貼(tie)壁細(xi)胞培養常(chang)見(jian)的貼壁問(wen)題及解決(jue)方法

貼(tie)壁(bi)細(xi)胞培養是(shi)壹項常見(jian)的細(xi)胞培養技術(shu)，但在(zai)實際操作過(guo)程(cheng)中，常常(chang)會遇到(dao)壹些問(wen)題。下(xia)面將(jiang)介(jie)紹貼(tie)壁細(xi)胞培養中(zhong)常(chang)見(jian)的五(wu)大問(wen)題，並提(ti)供相(xiang)應(ying)的解決(jue)方法。

1. 傳(chuan)代(dai)後部(bu)分細(xi)胞漂浮(fu)

原因(yin)及解(jie)決(jue)方法如(ru)下(xia)：

- 傳代(dai)前細(xi)胞密度太(tai)大：細(xi)胞融(rong)合(he)度(du)達(da)到(dao)80%時(shi)可(ke)以(yi)進(jin)行傳代(dai)操作，傳(chuan)代(dai)密度(du)需(xu)要(yao)適(shi)中，密(mi)度(du)過高(gao)會導(dao)致(zhi)傳代(dai)後細(xi)胞漂浮(fu)。

- 細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)不(bu)好(hao)：可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)提(ti)高(gao)血清比(bi)例、保持(chi)穩定的培養環境(jing)等方法改(gai)善細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。

- 吹(chui)打次(ci)數(shu)過(guo)多(duo)造(zao)成(cheng)機(ji)械損(sun)傷(shang)：在吹(chui)打過(guo)程(cheng)中要輕(qing)柔(rou)操作，當(dang)細(xi)胞呈單(dan)顆(ke)粒時(shi)可(ke)停(ting)止吹打，避(bi)免產(chan)生(sheng)氣泡(pao)。

- 培養基更(geng)換後不(bu)適(shi)應(ying)：可(ke)以(yi)將(jiang)培養基換回(hui)原來使用的培養基，或(huo)者(zhe)與(yu)原培養基比(bi)例混(hun)合後使(shi)用，讓細(xi)胞有壹個(ge)適(shi)應(ying)期(qi)。

- 培養液(ye)配(pei)制(zhi)和(he)儲(chu)存不(bu)當(dang)，如(ru)pH值(zhi)過堿(jian)、谷氨酰胺含(han)量不足(zu)等原(yuan)因(yin)：註(zhu)意正(zheng)確配(pei)制(zhi)培養液(ye)並儲存好(hao)，確保培養液(ye)的質量。

2. 傳代(dai)後細(xi)胞變形(xing)

原(yuan)因(yin)及解(jie)決(jue)方法如(ru)下(xia)：

- 變形(xing)但(dan)細(xi)胞仍(reng)在(zai)生(sheng)長：可(ke)能(neng)是血(xue)清批次(ci)不壹樣導(dao)致(zhi)的，建議使用同壹批次的血清，若更(geng)換血清則需(xu)要(yao)與(yu)原血清混(hun)合並逐(zhu)漸(jian)過(guo)渡(du)。

- 變形(xing)且(qie)細(xi)胞不長且碎(sui)片增(zeng)多(duo)：可(ke)能(neng)是傳(chuan)代(dai)操作過(guo)程(cheng)中的損(sun)傷(shang)，如消(xiao)化不當(dang)或(huo)細(xi)胞受到(dao)汙(wu)染(ran)。應(ying)根(gen)據(ju)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)調(tiao)整(zheng)消化時(shi)間(jian)，嚴格進行(xing)無菌操作，確保細(xi)胞無外源(yuan)性(xing)汙(wu)染(ran)。

3. 細(xi)胞生(sheng)長周期(qi)變慢(man)，邊養邊漂

原因(yin)及解(jie)決(jue)方法如(ru)下(xia)：

- 細(xi)胞傳代(dai)時(shi)密(mi)度太(tai)稀(xi)或(huo)太(tai)密(mi)：建(jian)議(yi)在(zai)細(xi)胞融(rong)合(he)度(du)達(da)到(dao)80%左右進(jin)行(xing)傳代(dai)，傳代(dai)密度(du)適(shi)度，密(mi)度(du)過低(di)會延長生(sheng)長周期(qi)，密(mi)度(du)過(guo)高(gao)會造(zao)成(cheng)細(xi)胞接(jie)觸抑制(zhi)。

- 傳代(dai)操作不(bu)當(dang)：根(gen)據(ju)細(xi)胞特性調整(zheng)消化時(shi)間(jian)，觀察(cha)細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)並有少量細(xi)胞脫落(luo)後終(zhong)止消化，頻繁(fan)換液和(he)清洗細(xi)胞也(ye)會影響(xiang)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，常(chang)規(gui)換液時(shi)間(jian)間隔為2-3天。

4. 傳(chuan)代(dai)後細(xi)胞成團

解決(jue)方法如(ru)下(xia)：

- 低(di)密度(du)接(jie)種，延(yan)長換液時(shi)間(jian)，避免細(xi)胞脫落(luo)。

- 使(shi)用多(duo)聚(ju)賴氨酸包被培養器(qi)皿(min)，增(zeng)加細(xi)胞貼壁的牢固度，減少(shao)細(xi)胞聚(ju)集(ji)成團(tuan)的幾率(lv)。

- 重新(xin)鋪(pu)板，並更(geng)換新(xin)配(pei)制(zhi)的培養基，增(zeng)加血(xue)清的比(bi)例但(dan)不(bu)超過5%。

- 接(jie)種時(shi)減(jian)少培養基量，以(yi)加快細(xi)胞貼壁的速度，等待(dai)細(xi)胞貼壁後再(zai)補加培養基到(dao)正常(chang)用量。

5. 貼壁(bi)細(xi)胞培養時(shi)細(xi)胞出現空泡(pao)

原(yuan)因(yin)及解(jie)決(jue)方法如(ru)下(xia)：

- 正常(chang)的細(xi)胞活動(dong)：有(you)些細(xi)胞會出現(xian)正常(chang)的自噬行為或(huo)其他(ta)膜泡(pao)活動(dong)，無需(xu)特(te)殊處(chu)理(li)。

- 細(xi)胞營養(yang)不(bu)良：可(ke)能(neng)是由(you)血清不適(shi)應(ying)、培養基成分改(gai)變或(huo)換液不及時(shi)等原(yuan)因(yin)導(dao)致(zhi)的，可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)更(geng)換適(shi)合的血清或(huo)及(ji)時(shi)換液來解決(jue)。

- 細(xi)胞受損(sun)：註(zhu)意培養條(tiao)件和(he)操作手(shou)法(fa)，避(bi)免機(ji)械損(sun)傷(shang)或(huo)pH值(zhi)過高(gao)或(huo)過(guo)低(di)等情(qing)況(kuang)。

通(tong)過(guo)了(le)解(jie)這(zhe)些常見(jian)的貼壁問(wen)題及解決(jue)方法，可(ke)以(yi)幫(bang)助科研(yan)人(ren)員在貼(tie)壁(bi)細(xi)胞培養中(zhong)更(geng)好(hao)地(di)處(chu)理(li)各種技術(shu)難題，從而(er)獲得(de)高質量的細(xi)胞培養結(jie)果。

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