原代(dai)細(xi)胞的(de)分(fen)離純(chun)化方法(fa)介(jie)紹

原代(dai)細(xi)胞的(de)體外(wai)培(pei)養(yang)過程(cheng)中，其生長(chang)時(shi)往(wang)往(wang)會混(hun)有多種不同類(lei)型(xing)的(de)細(xi)胞。比(bi)如來(lai)自(zi)皮(pi)膚組織的(de)細(xi)胞進(jin)行(xing)培養(yang)時(shi)可(ke)以(yi)出(chu)現(xian)表(biao)皮(pi)細(xi)胞與纖(xian)維下撥同時(shi)生長(chang)的(de)情(qing)況。所以(yi)原代(dai)細(xi)胞的(de)分(fen)離純(chun)化在(zai)初(chu)期(qi)細(xi)胞培(pei)養(yang)時(shi)比較(jiao)關鍵(jian)。
 

原代(dai)細(xi)胞的(de)純(chun)化方法(fa)主要(yao)有以(yi)下幾種：

壹(yi)、自(zi)然(ran)純(chun)化法(fa)：

原代(dai)細(xi)胞由(you)於(yu)具有較強的增(zeng)殖(zhi)能(neng)力(li)，因此可(ke)以(yi)采(cai)用(yong)通過長(chang)期(qi)多代(dai)傳代(dai)生物方式單(dan)獨(du)培(pei)養(yang)某壹(yi)類(lei)型(xing)的(de)目(mu)的(de)細(xi)胞，靠自(zi)然優(you)化的(de)方式進(jin)行(xing)細(xi)胞純(chun)化(hua)，這種方法(fa)的缺陷(xian)是(shi)無(wu)法(fa)按實驗需求(qiu)去(qu)自由(you)去(qu)自由(you)選(xuan)擇(ze)要(yao)培養(yang)的細(xi)胞。而(er)且(qie)培養(yang)周(zhou)期較(jiao)長(chang)，適(shi)合應(ying)用於(yu)腫(zhong)瘤細(xi)胞、成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞等(deng)細(xi)胞系建立使用(yong)。
 

二(er)、人(ren)工(gong)純化(hua)法(fa)：

人(ren)工(gong)純化(hua)的(de)方法(fa)在(zai)細(xi)胞純(chun)化(hua)方面(mian)應(ying)用較為廣(guang)泛(fan)，它(ta)是(shi)通過人(ren)工(gong)幹預的(de)方式，營(ying)造(zao)利於(yu)目(mu)的(de)細(xi)胞生(sheng)長(chang)的(de)環境(jing)條件，從(cong)而抑(yi)制(zhi)目(mu)的(de)外(wai)細(xi)胞的(de)生(sheng)長(chang)從(cong)而達到細(xi)胞純(chun)化(hua)的壹(yi)種純化方式。目(mu)前(qian)通用(yong)的主(zhu)要(yao)有以(yi)下幾種：

酶(mei)消化(hua)純(chun)化(hua)法(fa)：

根據(ju)上皮(pi)細(xi)胞與成纖(xian)維細(xi)胞對(dui)胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)的耐受(shou)能(neng)力(li)是不(bu)相(xiang)同(tong)的，所以(yi)采(cai)用(yong)酶(mei)消化(hua)的(de)方式可(ke)以(yi)使這(zhe)兩(liang)種細(xi)胞有效分(fen)開(kai)。這種純化方法(fa)不僅(jin)適用於(yu)貼(tie)壁細(xi)胞，同(tong)樣(yang)適用於(yu)半貼(tie)壁細(xi)胞和(he)黏(nian)附細(xi)胞等(deng)。
 

操(cao)作步(bu)驟(zhou)如下：

1.將0.25%胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)分兩(liang)次(ci)加入(ru)25ML的細(xi)胞培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，並輕搖勻(yun)。每(mei)次(ci)加入(ru)的量(liang)約為1ML左(zuo)右(you)，當(dang)胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)覆蓋細(xi)胞表(biao)面(mian)時(shi)，緩緩倒出(chu)。

2.擰(ning)上瓶(ping)蓋(gai)進行(xing)細(xi)胞消(xiao)化(hua)，在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察到纖(xian)維細(xi)胞部(bu)分(fen)脫落(luo)時(shi)，即可(ke)加入(ru)培養(yang)基停止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3.在(zai)培(pei)養(yang)瓶上標註(zhu)不同(tong)類(lei)型(xing)的(de)生(sheng)長(chang)區(qu)域。加入(ru)培養(yang)基繼續(xu)進(jin)行多次(ci)傳代(dai)培養(yang)後即(ji)可(ke)分離。

