細胞雕亡(wang)的形(xing)態(tai)學(xue)檢測方法

更新時間(jian)：2023-01-04

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細胞雕亡(wang)檢測常用的儀(yi)器設(she)備主(zhu)要(yao)有(you) 光(guang)學(xue)顯微(wei)鏡、倒置(zhi)顯微(wei)鏡、熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡、共(gong)聚(ju)焦激光(guang)掃(sao)描(miao)顯微(wei)鏡、透(tou)射電子顯微(wei)鏡等(deng)進(jin)行(xing)觀(guan)察。

壹、光(guang)學(xue)顯微(wei)鏡和倒置(zhi)顯微(wei)鏡

① 未染色細(xi)胞：雕亡(wang)細(xi)胞的體(ti)積變小、變形(xing)，細胞膜(mo)完(wan)整但(dan)出現發泡(pao)現象(xiang)，細(xi)胞雕亡(wang)

晚(wan)期可見(jian)雕亡(wang)小體(ti)。貼(tie)壁(bi)細(xi)胞出現皺縮、變圓、脫落。

② 染色細(xi)胞：常用吉(ji)姆(mu)薩染色、瑞(rui)氏(shi)染色等(deng)。雕亡(wang)細(xi)胞的染色質濃縮、邊(bian)緣化(hua)，核(he)膜(mo)

裂解(jie)、染色質分割(ge)成塊(kuai)狀(zhuang)和雕亡(wang)小體(ti)等(deng)典型(xing)的雕亡(wang)形(xing)態(tai)。

二、熒(ying)光(guang)顯微(wei)鏡和共(gong)聚(ju)焦激光(guang)掃(sao)描(miao)顯微(wei)鏡

壹般以(yi)細胞核(he)染色質的形(xing)態(tai)學(xue)改變為(wei)指(zhi)標來評(ping)判細胞雕亡(wang)的進(jin)展(zhan)情(qing)況。常用的 DNA 特(te)

異性(xing)染料有(you)：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種(zhong)種(zhong)染料與(yu)

DNA 的結(jie)合(he)是(shi)非(fei)嵌(qian)入(ru)式(shi)的，主(zhu)要(yao)結(jie)合(he)在(zai) DNA 的 A-T 堿基(ji)區。紫外光(guang)激發時發射明亮的藍(lan)

色熒(ying)光(guang)。Hoechst 是(shi)與 DNA 特(te)異結(jie)合(he)的活性(xing)染料，儲存液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)配(pei)成1 mg/ml 的濃度(du)，使

用時用(yong) PBS 稀(xi)釋，終濃度(du)為(wei)10 μg/ml。DAPI 為(wei)半(ban)通透(tou)性(xing)，用(yong)於(yu)常規固(gu)定細(xi)胞的染色。儲存

液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)配(pei)成1 mg/ml 的濃度(du)，使用終(zhong)濃度(du)壹(yi)般(ban)為(wei)10 μg/ml。

結(jie)果評判：細胞雕亡(wang)過(guo)程(cheng)中細胞核(he)染色質的形(xing)態(tai)學(xue)改變分為(wei)三期：Ⅰ期(qi)的細(xi)胞核(he)呈(cheng)波

紋狀(zhuang)（rippled）或(huo)呈(cheng)折縫(feng)樣(yang)（creased），部分染色質出現濃縮狀(zhuang)態(tai)；Ⅱa 期細(xi)胞核(he)的染色質

高度(du)凝(ning)聚(ju)、邊(bian)緣化(hua)；Ⅱb 期(qi)的細(xi)胞核(he)裂解(jie)為(wei)碎塊(kuai)，產(chan)生雕亡(wang)小體(ti)(圖(tu)1)。

三、透(tou)射電子顯微(wei)鏡觀察

結果評判：雕亡(wang)細(xi)胞體(ti)積變小，細(xi)胞質濃縮。雕亡(wang)Ⅰ期(qi)（pro-apoptosis nuclei）的細(xi)胞

核(he)內(nei)染色質高度(du)盤繞，出現許多(duo)稱為(wei)氣(qi)穴現象(xiang)（cavitations）的空(kong)泡(pao)結構(gou)(圖(tu)2)；Ⅱa 期細胞

核(he)的染色質高度(du)凝(ning)聚(ju)、邊(bian)緣化(hua)；細(xi)胞雕亡(wang)的晚(wan)期，細胞核(he)裂解(jie)為(wei)碎塊(kuai)，產(chan)生雕亡(wang)小體(ti)。

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