星(xing)生(sheng)物壹站(zhan)式解決(jue)細(xi)胞(bao)基(ji)因功能(neng)研究(jiu)純合(he)/雜(za)合(he)敲(qiao)入細(xi)胞(bao)系。

  Cas9-Cell line Knock-In service（Cas9-CKI）基(ji)因定(ding)點敲入細(xi)胞(bao)系是Cas9X技(ji)術(shu)團隊針(zhen)對實(shi)驗(yan)室常(chang)用的(de)各種(zhong)細(xi)胞(bao)系，研究並(bing)確立針(zhen)對不(bu)同的(de)細(xi)胞(bao)的(de)外源基(ji)因或者(zhe)片(pian)段高效(xiao)敲入（Knock-in, KI）的(de)技(ji)術(shu)操(cao)作規(gui)程(cheng)，主(zhu)要目(mu)的(de)就(jiu)是：解決(jue)KI效(xiao)率低(di)下(xia)和(he)KI片段(duan)長度(du)限制的(de)問題。

 我(wo)們還(hai)能為(wei)您(nin)提供：
基(ji)因敲除細(xi)胞(bao)系服務
基(ji)因點突(tu)變細(xi)胞(bao)系服務
基(ji)因定(ding)點敲入細(xi)胞(bao)系服務
微(wei)生物基(ji)因編輯(ji)服(fu)務
基(ji)因敲除Cell Pool服務(wu)

 案(an)例(li)分析
  基(ji)因敲入項目(mu)名(ming)稱(cheng)
  構(gou)建(jian)eGFP基(ji)因敲入的(de)人膠質瘤細(xi)胞(bao)細(xi)胞(bao)
實(shi)驗(yan)設計
種(zhong)屬：Human； 基(ji)因名(ming)稱(cheng)：PRNP
gRNA位(wei)點(dian)：ATCTTCCTGATAGTGGGATGAGG 
Donor載(zai)體：5'arm-eGFP-3'arm

基(ji)因敲入技(ji)術(shu)原理(li)圖
細(xi)胞(bao)信(xin)息
種(zhong)屬：Human； 細(xi)胞(bao)名(ming)稱(cheng)：人膠質瘤細(xi)胞(bao)U251
培養(yang)基(ji)：DMEM，10%FBS 
  
細(xi)胞(bao)檢(jian)測(ce)
無菌檢(jian)測(ce)：合格； 支(zhi)原體檢(jian)測(ce)：合格
細(xi)胞(bao)克(ke)隆(long)形(xing)成(cheng)率檢(jian)測(ce)：細(xi)胞(bao)增(zeng)殖能(neng)力較(jiao)好(hao)，克(ke)隆(long)形(xing)成(cheng)率較(jiao)好(hao)。 
細(xi)胞(bao)基(ji)因型(xing)檢(jian)測(ce)：針(zhen)對gRNA打(da)靶位(wei)置(zhi)及其(qi)附(fu)近(jin)基(ji)因組序(xu)列進(jin)行(xing)測(ce)序(xu)。測(ce)序(xu)結果(guo)與(yu)理(li)論序(xu)列壹(yi)致。 
 
細(xi)胞(bao)轉導(dao)                                                           
電(dian)轉(zhuan)參數(shu)：1005V，35ms，2次； 電(dian)轉(zhuan)體系：10 uL
  
PCR 篩(shai)選
篩(shai)選克(ke)隆(long)數(shu)量(liang)：160； 陽(yang)性數(shu)量：10