生(sheng)物制(zhi)藥生(sheng)產過程(cheng)中(zhong)的雜(za)質(zhi)去除(chu)及(ji)驗(yan)證技(ji)術(shu)

  生(sheng)物制(zhi)藥的生(sheng)產過程(cheng)中(zhong)，雜(za)質(zhi)產生(sheng)是不可(ke)避(bi)免(mian)的。這(zhe)些雜(za)質(zhi)包(bao)括宿主細胞來源(yuan)的核(he)酸、宿主細胞蛋白(bai)和潛在(zai)的病(bing)毒，以及(ji)工藝中(zhong)的溶(rong)出(chu)析出(chu)物等。這些(xie)雜(za)質(zhi)會(hui)對制(zhi)品的質(zhi)量(liang)和安(an)全性產生(sheng)負(fu)面(mian)影(ying)響，因(yin)此需(xu)要(yao)在後(hou)續的純(chun)化(hua)過程(cheng)中(zhong)進(jin)行(xing)去除(chu)。本(ben)文將介(jie)紹驗(yan)證這些雜質(zhi)去除(chu)的方(fang)法以及(ji)壹些實(shi)現(xian)過程(cheng)中(zhong)的技(ji)術(shu)挑(tiao)戰。

  宿主細胞蛋白(bai)是壹種(zhong)常(chang)見的雜(za)質(zhi)，可(ke)能引起(qi)制(zhi)品的嚴(yan)重免(mian)疫反(fan)應(ying)。為了去除(chu)這(zhe)些雜(za)質(zhi)，可(ke)以使(shi)用SDS-PAGE、酶(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附（ELISA）方(fang)法和高效液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)（HPLC）等技(ji)術(shu)。其(qi)中(zhong)，ELISA是目(mu)前(qian)用於(yu)活性藥物成(cheng)分放(fang)行(xing)檢(jian)測(ce)以及(ji)中(zhong)間體樣品檢(jian)測(ce)的行(xing)業(ye)標(biao)準(zhun)。然而(er)，ELISA的靈(ling)敏度(du)通(tong)常(chang)受(shou)到(dao)限(xian)制(zhi)。因(yin)此，使(shi)用縮(suo)小(xiao)模型(xing)進(jin)行(xing)的放(fang)射(she)性標(biao)記研究方(fang)法可(ke)以用於(yu)確定HCP去除(chu)的能(neng)力(li)。這種(zhong)方(fang)法需(xu)要(yao)制(zhi)備(bei)代(dai)表性的放(fang)射(she)性標(biao)記的HCP樣(yang)品，使用125I標(biao)記實現(xian)。挑(tiao)戰性實驗(yan)可以在(zai)單(dan)個的層析步(bu)驟(zhou)上或順序(xu)執(zhi)行的單(dan)元操(cao)作上進行(xing)。使(shi)用縮(suo)小(xiao)模型(xing)的挑(tiao)戰性實驗(yan)也(ye)通(tong)常(chang)用於(yu)驗(yan)證異染色(se)質(zhi)達(da)標(biao)性的去除(chu)。

  另(ling)壹個重要(yao)的雜(za)質(zhi)是細胞培(pei)養添(tian)加(jia)劑(ji)。這(zhe)些(xie)添(tian)加(jia)劑(ji)會(hui)提(ti)高(gao)表達(da)水(shui)平(ping)或維持細胞系的穩定性，但(dan)對人體(ti)可(ke)能具有潛在(zai)的毒性、生(sheng)物活性或免(mian)疫源(yuan)性。因(yin)此，在(zai)純(chun)化(hua)過程(cheng)中(zhong)需(xu)要(yao)證明它(ta)們的清(qing)除(chu)率(lv)。例如(ru)，甲氨蝶(die)呤(ling)、抗生(sheng)素和生(sheng)長因(yin)子等成分，經放(fang)射(she)性標(biao)記後(hou)使(shi)用縮(suo)小(xiao)模型(xing)進(jin)行(xing)挑(tiao)戰性實驗(yan)來證明各(ge)個步(bu)驟(zhou)的清(qing)除(chu)率(lv)。根據(ju)添(tian)加(jia)到(dao)細胞培(pei)養液(ye)中(zhong)的起(qi)始量(liang)和清(qing)除(chu)率(lv)，可以估(gu)算(suan)出(chu)活性藥物成(cheng)分中(zhong)的這(zhe)些組(zu)分的含量(liang)，並(bing)進(jin)行(xing)安(an)全性評估(gu)。

  來(lai)源(yuan)於(yu)細胞培(pei)養的產品需要(yao)證明純(chun)化(hua)工藝具有去除(chu)病(bing)毒的能(neng)力(li)。病毒的去除(chu)驗(yan)證需要(yao)在縮(suo)小(xiao)模(mo)型(xing)上進行(xing)，類(lei)似於用於(yu)HCP和DNA去除(chu)的驗(yan)證。選擇壹組(zu)模(mo)式病毒進(jin)行(xing)挑戰性實驗(yan)。這些(xie)模式病毒要(yao)反應(ying)不同(tong)大小和形(xing)狀的範圍(wei)，並包括114 DNA和RNA病毒和/或包(bao)膜或(huo)非包膜病(bing)毒家(jia)族(zu)。基於細胞培(pei)養物中(zhong)的RVLP的數(shu)量(liang)，純(chun)化(hua)過程(cheng)中(zhong)病(bing)毒效價的總(zong)體降(jiang)低(di)要(yao)比起(qi)始材(cai)料(liao)中(zhong)可能存在(zai)的水(shui)平(ping)高幾(ji)個數量(liang)級(ji)。