機械刮(gua)分(fen)法(fa)：

在(zai)進(jin)行(xing)貼(tie)壁培養(yang)時(shi)，不同(tong)類(lei)型(xing)的(de)細(xi)胞往(wang)往(wang)會成(cheng)片(pian)區(qu)狀混(hun)雜(za)生長(chang)，我們可(ke)以(yi)使用(yong)細(xi)胞刮(gua)去(qu)除(chu)非目(mu)的(de)細(xi)胞區(qu)域(yu)，具體操(cao)作步(bu)驟(zhou)如下 ：

1.將培養(yang)瓶置於(yu)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下，找出(chu)不(bu)同細(xi)胞類(lei)型(xing)的(de)生(sheng)長(chang)區(qu)域並用矽膠細(xi)胞刮(gua)劃(hua)分非目(mu)的(de)細(xi)胞使其(qi)懸浮於(yu)培養(yang)基中，操(cao)作是需(xu)要註(zhu)意(yi)不(bu)要(yao)傷(shang)及(ji)目(mu)的(de)細(xi)胞。

2.加(jia)入(ru)適量(liang)培(pei)養(yang)基進行沖洗(xi)，反(fan)而後繼續(xu)加(jia)入(ru)培養(yang)基進行培養(yang)，如此(ci)反(fan)復(fu)多次(ci)即可(ke)達到(dao)純化(hua)分(fen)離效(xiao)果。
 

反復(fu)貼(tie)壁培養(yang)法(fa)：

由(you)於(yu)成纖(xian)維細(xi)胞的(de)貼(tie)附速度優(you)於(yu)上皮(pi)細(xi)胞，壹(yi)般情(qing)況下，10-30分鐘(zhong)即可(ke)完成(cheng)貼(tie)壁過程(cheng)，而上皮(pi)細(xi)胞則需較(jiao)長(chang)時(shi)間才能(neng)完(wan)成(cheng)貼(tie)壁生長(chang)。利(li)用這壹(yi)原理分離純(chun)化細(xi)胞步(bu)驟(zhou)如下：

1.在(zai)培(pei)養(yang)瓶內(nei)加入(ru)適量(liang)的(de)培養(yang)基，混(hun)入(ru)細(xi)胞懸(xuan)液常溫(wen)下靜(jing)置20分(fen)鐘(zhong)。

2.當顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀察細(xi)胞開(kai)始(shi)出(chu)現(xian)貼(tie)壁時(shi)，緩緩搖動(dong)後(hou)，將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)浮(fu)液，輕導另壹(yi)個(ge)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，重(zhong)復(fu)第(di)壹(yi)步(bu)操(cao)作。

3.重(zhong)復(fu)多次(ci)後即(ji)可(ke)實現(xian)細(xi)胞的(de)純(chun)化和(he)分離。

原代(dai)細(xi)胞的(de)分(fen)離和(he)純化(hua)對(dui)於(yu)後續(xu)的(de)傳代(dai)培養(yang)起著重(zhong)要的(de)作用，也會直(zhi)接(jie)影(ying)響到細(xi)胞系的穩(wen)定性(xing)，所以(yi)也可(ke)以(yi)多種方法(fa)綜合(he)使用(yong)以(yi)增加(jia)細(xi)胞純(chun)化(hua)力(li)度，盡(jin)可(ke)能(neng)保(bao)證原代(dai)細(xi)胞的(de)可(ke)靠壹(yi)致(zhi)性(xing)。
 

蘇州(zhou)阿爾法(fa)生物實驗器(qi)材(cai)有限公(gong)司(si)13年(nian)專註(zhu)於(yu)生物實驗室儀(yi)器(qi)設備及(ji)實驗耗材的(de)供(gong)應(ying)，產品(pin)不僅包(bao)括(kuo)生(sheng)物反(fan)應(ying)器(qi)、發(fa)酵(jiao)罐、細(xi)胞搖床等細(xi)胞培(pei)養(yang)等相(xiang)關設備，還配(pei)套(tao)提供(gong)離心(xin)管、培(pei)養(yang)瓶、培(pei)養(yang)皿、搖瓶等實驗室耗材(cai)。庫(ku)存(cun)充裕，專車(che)配(pei)送。