  純(chun)化(hua)工藝也(ye)會(hui)產生(sheng)壹些自身的雜(za)質(zhi)，包(bao)括層析柱(zhu)脫落的配(pei)基，比如(ru)蛋(dan)白(bai)A配(pei)基。必須證明純(chun)化(hua)工藝中(zhong)蛋(dan)白A能夠(gou)去除(chu)到(dao)很低(di)並且(qie)水(shui)平(ping)穩定。另(ling)外(wai)，純(chun)化(hua)過程(cheng)中(zhong)還會(hui)產生(sheng)內毒素(su)等雜質(zhi)，這(zhe)些雜質(zhi)是衍生(sheng)自細菌（比(bi)如(ru)大腸桿(gan)菌）的脂(zhi)多糖(tang)成分。它(ta)們也(ye)有可能(neng)通(tong)過受(shou)汙染的原材(cai)料(liao)引(yin)入。因(yin)此，需(xu)要(yao)使用縮(suo)小(xiao)模型(xing)進(jin)行(xing)雜(za)質(zhi)去除(chu)驗(yan)證研究。

  在實(shi)現(xian)雜(za)質(zhi)去除(chu)過程(cheng)中(zhong)，還需(xu)要(yao)克服(fu)許多(duo)技(ji)術(shu)挑(tiao)戰。例如(ru)，ELISA方(fang)法的靈(ling)敏度(du)限(xian)制(zhi)、縮小(xiao)模型(xing)標(biao)記問題(ti)、足(zu)夠代(dai)表性縮小模型(xing)構(gou)建、診斷的選(xuan)擇以及(ji)去除(chu)方(fang)案(an)的制(zhi)定等。此外(wai)，在(zai)縮小模(mo)型(xing)中(zhong)挑(tiao)戰性實驗(yan)的設(she)計和驗(yan)證等也(ye)是關鍵(jian)。

  總(zong)之，在(zai)生(sheng)物制(zhi)藥的生(sheng)產過程(cheng)中(zhong)，驗(yan)證雜質(zhi)去除(chu)的能(neng)力(li)非常(chang)關鍵(jian)，因(yin)為它(ta)們可能會對(dui)制(zhi)品的安(an)全性和質(zhi)量(liang)產生(sheng)負(fu)面(mian)影(ying)響。通(tong)過選擇合(he)適(shi)的驗(yan)證方(fang)法和克服(fu)實現(xian)過程(cheng)中(zhong)的技(ji)術(shu)挑(tiao)戰，可以保(bao)證最終的制(zhi)品符(fu)合監(jian)管要(yao)求(qiu)，並確保(bao)制(zhi)品的安(an)全和品質(zhi)。

      蘇(su)州阿(e)爾法生(sheng)物是壹家集生(sheng)物制(zhi)藥行(xing)業(ye)儀器設(she)備(bei)、實(shi)驗(yan)耗(hao)材(cai)和實驗(yan)試劑(ji)供(gong)應(ying)於(yu)壹身的專(zhuan)業(ye)公(gong)司(si)。阿(e)爾法生(sheng)物產品覆蓋(gai)生(sheng)命科(ke)學(xue)研究、生(sheng)物制(zhi)藥、環(huan)境監(jian)測、食品安(an)全等領(ling)域(yu)，包括的實(shi)驗(yan)室(shi)儀器設(she)備(bei)有生(sheng)物顯(xian)微鏡、細胞培(pei)養系統(tong)、生(sheng)物反(fan)應(ying)器、蛋(dan)白電(dian)泳(yong)系統(tong)、數字PCR儀、葡(pu)萄(tao)糖(tang)-乳(ru)酸(suan)分析(xi)儀(yi)、國產離心機、高(gao)速(su)冷(leng)凍離心機、超(chao)速(su)離心機、臺式高速(su)離(li)心機、低(di)速(su)離(li)心機、落(luo)地(di)式離心機、迷妳(ni)離(li)心機、真(zhen)空(kong)濃縮(suo)儀、恒(heng)溫(wen)恒(heng)濕(shi)培(pei)養箱(xiang)、生(sheng)物反(fan)應(ying)器、細菌培(pei)養箱(xiang)研(yan)磨儀(yi)等，實驗(yan)耗(hao)材(cai)常(chang)用的nest培(pei)養瓶(ping)、rainin移液槍tip頭(tou)、離(li)心管、PCR管、8聯排管、三(san)角搖瓶(ping)、培(pei)養皿等，實驗(yan)試劑(ji)包(bao)括天根(gen)試劑(ji)盒(he)、質(zhi)粒抽提(ti)試(shi)劑(ji)盒(he)、蛋(dan)白(bai)抗體、碧雲天試劑(ji)、阿(e)拉丁(ding)試(shi)劑(ji)、腫瘤(liu)細胞株、基因(yin)編輯(ji)細胞、支(zhi)原體(ti)清(qing)除(chu)試(shi)劑(ji)盒(he)等。阿(e)爾法生(sheng)物壹直與(yu)生(sheng)物制(zhi)藥設(she)備(bei)廠(chang)商以及(ji)壹些新(xin)興(xing)科(ke)技(ji)公(gong)司(si)保(bao)持(chi)著深度(du)的合(he)作關系，這(zhe)也(ye)為產品供(gong)應(ying)和技(ji)術(shu)支(zhi)持提(ti)供(gong)了有力(li)保(bao)障(zhang)。